干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)肉雛雞生長(zhǎng)性能及免疫力影響的比較研究

伊淑帥，王開，齊宇，潘娜，胡桂學(xué)

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118)

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干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)肉雛雞生長(zhǎng)性能及免疫力影響的比較研究

伊淑帥，王開，齊宇，潘娜，胡桂學(xué)*

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118)

為比較肉雛雞在飲水中添加干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)肉雛雞生長(zhǎng)性能與免疫力的影響，本試驗(yàn)選取1日齡肉雞120只，隨機(jī)分為3個(gè)處理組，分別為對(duì)照組、干酪乳桿菌組、氟苯尼考組，每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只，試驗(yàn)期為21 d，檢測(cè)不同階段各處理組的平均日增重、料重比、免疫器官指數(shù)、外周血IgG含量、盲腸sIgA含量、淋巴細(xì)胞增殖能力。結(jié)果顯示，飲水中添加干酪乳桿菌對(duì)肉雛雞體重、平均日增重、平均日采食量影響不顯著，添加氟苯尼考顯著抑制了肉雛雞的生長(zhǎng)性能(P<0.05)，二者對(duì)肉雛雞料重比的影響均差異不顯著。添加干酪乳桿菌對(duì)肉雛雞免疫器官指數(shù)影響不顯著，但顯著提高了肉雛雞外周血IgG含量、盲腸sIgA含量以及外周血淋巴細(xì)胞增殖能力(P<0.05)，添加氟苯尼考顯著抑制了肉雛雞的免疫水平(P<0.05)。結(jié)果表明新進(jìn)肉雛雞在飲水中添加氟苯尼考對(duì)雛雞的生長(zhǎng)性能及免疫力有顯著的抑制作用，應(yīng)減少使用，而添加干酪乳桿菌對(duì)提高雛雞免疫力是有益的。

干酪乳桿菌；氟苯尼考；雛雞；生長(zhǎng)性能；免疫力

肉雞養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益與雛雞階段的發(fā)病率、死亡率、生長(zhǎng)性能等因素息息相關(guān)。吉林省作為我國(guó)肉雞養(yǎng)殖大省，養(yǎng)殖場(chǎng)經(jīng)常使用抗生素并通過飲水或作為飼料添加劑的形式施用以控制發(fā)病率、提高生長(zhǎng)性能，獲取更大的經(jīng)濟(jì)效益。其中，氟苯尼考是肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)中使用率最高的抗生素之一，使用普及率達(dá)到78%[1]。然而，由于細(xì)菌抗藥性、獸藥殘留等問題的出現(xiàn)，限制了抗生素的使用。益生菌作為一類對(duì)機(jī)體有益的活的微生物，可以有效抑制病原菌的生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)腸道微生物菌群平衡，增強(qiáng)宿主機(jī)體免疫力，已做為一種新型飼料添加劑用于畜禽養(yǎng)殖[2]。益生菌是否可以代替抗生素推廣使用已經(jīng)成為肉雞養(yǎng)殖業(yè)一個(gè)值得關(guān)注的問題，因此，評(píng)估使用益生菌、抗生素對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能與免疫力的影響，對(duì)二者在臨床實(shí)踐中的應(yīng)用具有良好的指導(dǎo)意義。本試驗(yàn)通過在雛雞飲水中添加干酪乳桿菌、常用抗生素氟苯尼考，比較各階段相應(yīng)的生長(zhǎng)性能與免疫指標(biāo)，探討干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能與免疫力的影響，旨在評(píng)價(jià)二者在雛雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 主要儀器 SANYO-MCV131BNF超凈無(wú)菌工作臺(tái)(日本SANYO公司)、Multiskan Spectrum 全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(芬蘭Thermo Fisher Labsystems公司)、MikRo 22R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)HETTICH公司)、HX502T電子分析天平(慈溪市天東衡器廠)、MCO-18AIC CO2恒溫培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)、UV-2012PCS氣浴恒溫?fù)u床(龍尼柯儀器有限公司)。

1.2 主要試劑 干酪乳桿菌(L.casei)ATCC393為本實(shí)驗(yàn)室保存；禽用氟苯尼考購(gòu)自吉林省某動(dòng)物藥業(yè)有限公司；雞分泌性免疫球蛋白-A(sIgA)和雞免疫球蛋白-G(IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海朗頓生物有限公司；刀豆蛋白A(ConA)、MTT、淋巴細(xì)胞分離液(密度1.077±0.002)購(gòu)自sigma公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取120只1日齡AA+肉雞，購(gòu)自吉林永吉方圓肉種雞場(chǎng)，隨機(jī)分為3個(gè)處理組：對(duì)照組(C組)，基礎(chǔ)日糧；干酪乳桿菌組(L組)，基礎(chǔ)日糧，飲水中添加1 g/L干酪乳桿菌(約109CFU/L)；氟苯尼考組(F組)，基礎(chǔ)日糧，飲水中添加0.1%氟苯尼考；添加標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)氟苯尼考產(chǎn)品說明與鄭穎輝研究結(jié)果[3]。每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。

1.4 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理 按照肉雞正常飼養(yǎng)及防疫程序進(jìn)行，采用立體籠養(yǎng)方式，飼養(yǎng)周期為21 d，分三階段進(jìn)行：1～7 d，8～14 d，15～21 d。各處理組雛雞自由采食和飲水，干酪乳桿菌與氟苯尼考采用飲水的方式進(jìn)行添加，并保證雛雞在短時(shí)間內(nèi)全部飲用完畢。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧營(yíng)養(yǎng)水平

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能 每天定時(shí)稱量各處理組每日供料量、剩余料量、損失料量。分別于試驗(yàn)0、21 d稱量各處理組雛雞的體重，稱重前禁食12 h，計(jì)算平均日增重與平均日采食量，按以下公式計(jì)算料重比：料重比=飼養(yǎng)期內(nèi)所耗標(biāo)準(zhǔn)飼料量(kg)/同期增重(kg)。

1.5.2 免疫器官指數(shù) 分別于試驗(yàn)7、14、21 d稱量各處理組雛雞的體重，稱重前禁食。12 h，采集脾臟、法氏囊、胸腺，剔除表面多余的脂肪組織，稱量免疫器官重量，按以下公式計(jì)算免疫器官指數(shù)：免疫器官指數(shù)(g/kg)=免疫器官濕重(g)/體重(kg)。

1.5.3 外周血IgG含量檢測(cè) 使用雞免疫球蛋白-G(IgG)ELISA試劑盒檢測(cè)各處理組雛雞7、14、21 d收集的外周血血清中IgG含量，每個(gè)樣品做兩個(gè)重復(fù)。

1.5.4 盲腸內(nèi)容物sIgA含量檢測(cè) 使用雞分泌性免疫球蛋白-A(sIgA)ELISA試劑盒檢測(cè)各處理組雛雞7、14、21 d收集的盲腸內(nèi)容物上清中sIgA含量，每個(gè)樣品做兩個(gè)重復(fù)。

1.5.5 外周血淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) 無(wú)菌采集心臟肝素抗凝血2 mL，經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離淋巴細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后稀釋至濃度為2×106cell/mL，并用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)細(xì)胞活力>95%。采用 MTT法檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞增殖能力，計(jì)算淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率[4]。

1.5.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Mean±SD表示，使用spss18.0軟件，采用單因素方差分析(one way-ANOVA)法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能的影響 如表2所示，雛雞飲水中添加干酪乳桿菌(L組)對(duì)雛雞的體重、平均日增重、平均日采食量影響均不顯著(P>0.05)；氟苯尼考組(F組)的體重、平均日增重、平均日采食量顯著低于對(duì)照組(C組)與干酪乳桿菌組(L組)。整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)，三個(gè)處理組料重比差異均不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明，添加干酪乳桿菌對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能影響不顯著，添加氟苯尼考顯著抑制了雛雞的生長(zhǎng)性能。

表2 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能的影響結(jié)果表

注：同一行標(biāo)注有不同字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)注有相同字母或不標(biāo)注表示差異不顯著(P>0.05)

2.2 對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)的影響 如表3所示，7 d時(shí)干酪乳桿菌組(L組)與對(duì)照組(C組)脾指數(shù)、法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)差異均不顯著(P>0.05)；添加氟苯尼考(F組)免疫器官指數(shù)均顯著降低，與對(duì)照組(C組)相比，脾指數(shù)、法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)降低30.6%、39.6%、33.4%。14 d時(shí)，與對(duì)照組(C組)相比，干酪乳桿菌組(L組)胸腺指數(shù)提高23.6%，氟苯尼考組(F組)脾指數(shù)、法氏囊指數(shù)降低16.3%、29.6%。21 d時(shí)，三個(gè)處理組脾指數(shù)、胸腺指數(shù)差異均不顯著(P>0.05)，干酪乳桿菌組(L組)與氟苯尼考組(F組)法氏囊指數(shù)差異顯著(P<0.05)。表明干酪乳桿菌對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)影響不顯著，而氟苯尼考則降低了免疫器官指數(shù)。

表3 干酪乳桿菌與抗生素對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)的影響結(jié)果表

注：同一行標(biāo)注有不同字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)注有相同字母或不標(biāo)注表示差異不顯著(P>0.05)

2.3 對(duì)雛雞外周血IgG含量的影響 依據(jù)ELISA試劑盒繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，計(jì)算樣品含量如圖2所示，7 d時(shí)三個(gè)處理組外周血IgG含量差異均不顯著(P>0.05)；14 d時(shí)，干酪乳桿菌組(L組)與對(duì)照組(C組)、氟苯尼考組(F組)相比，外周血IgG含量增加24.3%、17.2%，但是不具有生物學(xué)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)；21 d時(shí)，三個(gè)處理組IgG含量差異顯著(P<0.05)，其中干酪乳桿菌組(L組)含量最高，為4.18±0.37 mg/mL，氟苯尼考組(F組)含量最低，為3.24±0.91 mg/mL。表明干酪乳桿菌可以顯著提高肉雛雞外周血IgG水平。

圖1 IgG ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線(標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)：y=1.9512x2-1.4838x+1.3258, R2=0.9920)

圖2 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞外周血IgG含量的影響

2.4 對(duì)雛雞盲腸sIgA含量的影響 依據(jù)ELISA試劑盒繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)，計(jì)算樣品含量如圖4所示，7、14 d時(shí)，三個(gè)處理組盲腸sIgA含量差異均不顯著(P>0.05)，干酪乳桿菌組(L組)較其他處理組含量較高；21 d時(shí)，對(duì)照組與氟苯尼考組盲腸sIgA含量差異均不顯著(P>0.05)；添加干酪乳桿菌(L組)盲腸sIgA顯著提高(P<0.05)，與對(duì)照組(C組)、氟苯尼考組(F組)相比，盲腸sIgA含量增加22.0%、23.4%。表明添加干酪乳桿菌可以顯著提高雛雞盲腸sIgA水平，添加氟苯尼考對(duì)雛雞盲腸sIgA含量影響不顯著。

圖3 sIgA ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖4 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞盲腸內(nèi)sIgA含量的影響

2.5 對(duì)雛雞外周血淋巴細(xì)胞增殖能力的影響 如圖5所示，14 d時(shí)三個(gè)處理組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異顯著(P<0.05)，干酪乳桿菌組(L組)外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率最高，為0.534±0.028，氟苯尼考組(F組)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率最低，為0.150±0.022；21 d時(shí)，對(duì)照組(C組)與干酪乳桿菌組(L組)外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異不顯著(P>0.05)，分別為0.352±0.082、0.360±0.089，氟苯尼考組(F組)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率最低，為0.077±0.005，與其他處理組差異顯著(P<0.05)。結(jié)果表明添加氟苯尼考顯著抑制了雛雞淋巴細(xì)胞增殖能力，添加干酪乳桿菌可以提高淋巴細(xì)胞增殖能力。

圖5 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

3 討論與小結(jié)

3.1 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能的影響 干酪乳桿菌在畜禽胃腸道內(nèi)可以合成多種消化酶類，消化分解機(jī)體內(nèi)多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收與利用；還可以通過在胃腸道內(nèi)的發(fā)酵，利用小分子的碳水化合物合成脂肪酸、氨基酸、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為機(jī)體提供能量來源，加速飼料的消化利用，提高生長(zhǎng)性能[5]。但本實(shí)驗(yàn)中，添加干酪乳桿菌對(duì)雛雞的平均日增重、料重比影響均不顯著，但有改善胃腸功能、提高飼料轉(zhuǎn)化率的趨勢(shì)，其原因可能與乳桿菌的種類、劑型、添加的濃度有關(guān)，與付果花等的研究相一致[6]。氟苯尼考為氯霉素的結(jié)構(gòu)同系物，作用機(jī)理及抗菌譜與氯霉素和甲砜霉素相似，1990年首次在日本上市，目前在肉雞養(yǎng)殖實(shí)踐中，常用于防治大腸桿菌、沙門菌等引起的細(xì)菌性腸炎。它可以引起胃腸迷走神經(jīng)軸索變性，引起神經(jīng)功能障礙，導(dǎo)致胃酸分泌減少，降低胃泌素釋放量和胰液分泌，最終導(dǎo)致胃腸消化、吸收功能障礙[7]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加氟苯尼考可以抑制雛雞的生長(zhǎng)，但對(duì)料重比的影響不顯著，因此建議在肉雛雞階段，應(yīng)盡量減少對(duì)該藥物的使用。

3.2 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)的影響 免疫器官的發(fā)育水平?jīng)Q定了機(jī)體免疫應(yīng)答的能力，是評(píng)價(jià)雛雞免疫機(jī)能的重要指標(biāo)[8]。研究發(fā)現(xiàn)，雛雞日糧中添加不同劑量、不同劑型的枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌均能促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，顯著提高雛雞的脾指數(shù)、法氏囊指數(shù)與胸腺指數(shù)[9-10]。李汝春證明，氟苯尼考對(duì)雞的免疫器官在短期內(nèi)造成了不可逆的損傷作用，造成了法氏囊、脾臟、盲腸扁桃體的萎縮[11]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飲水中添加干酪乳桿菌對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)影響不顯著，但可以提高雛雞部分免疫器官指數(shù)，添加氟苯尼考顯著抑制了免疫器官的發(fā)育。氟苯尼考對(duì)免疫器官發(fā)育的抑制作用在低日齡雛雞中表現(xiàn)的更加明顯。

3.3 干酪乳桿菌與氟苯尼考對(duì)雛雞免疫力的影響 干酪乳桿菌進(jìn)入畜禽胃腸道后，通過介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路，活化巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、杯狀細(xì)胞等，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌IL-10、TNF-α等多種細(xì)胞因子，促進(jìn)黏液蛋白與sIgA的分泌、增強(qiáng)腸道黏膜屏障，增加血清中IgA 、IgG和IgM水平，促進(jìn)T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞成熟，增強(qiáng)免疫機(jī)能，提高腸道免疫力和抗病力，抵抗腸道腫瘤、炎癥等疾病[12-13]。徐子涵比較了不同劑型的草乳桿菌與格氏乳桿菌制劑對(duì)雛雞免疫機(jī)能的影響，結(jié)果表明，液體與固體兩種劑型的乳桿菌制劑均能提高雛雞血清中IgA、IgG以及腸道內(nèi)容物中sIgA的含量，增強(qiáng)雛雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增加細(xì)胞因子表達(dá)量，并且證明液體益生菌制劑的效果略優(yōu)于固體制劑[14]。Molnar等研究了枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫機(jī)能的影響，結(jié)果表明枯草芽孢桿菌增加腸粘膜固有層杯狀細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)肉雞對(duì)新城疫病毒的免疫應(yīng)答能力[15]。氟苯尼考作為氯霉素家族的抗生素，可以抑制免疫活性細(xì)胞的生成，降低細(xì)胞免疫功能，抑制細(xì)胞免疫與體液免疫。張建梅等比較了復(fù)合微生態(tài)制劑與氟苯尼考對(duì)雛雞免疫機(jī)能的影響，結(jié)果表明氟苯尼考可引起雛雞法氏囊與脾臟萎縮及淋巴細(xì)胞的減少與死亡，對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能具有明顯的抑制作用[16]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，干酪乳桿菌可以顯著提高雛雞外周血IgG含量、盲腸sIgA含量以及外周血淋巴細(xì)胞增殖能力，而氟苯尼考對(duì)雛雞外周血IgG水平、外周血淋巴細(xì)胞增殖能力均有顯著的抑制作用，尤其是淋巴細(xì)胞增殖能力。表明飲水中添加干酪乳桿菌有助于提高雛雞免疫水平，而氟苯尼考對(duì)雛雞免疫機(jī)能有顯著的抑制作用。

本試驗(yàn)證明干酪乳桿菌能提高雛雞的免疫力，可以從外周血中IgG含量、盲腸sIgA含量以及淋巴細(xì)胞增殖能力均顯著提高得到驗(yàn)證。而肉雞養(yǎng)殖中使用普及率最高的抗生素-氟苯尼考對(duì)雛雞的生長(zhǎng)性能與免疫力均有顯著的抑制作用。因此，在肉雞養(yǎng)殖中應(yīng)盡量減少氟苯尼考的使用，并通過不斷篩選益生菌菌株、改進(jìn)益生菌發(fā)酵工藝等途徑逐步替代抗生素，提高生長(zhǎng)性能與抗病力，以獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益。

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(編輯：侯向輝)

Comparative Study on Effect ofLactobacillusand Florfenicol on Growing Performance and Immunity Function of Broilers

YI Shu-shuai, WANG Kai, QI Yu, PAN Na, HU Gui-xue*

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China)

In order to compare the effect ofLactobacilluscaseiand florfenicol on growth performance and immunity function of broilers, in this experiment, 120 one-day-old broilers were randomly divided into 3 groups with 4 replicates in each group and 20 chickens per replicate, including the control group, theLactobacilluscaseigroup, the florfenicol group. The average daily gain, feed weight ratio, immunity organ index, IgG content, sIgA content, and lymphocyte proliferation ability of the treatment group were detected at different stages. The results showed that the effect of body weight, average daily gain and average daily feed intake was not significant by addingL.caseiin drinking water, the growth performance of broilers was significantly inhibited by adding florfenicol(P<0.05), the effect ofL.caseiand florfenicol on chicken feed weight ratio was not significantly. The effect ofL.caseion immunity organ index was not significant, but the IgG content, sIgA content and lymphocyte proliferation ability were significantly increased (P<0.05), immunity function was significantly inhibited using florfenicol (P<0.05). In conclusion, the growth performance and immunity function of broiler could be significant inhibited using florfenicol in the water. however,Lactobacilluscaseiis benefical for brolier to improve the immunity.

Lactobacillus;florfenicol;broilers; growing performance;immunity function

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31372413)

伊淑帥，碩士研究生，從事益生菌作用機(jī)制研究。

胡桂學(xué)。E-mail：guixue1964@126.com

2015-07-17

A

1002-1280 (2015) 09-0031-06

S852.61