性能評(píng)價(jià)、方法學(xué)評(píng)價(jià)及參考區(qū)間驗(yàn)證在ALI FAX血沉檢測(cè)質(zhì)量保證中的應(yīng)用

性能評(píng)價(jià)、方法學(xué)評(píng)價(jià)及參考區(qū)間驗(yàn)證在ALI FAX血沉檢測(cè)質(zhì)量保證中的應(yīng)用

陳顯秋,曲林琳,王學(xué)軍,劉天明*

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春130021)

紅細(xì)胞沉降率(血沉，ESR)是指抗凝靜脈血直立靜置于室溫下，紅細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)沉降的速度。有報(bào)道，病理性ESR增高與結(jié)核、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、感染、惡性腫瘤、紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤等許多疾病相關(guān)[1]，是一項(xiàng)非特異性的檢驗(yàn)項(xiàng)目。用于ESR檢測(cè)的Westergren法被國(guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)推薦為ESR測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法[2]。Westergren法操作簡(jiǎn)便，但容易受管內(nèi)抗凝劑稀釋，不同廠家血沉管的內(nèi)徑、材質(zhì)存在差異，檢測(cè)用血量較大，操作及結(jié)果判讀費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適合大批量標(biāo)本ESR的檢測(cè)。本檢驗(yàn)科自2008年引進(jìn)ALI FAX TEST1血沉儀替代westergren法檢測(cè)血沉以來(lái)，通過(guò)每12個(gè)月對(duì)其進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，隨后評(píng)價(jià)儀器等準(zhǔn)確性、重復(fù)性和攜帶污染率等主要性能指標(biāo)，并進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證，來(lái)保證分析過(guò)程中的檢驗(yàn)質(zhì)量。為了了解儀器法與westergren法檢測(cè)血沉的差異以及標(biāo)本存放時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響，我們對(duì)ALI FAX TEST1儀器法與Westergren法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行差異和相關(guān)性比較，對(duì)標(biāo)本穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1材料與方法

1．1材料ALI FAX TEST I血沉儀(意大利)和Westergren法檢測(cè)的血液樣品均采用乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝的真空抗凝管，采集2ml靜脈血抗凝，真空抗凝管購(gòu)自廣州陽(yáng)普醫(yī)療科技股份有限公司。ALI FAX TEST I血沉儀在檢測(cè)前及每年按儀器說(shuō)明書要求應(yīng)用配套標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。

1.2樣本檢測(cè)按照儀器說(shuō)明書，開機(jī)后儀器預(yù)熱并進(jìn)行自檢，儀器前面控制區(qū)液晶屏上顯示“adjusting temp…”，待儀器內(nèi)部溫度穩(wěn)定在37℃后進(jìn)行樣本針和管路清洗，然后樣本檢測(cè)，按照屏幕提示將裝載有EDTA-K2抗凝血的樣本架插入檢測(cè)道，關(guān)門，按“START”開始檢測(cè)，儀器自動(dòng)旋轉(zhuǎn)混勻并完成檢測(cè)。每批檢測(cè)前及檢測(cè)完畢后都進(jìn)行樣本針和管路清洗，及時(shí)清理廢液桶。

1.3性能評(píng)價(jià)(1)準(zhǔn)確度：用ALI FAX TEST l檢測(cè)衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)血沉5份標(biāo)本，記錄測(cè)定值(X)，將測(cè)定值與靶值(Y)做差，計(jì)算出偏倚(B)和相對(duì)偏倚(%)，公式為B=|X-Y|，B%=|X-Y|/Y×100%；(2)重復(fù)性：選用10例ESR結(jié)果覆蓋正常、異常的標(biāo)本分別在血沉儀上連續(xù)檢測(cè)11次，將第1次測(cè)定結(jié)果去除，計(jì)算每份樣本的變異系數(shù)(CV)值；(3)攜帶污染率：選取ESR高值和低值標(biāo)本各一份，依次檢測(cè)高值3次(H1，H2，H3)、低值3次(L1，L2，L3)，計(jì)算攜帶污染率，公式為攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.4穩(wěn)定性評(píng)價(jià)隨機(jī)抽取40例EDTA-K2抗凝血標(biāo)本各2份，采集后30 min內(nèi)在ALI FAX TEST l上檢測(cè)完畢，將標(biāo)本分別保存在室溫(23-26℃)和4-8℃下于采集后4 h、16 h進(jìn)行儀器法檢測(cè)，比較不同存放條件下ESR的變化情況。

1.5方法學(xué)評(píng)價(jià)抽取EDTA-K2抗凝血標(biāo)本40份(血沉儀結(jié)果標(biāo)記*者除外)，用儀器法檢測(cè)得到的ESR結(jié)果涵蓋高、中、低水平，再用Westergren法[3]進(jìn)行檢測(cè)，將兩種方法所得的ESR結(jié)果做顯著性檢驗(yàn)及相關(guān)性分析(r值及回歸方程)，分析比較兩種檢測(cè)方法的差異及相關(guān)程度。

1.6參考區(qū)間驗(yàn)證選取健康男性、女性EDTA-K2抗凝血液標(biāo)本各20例，在經(jīng)校準(zhǔn)并通過(guò)性能驗(yàn)證的ALI FAX TEST1血沉儀上進(jìn)行檢測(cè)，每組ESR檢測(cè)結(jié)果95%(19例)分布在現(xiàn)行參考區(qū)間內(nèi)，1例結(jié)果在參考區(qū)間以外時(shí)判定為該參考區(qū)間有效。如果某組中有≥2例檢測(cè)結(jié)果在參考區(qū)間之外，則必須重新收集這組(20例)標(biāo)本重新檢測(cè)，不超過(guò)2例結(jié)果在參考區(qū)間以外時(shí)可判定為參考區(qū)間通過(guò)驗(yàn)證；若在參考區(qū)間以外的超過(guò)2例，在排除標(biāo)本原因、檢測(cè)系統(tǒng)和檢測(cè)程序原因后，進(jìn)一步進(jìn)行生物參考區(qū)間調(diào)查，必要時(shí)自行建立參考區(qū)間。

1.7統(tǒng)計(jì)分析顯著性檢驗(yàn)、相關(guān)性分析、95%CI等統(tǒng)計(jì)應(yīng)用GraphPad Prism5.0進(jìn)行完成。

2結(jié)果

2.1性能評(píng)價(jià)

2.1.1準(zhǔn)確度應(yīng)用ALI FAX TEST l檢測(cè)衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)5個(gè)水平的樣品，結(jié)果見表1。所得的偏倚均在允許范圍內(nèi)。

2.1.2重復(fù)性10例ESR結(jié)果覆蓋正常、異常的全血標(biāo)本，每份標(biāo)本經(jīng)ALI FAX TEST1重復(fù)檢測(cè)11次，將第1次測(cè)定結(jié)果去除，計(jì)算其余10次的CV值，1份低值ESR樣本的CV為14.5%，其余均<10%(見表2)，符合重復(fù)性不超過(guò)1/3TEa的標(biāo)準(zhǔn)[4]。

2.1.3攜帶污染率選取ESR高值和低值標(biāo)本各一份，高值3次(H1，H2，H3)測(cè)定結(jié)果分別為116、115、120，低值3次(L1，L2，L3)測(cè)定結(jié)果分別為6、8、5，利用攜帶污染率公式(L1-L3)/(H3-L3)×100%計(jì)算出攜帶污染率0.8%。

表2　ALI FAX TEST l重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果

2.2穩(wěn)定性評(píng)價(jià)40例EDTA-K2抗凝血標(biāo)本各2份，采集后30 min內(nèi)在ALI FAX TEST l上完成檢測(cè)，隨后將標(biāo)本分別保存在室溫(23-26℃)和4-8℃下于采集后4 h、16 h進(jìn)行儀器法檢測(cè)。與采集后立即檢測(cè)的ESR結(jié)果比較，采集后室溫、4-8℃放置4 h檢測(cè)的ESR結(jié)果無(wú)明顯變化；而在室溫或4-8℃放置16 h后檢測(cè)ESR結(jié)果明顯降低(P<0.05，見表3)。

表3　 ALI FAX TEST l穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)(ESR單位：mm/h)

注：△與采集后30 min內(nèi)ESR檢測(cè)結(jié)果相比。

2.3方法學(xué)比較ALI FAX TEST1儀器經(jīng)校準(zhǔn)、配套標(biāo)準(zhǔn)品通過(guò)正確度驗(yàn)證，40份EDTA-K2抗凝血標(biāo)本經(jīng)儀器法檢測(cè)，與Westergren法3檢測(cè)相比，兩種方法所得的ESR結(jié)果無(wú)顯著性差異(P>0.05)，相關(guān)性較好(y=0.9294x-0.9019，R2=0.8222，圖1)。

2.4參考區(qū)間驗(yàn)證ESR現(xiàn)用參考區(qū)間，男性為0-15 mm/L，女性為0-20 mm/L。ALI FAX TEST1血沉儀經(jīng)儀器校準(zhǔn)、性能驗(yàn)證通過(guò)后，檢測(cè)20例健康男性及20例健康女性ESR(表4)，結(jié)果健康男性ESR分布范圍2-25 mm/L，其中有1例ESR為25 mm/L超出參考區(qū)間上限，其余19例ESR結(jié)果在2-15 mm/L范圍內(nèi)，符合95%可信區(qū)間的要求；健康女性ESR分布范圍2-28 mm/L，其中有1例ESR為28 mm/L超出參考區(qū)間上限，其余19例ESR結(jié)果在2-18 mm/L范圍內(nèi)，符合95%可信區(qū)間的要求。

圖1　ALI FAX TEST1與Westergren法檢測(cè)ESR結(jié)果差異

表4　健康男性、女性ESR檢測(cè)結(jié)果(單位：mm/h)

3討論

ALI FAX TEST1全自動(dòng)血沉儀采用950 nm波長(zhǎng)的紅外線進(jìn)行檢測(cè)，光電二極管檢測(cè)器收集的電脈沖信號(hào)與紅細(xì)胞在毛細(xì)管固定位置出現(xiàn)的密集程度相關(guān)。每個(gè)樣本在單位時(shí)間內(nèi)所檢測(cè)的電脈沖信號(hào)變化被描繪成一條沉降曲線，在單位時(shí)間內(nèi)信號(hào)的減低被轉(zhuǎn)換成數(shù)值。該儀器檢測(cè)速度110份/小時(shí)，每個(gè)測(cè)試所需的樣本量?jī)H為150 μl全血，儀器配套樣本架可同時(shí)放入60份標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，有利于批量上樣、自動(dòng)旋轉(zhuǎn)混勻，適合本檢驗(yàn)科進(jìn)行大批量血沉樣本的檢測(cè)。儀器內(nèi)部溫度恒定在37℃，保證了檢測(cè)環(huán)境的穩(wěn)定性。因此ALI FAX TEST1血沉儀與westergren法相比除了檢測(cè)速度的優(yōu)勢(shì)外，還可基本排除環(huán)境溫度、樣本混勻、管徑大小等實(shí)驗(yàn)因素的影響。為了提高儀器法檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，需要監(jiān)控儀器性能。本檢驗(yàn)科按照ISO15189：2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——質(zhì)量和能力的專用要求》[5]和美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)發(fā)布的性能驗(yàn)證指南EP10-A[6]制定了血沉檢測(cè)的性能驗(yàn)證方案，規(guī)定了性能驗(yàn)證的內(nèi)容、頻率、時(shí)機(jī)、步驟、結(jié)果分析和結(jié)論。一般情況下在每次儀器校準(zhǔn)之后進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，包括正確度、精密度和攜帶污染率。應(yīng)用可溯源的配套標(biāo)準(zhǔn)品[7]對(duì)該儀器進(jìn)行正確度驗(yàn)證，配合3個(gè)水平的室內(nèi)質(zhì)控品，以保證儀器檢測(cè)的準(zhǔn)確性。重復(fù)性的評(píng)價(jià)結(jié)果表明，ESR值較低時(shí)，CV值較高，隨著ESR值升高，其CV逐漸降低，ALI FAX對(duì)于檢測(cè)高值血沉表現(xiàn)出良好的重復(fù)性，這對(duì)于臨床疾病的治療監(jiān)測(cè)、隨訪具有重要的意義。該儀器的準(zhǔn)確性、重復(fù)性較好，檢測(cè)效率較高，使用中還需注意攜帶污染現(xiàn)象[8]，經(jīng)評(píng)價(jià)該儀器攜帶污染率低，能夠較好地保障檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性。治療過(guò)程中或治療后患者血液中的藥物成分或特殊的代謝產(chǎn)物可能會(huì)對(duì)儀器的電脈沖信號(hào)產(chǎn)生干擾，進(jìn)而影響個(gè)別結(jié)果的準(zhǔn)確性[9]。

考慮到國(guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)推薦用EDTA-K2作為血沉檢測(cè)的抗凝劑，標(biāo)本穩(wěn)定性評(píng)價(jià)和參考區(qū)間驗(yàn)證時(shí)均用EDTA-K2抗凝全血完成。ALI FAX TEST 1儀器經(jīng)校準(zhǔn)、性能評(píng)價(jià)后，40例樣本分別用儀器法和westergren法檢測(cè)，經(jīng)證實(shí)兩種方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異，相關(guān)性也很好，而儀器法實(shí)驗(yàn)溫度為37℃，westergren法為室溫，可見對(duì)于儀器法和westergren法兩種方法來(lái)講，不同的實(shí)驗(yàn)溫度對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響不大。而檢測(cè)需在樣本采集后4 h內(nèi)完成。

由于儀器法與westergren法檢測(cè)血沉的方法學(xué)不同，而目前國(guó)內(nèi)較權(quán)威的參考資料[3]和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一直采用NCCLS C28-A2[10]推薦可以引用權(quán)威書刊、其他實(shí)驗(yàn)室或制造商提供的生物參考區(qū)間，采用適用性驗(yàn)證的方法建立參考區(qū)間，在2008年ALI FAX TEST 1應(yīng)用之初進(jìn)行了參考區(qū)間調(diào)查，認(rèn)為wesIergren法的參考區(qū)間適用于儀器法檢測(cè)。根據(jù)ISO15189：2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》[11]規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室必須慎重建立自己的生物參考區(qū)間并定期評(píng)審。對(duì)于現(xiàn)用的參考區(qū)間，本檢驗(yàn)科每年進(jìn)行一次參考區(qū)間驗(yàn)證，并召開一次臨床聯(lián)席會(huì)評(píng)審參考區(qū)間，以確保參考區(qū)間適用。

隨著檢驗(yàn)自動(dòng)化的發(fā)展，ALI FAX TEST 1血沉儀檢測(cè)血沉比westergren法更容易被醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室尤其是樣本量大的實(shí)驗(yàn)室采納，但儀器法檢測(cè)要求重視儀器的維護(hù)和保養(yǎng)，以保證儀器性能。因此定期的性能驗(yàn)證有利于保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，還能及時(shí)提示儀器異常，為血沉檢測(cè)準(zhǔn)確性和重復(fù)性提供保障。

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[11]ISO 15189:2012《Medical laboratories-Particular requirements for quality and competence》.

(收稿日期：2015-01-17)

文章編號(hào)：1007-4287(2015)12-2105-04

*通訊作者