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    過(guò)敏性哮喘患者外周血細(xì)胞因子水平變化及臨床意義*

    2015-03-12 08:44:36申衛(wèi)紅史建平
    重慶醫(yī)學(xué) 2015年4期
    關(guān)鍵詞:過(guò)敏性外周血細(xì)胞因子

    申衛(wèi)紅,龔 芳,朱 嵐,史建平

    (南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.呼吸科,江蘇無(wú)錫214041)

    過(guò)敏性哮喘是由多種細(xì)胞,如Th17細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)及其細(xì)胞因子共同參與的呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病,其發(fā)病率在呼吸科患者中呈上升趨勢(shì)。近年的研究發(fā)現(xiàn),Th17細(xì)胞和Treg分泌的細(xì)胞因子在過(guò)敏性哮喘發(fā)病中發(fā)揮了重要作用。Th17細(xì)胞主要分泌細(xì)胞因子IL-17和IL-22;而Treg是一類具有免疫抑制功能的T淋巴細(xì)胞,通過(guò)分泌細(xì)胞因子IL-10的方式對(duì)免疫細(xì)胞發(fā)揮作用[1-3]。國(guó)外的許多研究表明,改變外周血中IL-17、IL-22和IL-10的表達(dá)可以影響過(guò)敏性哮喘患者的炎癥反應(yīng)程度,從而參與哮喘的發(fā)生[4-5]。本研究主要通過(guò)檢測(cè)過(guò)敏性哮喘患者外周血中細(xì)胞因子IL-17、IL-22和IL-10的表達(dá)水平,從而探討其在過(guò)敏性哮喘患者發(fā)病機(jī)制中的意義及其與嚴(yán)重程度的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2012年3月至2013年5月在本院呼吸科住院治療的過(guò)敏性哮喘患者40例,其哮喘癥狀符合2007年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組修訂的《支氣管哮喘防治指南》中診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)其臨床癥狀,所用藥物及呼氣峰流速將哮喘分為輕、中、重度哮喘組,其中男28例,女12例,平均年齡(38.2±11.5)歲。本院健康體檢者30例作對(duì)照組,男15例,女15例,平均年齡(30.3±8.1)歲,均無(wú)過(guò)敏性疾病和近期無(wú)呼吸道感染,近1個(gè)月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素,肺功能正常等。所有參加研究的對(duì)象均獲得了知情同意權(quán)。

    1.2 方法

    1.2.1 標(biāo)本采集 各哮喘組患者和健康者分別于清晨空腹抽取肘部靜脈血2mL各2份,一份肝素抗凝,一份分離血清,待檢。

    1.2.2 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離培養(yǎng) 以聚蔗糖-泛影葡胺液分離患者和健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),PBS洗滌后以(3~5)×105個(gè)/孔的細(xì)胞濃度接種于24孔培養(yǎng)板,以含10%小牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),72h后收集培養(yǎng)上清液,待檢。

    1.2.3 外周血細(xì)胞因子水平檢測(cè) 細(xì)胞因子IL-17、IL-22、IL-10的檢測(cè)采用ELISA試劑盒(美國(guó)BD公司),檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

    1.2.4 血清IgE水平及全血嗜酸性粒細(xì)胞(EO)比率的檢測(cè) 空腹IgE定量測(cè)定采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(羅氏全自動(dòng)免疫分析儀),EO比率的檢測(cè)采用全自動(dòng)血液分析儀(日本SYSMEX全自動(dòng)血液分析儀),操作嚴(yán)格按照儀器程序測(cè)定。

    1.2.5 細(xì)胞因子與哮喘嚴(yán)重程度相關(guān)性分析 采用Pearson相關(guān)性分析IL-17、IL-22、IL-10與過(guò)敏性哮喘嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,所得計(jì)量資料以±s表示。兩組間的均數(shù)比較采用組間t檢驗(yàn),多組間比較采用one way ANOVA檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 外周血細(xì)胞因子IL-17、IL-22、IL-10的檢測(cè) 輕、中、重度哮喘組IL-17、IL-22的水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05),而IL-10的水平均明顯低于對(duì)照組(P<0.05),見(jiàn)表1。

    表1 各組外周血IL-17、IL-22、IL-10表達(dá)量的比較(±s,pg/mL)

    表1 各組外周血IL-17、IL-22、IL-10表達(dá)量的比較(±s,pg/mL)

    組別 n IL-17 IL-22 IL-10輕度哮喘組10 20.18±6.36 320.24±119.11 40.03±15.23中度哮喘組 20 37.37±9.87 360.35±101.46 31.61±13.48重度哮喘組 10 56.52±15.60 396.53±92.53 26.52±12.36對(duì)照組30 11.65±4.89 159.39±97.32 58.53±38.48

    2.2 血清IgE水平及EO比率的檢測(cè) 哮喘組患者空腹IgE的水平(300.71±78.66)ng/mL,明顯高于對(duì)照組(53.45±8.55)ng/mL(P<0.05);哮喘組患者全血EO比率(27.51±6.04)mmol/L,明顯高于對(duì)照組(3.45±0.52)mmol/L(P<0.05)。

    2.3 細(xì)胞因子與哮喘嚴(yán)重程度相關(guān)性分析 根據(jù)Pearson相關(guān)性分析IL-17、IL-22水平與哮喘嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(r=0.715,P<0.01),而IL-10水平與哮喘嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.346,P<0.05)。

    3 討論

    過(guò)敏性哮喘是一種慢性的氣道炎癥性疾病,多種組織細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子直接參與哮喘的發(fā)生、發(fā)展。Th17細(xì)胞主要分泌IL-17和IL-22,在自身免疫性疾病和炎癥性疾病等多種疾病中發(fā)揮重要作用[6-8]。國(guó)外有研究顯示,在過(guò)敏性哮喘患者外周血中Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17和IL-22的表達(dá)均增加[9-10]。因而,Th17細(xì)胞在哮喘的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用,而其效應(yīng)的發(fā)揮主要通過(guò)特征性細(xì)胞因子IL-17及IL-22來(lái)完成。本研究的結(jié)果也顯示,在過(guò)敏性哮喘患者組中,外周血細(xì)胞因子IL-17和IL-22的表達(dá)均增加,并且其增加的程度與哮喘發(fā)病的嚴(yán)重程度相一致。最近調(diào)控免疫反應(yīng)的CD4+CD25+Treg成為免疫抑制治療的研究焦點(diǎn)。CD4+CD25+Treg可通過(guò)分泌細(xì)胞因子IL-10等方式來(lái)抑制免疫應(yīng)答,從而使機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受。有研究發(fā)現(xiàn),在IL-10表達(dá)減少的小鼠中其CD4+CD25+Treg也相應(yīng)減少,而對(duì)于過(guò)敏原誘導(dǎo)的哮喘炎癥反應(yīng)相應(yīng)地增加。因此,IL-10表達(dá)減少可加重哮喘的發(fā)作,提示CD4+CD25+Treg在過(guò)敏性哮喘中起重要作用[11-12]。

    本研究結(jié)果顯示,過(guò)敏性哮喘組血清中IgE的水平及EO比率高于對(duì)照組;外周血細(xì)胞因子IL-17、IL-22水平均高于對(duì)照組,而IL-10水平低于對(duì)照組,提示Th17細(xì)胞和CD4+CD25+Treg共同參與過(guò)敏性哮喘的發(fā)病。在本研究中,哮喘組同時(shí)存在IL-17、IL-22水平增加而IL-10水平卻減少的情況,提示其細(xì)胞水平Th17/CD4+CD25+Treg表達(dá)失衡可能在過(guò)敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。綜上所述,通過(guò)從過(guò)敏性哮喘患者細(xì)胞因子水平的研究發(fā)現(xiàn),IL-17、IL-22、IL-10在過(guò)敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。因而,在過(guò)敏性哮喘患者的治療中,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其變化將有助于臨床診斷及治療。

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