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    小鼠最大灌胃量的研究

    2015-03-11 17:19:22鄢海燕等
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2015年2期
    關(guān)鍵詞:灌胃小鼠

    鄢海燕等

    [摘要] 目的 研究小鼠最大灌胃量及其對(duì)小鼠心電圖和心肌組織的影響。 方法 采用不同體重的小鼠灌胃后測(cè)定胃最大容量;以PEG6000制備不同黏度的溶液,以不同灌胃量灌胃后,記錄小鼠心電圖T波變化,制備小鼠心肌組織病理切片,光鏡觀察。 結(jié)果 在一定的體重范圍內(nèi),小鼠體重與其灌胃量間存在一定的線性關(guān)系。與空白組比較,20 g/100 ml和40 g/100 ml兩種黏度的PEG6000灌胃后小鼠心電圖T波變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),小鼠心肌組織切片未見(jiàn)異常。 結(jié)論 可按線性關(guān)系推算小鼠的最大灌胃量;以最大灌胃量灌胃,在一定黏度范圍內(nèi),小鼠的心電圖及心肌組織未受影響。

    [關(guān)鍵詞] 小鼠;灌胃;最大耐受劑量

    [中圖分類(lèi)號(hào)] R-33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721(2015)01(b)-0004-03

    Study on the maximum tolerant dosage of mice by gastric perfusion

    YAN Hai-yan ZOU Chun-cai YANG Yang LI Ping DENG Xiao-yang

    Pharmacy School of Wannan Medical College in Anhui Province,Wuhu 241002,China

    [Abstract] Objective To study the maximum tolerant dosage of mice by gastric perfusion and examine the influence of the electrocardiogram and myocardial tissue. Methods The maximum capacity was determined by using different body weight of mice after gastric perfusion.PEG6000 solution with different viscosity was prepared,and the T wave changes in ECG were recorded after administrating various dosages by gastric perfusion.The pathological sections of myocardial tissue was prepared and observed by using light and electron microscopy. Results In a certain weight range,linear relationship exists between the weight of mice and the gastric volume.Compared with the blank group,T wave changes of ECG in mice after gastric perfusion with 20 g/ml and 40 g/ml PEG6000 solutions had no statistical difference(P>0.05),and myocardial tissue sections in mice showed no abnormalities. Conclusion Maximum intragastric volume of mice can be calculated according to the linear relationship;It has no effect of ECG and myocardial tissue with the greatest amount of intragastic gavage in a certain solution viscosity range.

    [Key words] Mice;Gastric perfusion;Maximum tolerant dosage

    在口服藥物的藥理藥效研究中常要求以最大給藥體積給小鼠灌胃,并習(xí)慣性規(guī)定灌胃最大容量以20 g體重1 ml藥量為限度[1-4],有的以每鼠0.8 ml為最大限度[5-8]。這種習(xí)慣性用法經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確認(rèn),在多數(shù)情況下不會(huì)因灌胃量問(wèn)題而導(dǎo)致小鼠死亡[9-12],但所給藥量是否是最大灌胃量值得商榷,灌胃量對(duì)小鼠生理指標(biāo)(如心電圖)及組織(如心肌組織)的影響也未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

    1 材料與方法

    1.1 儀器

    AUW-220D型電子天平(日本島津公司),1015型組織切片機(jī)(德國(guó)萊卡公司);BP-600A全自動(dòng)大小鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司),CKX41顯微鏡(奧林巴斯公司),日立H-7650透射電子顯微鏡(日本日立公司)。

    1.2 藥品與試劑

    氨基甲酸乙酯(烏拉坦)(批號(hào):20130916,天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所),聚乙二醇-6000(批號(hào):20120908,天津市化學(xué)試劑三廠),無(wú)水乙醇(批號(hào):20140405,天津市百世化工有限公司),蘇木素-伊紅染色液(醇液)(批號(hào):20140311,無(wú)錫市江原實(shí)業(yè)技貿(mào)總公司)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SD健康小鼠(雌雄各半),體重16~38 g,合肥蜀山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖中心提供。

    1.4 方法

    1.4.1 生理情況下小鼠最大灌胃容量測(cè)定 取不同體重的小鼠100只,按(20±0.2)、(23±0.2)、(25±0.2)、(26±0.2)、(27±0.2)、(28±0.2)、(29±0.2)、(30±0.2)、(31±0.2)、(32±0.2) g分為10組,每組10只,雌雄兼有,麻醉后剖腹,暴露胃和小腸,然后用加藍(lán)墨水的生理鹽水灌胃至藍(lán)墨水通過(guò)幽門(mén)時(shí)停止灌注,所消耗的生理鹽水量就是在生理情況下小鼠灌胃的最大容量。

    1.4.2 PEG6000溶液灌胃后對(duì)小鼠心臟的影響 取SD健康小鼠150只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組用20 g/100 ml、40 g/100 ml的PEG6000溶液灌胃,灌胃劑量為0.6 ml/20 g、1.0 ml/20 g、1.4 ml/20 g,對(duì)照組以相同劑量的生理鹽水灌胃。各組小鼠用烏拉坦麻醉后仰臥固定,待穩(wěn)定后記錄灌胃后2、4、6、8、10 min的心電圖。觀察并比較兩組心電圖的變化。

    1.4.3 小鼠心臟的病理切片觀察 心電圖記錄完畢后放血處死小鼠,取心臟組織標(biāo)本,用4%中性甲醛固定,按病理檢驗(yàn)程序進(jìn)行,常規(guī)石蠟包埋,切片,5 μm,HE染色,光學(xué)顯微鏡觀察。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理,計(jì)量資料以x±s表示,采用方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 生理情況下小鼠體重與灌胃體積的關(guān)系

    灌胃體積隨小鼠體重的增加而增加,趨勢(shì)逐漸變緩,而且在一定的體重范圍內(nèi)灌胃體積與小鼠體重呈線性關(guān)系,線性方程為:y=0.0836x-0.6161,r=0.9598(圖1)。

    圖1 生理情況下小鼠體重與灌胃體積的關(guān)系

    A.變化趨勢(shì)曲線;B.線性關(guān)系曲線

    2.2 PEG6000溶液灌胃后小鼠心電圖的變化

    不同濃度PEG6000灌胃后,與其相同灌胃劑量的空白組比較,心電圖的T波變化值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

    2.3 心肌組織病理學(xué)結(jié)果

    光鏡觀察心肌組織的病理學(xué)改變,不同濃度PEG6000灌胃后,與其相同灌胃劑量的空白組的心肌組織比較,未見(jiàn)組織病理學(xué)改變(圖2)。

    3 討論

    考察藥物的黏稠度、小鼠胃容量對(duì)小鼠生理指標(biāo)、組織的影響而確定一個(gè)可以普遍適用的灌胃體積數(shù)值十分必要[13-16]。若灌胃量偏小,達(dá)不到預(yù)期給藥劑量;灌胃體積過(guò)大并超過(guò)胃內(nèi)最大容積,重則小鼠死亡,輕則藥液會(huì)沿著針管流出食道,甚至溢出口腔,不僅會(huì)使進(jìn)入胃中的實(shí)際藥量減少,而且過(guò)度舒張的胃壁會(huì)刺激并興奮迷走神經(jīng),從而對(duì)心臟產(chǎn)生抑制作用,造成小鼠的心電圖發(fā)生變化,心肌組織發(fā)生改變,影響藥物特別是心血管疾病藥物的藥理藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)小鼠最大灌胃量問(wèn)題的考察與研究是藥理藥效研究的基礎(chǔ)性工作,若不能準(zhǔn)確把握給藥體積,后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性將難以實(shí)現(xiàn)[17-20]。

    通常情況下,不同體重小鼠間的灌胃量是根據(jù)小鼠的體重比值進(jìn)行換算。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)生理情況下小鼠最大灌胃容量的測(cè)定,確認(rèn)在一定的小鼠體重范圍內(nèi),灌胃量和小鼠體重存在一定的線性關(guān)系,因此確定某一體重小鼠的最大灌胃容量后,可根據(jù)不同小鼠的體重情況按線性關(guān)系加以調(diào)整。

    不同濃度的PEG6000溶液,黏稠度不同。本實(shí)驗(yàn)可知,與空白組比較,相同灌胃量的不同濃度PEG6000溶液灌胃后對(duì)小鼠心電圖T波變化的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),心肌組織病理切片也未見(jiàn)改變。在進(jìn)行藥理藥效研究時(shí),對(duì)于有一定黏稠度的制劑,盡可能提高藥物濃度,可達(dá)到最大給藥量。

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    (收稿日期:2014-08-29 本文編輯:李亞聰)

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