口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中乙酰肝素酶的表達(dá)變化及意義

王新，龔中堅，於俊(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫市人民醫(yī)院，江蘇無錫 214023)

口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中乙酰肝素酶的表達(dá)變化及意義

王新，龔中堅，於俊(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫市人民醫(yī)院，江蘇無錫 214023)

摘要：目的觀察口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)組織中乙酰肝素酶(HPA)的表達(dá)變化，并探討其意義。方法OSCC患者52例(觀察組，術(shù)后3 a內(nèi)失訪2例，將病情穩(wěn)定、尚無復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移者22例設(shè)為A組，另將6例死亡和22例復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移者設(shè)為B組)、健康志愿者20例(對照組)，采用免疫組化法檢測兩組HPA，并分析HPA表達(dá)與OSCC臨床病理參數(shù)及患者生存狀況的關(guān)系。結(jié)果觀察組及對照組HPA表達(dá)水平分別為0.276±0.014、0.065±0.009，兩組比較P<0.01。HPA表達(dá)與OSCC組織學(xué)分級及是否有淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。A、B組HPA表達(dá)水平分別為0.114±0.021、0.377±0.034，兩組比較P<0.05。結(jié)論OSCC組織中HPA表達(dá)升高，其可能與OSCC的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后差有關(guān)。

關(guān)鍵詞：口腔腫瘤；口腔鱗狀細(xì)胞癌；乙酰肝素酶

口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)的轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)是影響患者治療和預(yù)后的重要因素，而癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移必須穿過細(xì)胞層以及環(huán)繞在細(xì)胞層外的稠密基質(zhì)。乙酰肝素酶(HPA)是一種能降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜(BM)中的多糖的酶，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[1]。而關(guān)于HPA在OSCC組織中的表達(dá)及其與OSCC侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系國內(nèi)、外鮮有報道。本研究采用免疫組化法檢測OSCC組織中HPA，并觀察其表達(dá)變化，旨在為OSCC的臨床治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2000年1月~2010年12月無錫市人民醫(yī)院收治的OSCC患者52例(觀察組)，男38例，女14例；<50歲20例，≥50歲32例。均經(jīng)病理診斷，且術(shù)前均未進行任何放化療。其中原發(fā)于舌16例、頰黏膜14例、腭部12例、口底8例、口腔其他部位2例。參照世界衛(wèi)生組織(2004年)的腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)3級法進行病理分級，其中Ⅰ級(高分化)12例、Ⅱ級(中分化)30例、Ⅲ級(低分化)10例。按2002年UICC TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ期9例，Ⅲ期24例，Ⅳ期19例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例，有淋巴轉(zhuǎn)移43例；無淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移44例，有淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移8例。對52例OSCC患者進行術(shù)后隨訪，隨訪至2013年12月，隨訪時間36~167個月。術(shù)后3 a內(nèi)失訪2例，將病情穩(wěn)定、尚無復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移者22例設(shè)為A組，另將6例死亡和22例復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移者設(shè)為B組。52例均接受手術(shù)治療并留取腫瘤組織。另選健康志愿者20例，取其正常口腔黏膜組織。

1.2HPA檢測方法采用免疫組化法。免疫組化ABC法參照試劑盒說明書進行，石蠟切片脫蠟、水化后，進行抗原修復(fù)；用5%正常山羊血清室溫封閉30 min；滴加一抗后濕盒中4 ℃孵育過夜，滴加即用型二抗于室溫30 min；DAB顯色3 min，蘇木精復(fù)染，封片。鼠抗人HPA單克隆抗體和ABC免疫組化試劑盒均購自Santa Cruz公司。用HPA陽性片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色為陽性細(xì)胞，用DM2500圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司)鏡下觀察，采用QWlN V2.6軟件掃描分析，根據(jù)陽性細(xì)胞著色的面積和強度，以平均吸光度值(積分吸光度/面積)代表陽性細(xì)胞的表達(dá)水平。

2結(jié)果

觀察組及對照組HPA表達(dá)水平分別為0.276±0.014、0.065±0.009，兩組比較P<0.01。A、B組HPA表達(dá)水平分別為0.114±0.021、0.377±0.034，兩組比較P<0.05。HPA表達(dá)與OSCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1，由表1可知，HPA表達(dá)與OSCC組織學(xué)分級及是否有淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。

表1　HPA表達(dá)與OSCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3討論

OSCC是口腔惡性腫瘤中發(fā)病率最高的腫瘤，具有很強的侵襲性，其主要的治療方法是局部切除手術(shù)及肩胛舌骨上頸淋巴清掃術(shù)，但術(shù)后極易發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[2]。由于對OSCC生物學(xué)性質(zhì)認(rèn)識上的局限性，目前尚無很有效的治療措施，即使進行了廣泛的手術(shù)切除及放射治療，大多數(shù)患者最終還是出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，臨床上急需尋求治療OSCC的新方法[3～5]。

HPA是一種能降解ECM和BM中多糖的酶。早在1983年，Nakajima等[6]在Science上撰文報道，HPA被命名為“Heparanase”，為內(nèi)源性β-葡萄糖醛酸酯酶；在皮膚惡性黑色素瘤的裸鼠細(xì)胞系B16中發(fā)現(xiàn)，HPA活性與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，是腫瘤治療潛在的靶點[7,8]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，HPA通過降解ECM中的硫酸乙酰肝素多聚糖蛋白和釋放其結(jié)合的生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子和各種酶等促進腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[9]。研究[10]顯示，在胰腺癌、黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、胃癌、頭頸癌及口腔癌等多種人類腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了HPA的表達(dá)，且HPA表達(dá)均與癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移密切有關(guān)。這些資料提供了HPA參與癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的直接證據(jù)。近年來研究[11,12]還發(fā)現(xiàn)，HPA還與感染、糖尿病、動脈粥樣硬化等多種疾病有關(guān)，其潛在功能被不斷發(fā)掘，故有學(xué)者形象的把HPA的功能多樣性稱為“busy at the cell surface”。

本研究顯示，觀察組HPA表達(dá)水平高于對照組，HPA表達(dá)與OSCC患者年齡、性別以及腫瘤TNM分期無關(guān)，而與腫瘤組織分級有關(guān)，提示低分化OSCC者HPA表達(dá)水平低于中高分化者，說明HPA表達(dá)水平與OSCC的惡性程度正相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，HPA表達(dá)與OSCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移亦有關(guān)，提示HPA的高表達(dá)可能促進OSCC的區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在術(shù)后隨訪中發(fā)現(xiàn)，A組HPA表達(dá)水平低于B組，提示HPA高表達(dá)可能與OSCC患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，可能是一種新的反映OSCC預(yù)后的指標(biāo)。國內(nèi)肖大江等[13]也得出相似結(jié)論，與我們的研究結(jié)果相符。

總之，OSCC中HPA的高表達(dá)可能與OSCC的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后差有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

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(收稿日期:2014-12-17)

基金項目：南京醫(yī)科大學(xué)科技發(fā)展基金重點項目(2014NJMUZ58)。

中圖分類號：R739.8

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)11-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.11.029