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    正交試驗優(yōu)選柴胡中柴胡皂苷的閃式提取工藝

    2015-03-13 01:48:20陳良勝方應(yīng)權(quán)
    關(guān)鍵詞:閃式柴胡皂苷紫花

    陳良勝 方應(yīng)權(quán)

    (1 河南省新縣人民醫(yī)院藥劑科,新縣 465550;2 重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系,重慶 404120)

    紫花大葉柴胡(Bupleurum longiradiatum var. porphyranthum) 為傘形科柴胡屬植物的一種,多年生草本,為三峽區(qū)域民間用藥,在三峽庫區(qū)的巫溪、石柱、巴東和巫山等地使用較為廣泛,療效確切,有發(fā)表祛風(fēng)、清泄心火、清肝利膽、通經(jīng)之功效,主治肝氣不舒、虛勞骨蒸、月經(jīng)不調(diào)、感冒、黃疸等癥[1-2]。目前已知該藥材根部主要含有柴胡皂苷a、c、d,此外根中尚含有揮發(fā)油,植物甾醇和有機(jī)酸等,莖葉、地上部分尚含有黃酮類化合物[3]。柴胡皂苷的提取方法很多,多為傳統(tǒng)提取方法,提取耗時費(fèi)力。閃式提取法紫花大葉柴胡中柴胡皂苷的研究未見文獻(xiàn)報道。近幾年來閃式提取在中草藥有效成分提取方面發(fā)展迅速、潛力巨大,其主要特點(diǎn)是高效節(jié)能、操作簡便、省時經(jīng)濟(jì)、適應(yīng)范圍廣,且提取溫度低,對有效成分的破壞小。相比傳統(tǒng)方法有著巨大優(yōu)勢。

    1 材料和儀器

    1.1 材料及鑒定紫花大葉柴胡[4-5]2014年7月下旬采集于重慶巫溪海拔約1500 m的紅池壩,經(jīng)重慶師范學(xué)院陳邵成教授鑒定為傘形科 (Umbelliferae) 柴胡屬紫花大葉柴胡。

    2 閃式提取法正交實驗

    2.1 正交試驗各個因素水平的確定[6-7]選取提取溶液濃度,提取時間及料液比三個因素對黃酮提取率進(jìn)行考察,依次對單因素進(jìn)行考察,以確定每個因素的水平。松針黃酮為一類極性較大的有機(jī)化合物,一般提取方法采用不同濃度的乙醇溶液,本研究采用50%,60%,70%,80%濃度的乙醇溶液,每個梯度平行6次試驗,依據(jù)上述黃酮的測定方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乙醇濃度為70%時,黃酮含量較高,因此選擇60%,70%,80%作為乙醇濃度的三個水平。同理采用同樣的方法,確定料液比和提取時間的水平。

    2.2 閃式提取法 選取影響閃式提取工藝的三個因素,即乙醇濃度(A),料液比(B),提取時間(C) 為考察因素,每個因素設(shè)計三個水平,選取L9(34)進(jìn)行實驗,取柴胡藥材粗粉50 g,根據(jù)因素水平表L9(34),進(jìn)行閃式提取,過濾,濾液定溶至1000 mL量瓶中,進(jìn)行含量測定。實驗安排及結(jié)果見表1、2。

    表1 因素水平表

    表2 柴胡提取工藝正交實驗結(jié)果 (mg/g)

    圖1 提取因素對提取率影響表

    由上表可知A2B2C2為閃式提取最佳工藝

    3 方差分析

    將實驗數(shù)據(jù)代入SPASS14軟件中,進(jìn)行方差分析,見表3。結(jié)果表明:A.B因素具有顯著差異,A2>A3>A1,故選擇A2;B因素B2>B3>B1,故選擇B2;C因素?zé)o顯著性差異,根據(jù)能耗和提取效率考慮選擇C2,因此根據(jù)表2中含量測定的結(jié)果顯示,采用A2B2C2工藝條件,柴胡皂苷的含量最高,故定為最優(yōu)工藝,即以12倍量75%乙醇,閃式提取2.0 min。

    表3 方差分析表

    4 驗證實驗

    為驗證優(yōu)選工藝的可靠性和重現(xiàn)性,取柴胡150 g,按最優(yōu)工藝進(jìn)行閃式提取,平行操作6份,柴胡皂苷含量分別為15.42,15.86,16.01,15.46,16.02,15.43(mg/g),RSD<2.01%,表明該工藝穩(wěn)定可行。

    5 乙醇回流提取法[8]

    柴胡在工業(yè)上廣泛采取加熱回流提取有效成分柴胡皂苷,根據(jù)文獻(xiàn)報道加熱回流提取柴胡中柴胡皂苷的優(yōu)化工藝為乙醇體積濃度75%,12倍量乙醇,一般提取三次,每次3 h。按此條件制備3批樣品,并按照“柴胡皂苷的含量測定”方法測定,計算平均結(jié)果與閃式提取的優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行對比,見表4。

    表4 閃式提取與加熱回流提取的比較

    從表4可以看出,閃式提取法與傳統(tǒng)加熱回流提取法相比,在提取乙醇濃度基本相同的情況下,提取時間僅為后者的1/90,且閃式提取法柴胡皂苷含量較高。

    6 討論

    通過試驗得到了柴胡皂苷閃式提取的最優(yōu)工藝條件,即75%的乙醇,料液比1∶12,閃式提取2.0 min。該方法提取效率高、提取時間短、操作簡單、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)。與傳統(tǒng)提取方法相比,閃式提取時間短,僅為乙醇加熱回流提取的1/90,且閃式提取法柴胡皂苷含量較高。采用正交設(shè)計的方法,應(yīng)用閃式提取新技術(shù),優(yōu)選出紫花大葉柴胡中柴胡皂苷提取新工藝是有效可行的。

    [1]朱蘭香,劉世增,顧振綸.柴胡皂苷的藥理作用及抗肝纖維化作用[J].中草藥,2002,33(10):附5.

    [2]葉曉平,宋純清.柴胡皂苷藥理研究進(jìn)展[J].中草藥,2004,35(24):1434-1436.

    [3]賈琦,張如意.柴胡屬植物中皂苷化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報,1989,24(12):961-971.

    [4]陳紹成.三峽庫區(qū)柴胡原植物調(diào)查及藥材鑒定[J].中華臨床防治醫(yī)學(xué)雜志,2007,2(4):54-55.

    [5]單人驊,李穎.植物分類學(xué)報[M].1974,12(3):270.

    [6]付克,王建宮,閆廣利.高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定柴芩清肝方提取物中柴胡皂苷的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(2):57-58.

    [7]王麗娜,李云濤,黨長萍.HPLC法測定加味四逆顆粒中柴胡皂苷a的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2006,12(5):67-69.

    [8]霍務(wù)貞,孫嚴(yán)彤,朱盛山.柴胡有效成分提取條件的研究[J].廣東藥學(xué),2005,15(4):122.

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