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    嗎啡誘導(dǎo)大鼠條件性位置偏愛建立和消退研究

    2015-03-09 11:28:46崔躍李莉郭鵬驥崔皓哲徐暢
    中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用 2015年17期
    關(guān)鍵詞:條件性藥箱嗎啡

    崔躍 李莉 郭鵬驥 崔皓哲 徐暢

    嗎啡誘導(dǎo)大鼠條件性位置偏愛建立和消退研究

    崔躍 李莉 郭鵬驥 崔皓哲 徐暢

    目的觀察嗎啡誘導(dǎo)的條件性位置偏愛(CPP)的建立和消退過程。方法健康雄性SD大鼠20只隨機(jī)分為對照組和嗎啡組,每組10只。采用恒定劑量法(10 mg/kg)連續(xù)背部皮下注射嗎啡,每次嗎啡CPP訓(xùn)練后,在伴藥箱停留30 min;CPP建立后,用生理鹽水替代嗎啡進(jìn)行CPP消退訓(xùn)練,觀測嗎啡CPP消退過程。結(jié)果皮下注射10 mg/kg嗎啡6 d可以成功誘導(dǎo)大鼠CPP建立,與對照組相比,嗎啡組在伴藥箱停留時間明顯增加(P<0.05);生理鹽水替代訓(xùn)練可以使建立的CPP消退,訓(xùn)練第9天后,與對照組比較,在伴藥箱停留時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論嗎啡訓(xùn)練6 d可以誘導(dǎo)大鼠CPP模型建立,生理鹽水替代訓(xùn)練可以使建立的CPP效應(yīng)消退。

    條件性位置偏愛;嗎啡;建立;消退

    藥物成癮是一種反復(fù)發(fā)作的慢性腦疾病,有其復(fù)雜的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)[1]。成癮被認(rèn)為是一種異常學(xué)習(xí)記憶過程,該過程涉及藥物獎賞和藥物相關(guān)環(huán)境、線索之間的關(guān)聯(lián)性學(xué)習(xí)[2]。成癮的主要特征是強(qiáng)迫性用藥和復(fù)發(fā),其中高復(fù)吸率是成癮研究領(lǐng)域的難題,而消退性學(xué)習(xí)可以增加成癮動物的戒斷時間,抑制覓藥能力的恢復(fù),具有干預(yù)復(fù)吸的潛力[2,3]。本研究通過對嗎啡誘導(dǎo)的大鼠CPP的建立和消退的觀測,為阿片類成癮的過程特點(diǎn)和成癮的防治提供一定的實(shí)驗依據(jù)。現(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料 健康雄性SD大鼠20只(由沈陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物中心提供),平均體重(225±25)g;鹽酸嗎啡(青島制藥廠有限公司,中國)。

    1.2 方法

    1.2.1 分組 大鼠隨機(jī)分為對照組和嗎啡組,每組10只,分籠飼養(yǎng),自由進(jìn)食飲水。

    1.2.2 主要儀器設(shè)備 條件性位置偏愛箱(CPP箱)∶CPP箱由兩個規(guī)格相同(長53 cm,寬30 cm,高30 cm)的隔音箱組成。中間有擋板,可以抽拉。擋板底端有小門,動物可自由穿梭,測試時用。另有一套無小門擋板,實(shí)驗訓(xùn)練用。其中一個箱子為黑色,地板為網(wǎng)格狀,另一個箱子為白色,地板為條紋狀。箱體的上方有攝像頭,可以記錄動物活動情況。

    1.2.3 CPP實(shí)驗方法

    1.2.3.1 CPP模型制備分三個階段[4,5]預(yù)測試∶建立模型之前,連續(xù)3 d,每天8:00,讓大鼠自由穿梭于兩個箱體15 min(900 s),第3天記錄大鼠在兩個箱體停留的時間,確定其天然偏好。以大鼠非天然偏好箱為伴藥箱,天然偏好箱為非伴藥箱。條件化訓(xùn)練∶用替代擋板封閉兩箱通道,嗎啡組動物8:00皮下注射嗎啡(10 mg/kg),隨即放入伴藥箱30 min;16:00皮下注射等量的生理鹽水,隨即放非伴藥箱30 min,各1次/d。對照組除將嗎啡替換為生理鹽水之外,其他訓(xùn)練相同。連續(xù)訓(xùn)練6 d。CPP形成測試∶第7天進(jìn)行訓(xùn)練后測試,將有小門的擋板置于兩箱之間,未做任何處理的大鼠放入箱內(nèi),讓其自由活動15 min(900 s),記錄其在右箱(伴藥箱)停留時間。

    1.2.3.2 消退階段[6]CPP形成測試后的次日開始進(jìn)行消退訓(xùn)練,嗎啡組和對照組上下午分別在伴藥箱或非伴藥箱給予生理鹽水訓(xùn)練30 min,連續(xù)訓(xùn)練11 d,每間隔2 d(即消退訓(xùn)練的第3、6、9、12天)進(jìn)行CPP測試。記錄大鼠在右箱(伴藥箱)停留時間,觀測其CPP效應(yīng)的消退程度。消退完全的標(biāo)準(zhǔn)∶大鼠對伴藥箱的偏愛程度降低到測試前水平。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 嗎啡誘導(dǎo)的CPP建立 嗎啡CPP訓(xùn)練6 d后,與對照組相比,大鼠在伴藥箱停留時間顯著增加[(364.20±36.48)s VS (140.22±31.26)s],差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。顯示CPP模型制備成功。見表1。

    2.2 嗎啡誘導(dǎo)的CPP消退 經(jīng)過11 d CPP消退訓(xùn)練后,嗎啡組和對照組大鼠在伴藥箱停留時間測試結(jié)果分別為∶第3天(336.86±39.92)s VS (127.00±16.52)s,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);第6天(214.86±21.22)s VS (135.60±26.99)s,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05);第9天(151.30±36.71)s VS (136.90± 25.93)s,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);第12天(137.90±25.49)s VS (126.20±16.44)s,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。提示第9天后CPP已消退。見表1。

    表1 嗎啡誘導(dǎo)的CPP建立、消退階段大鼠在伴藥箱停留時間比較(±s,s)

    表1 嗎啡誘導(dǎo)的CPP建立、消退階段大鼠在伴藥箱停留時間比較(±s,s)

    注∶與對照組比較,aP<0.05,bP>0.05

    組別 例數(shù) CPP建立階段伴藥箱停留時間 CPP消退訓(xùn)練階段伴藥箱停留時間預(yù)測試 形成測試 第3天 第6天 第9天 第12天對照組 10 133.70±21.74 140.22±31.26 127.00±16.52 135.60±26.99 136.90±25.93 126.20±16.44嗎啡組 10 147.90±24.19 364.20±36.48a 336.86±39.92a 214.86±21.22a 151.30±36.71b 137.90±25.49b

    3 小結(jié)

    CPP實(shí)驗是用于評價藥物成癮性的經(jīng)典實(shí)驗?zāi)P蚚7]。廣泛用于評價藥物的精神依賴情況。該實(shí)驗的基本原理是經(jīng)過訓(xùn)練后使動物建立藥物獎賞效應(yīng)與環(huán)境之間的聯(lián)系,再通過測定動物對先前體驗藥物獎賞效應(yīng)的環(huán)境是否產(chǎn)生偏愛來評價動物對藥物的精神依賴程度[8,9]。

    藥物成癮被認(rèn)為是一種異常學(xué)習(xí)記憶過程,該過程涉及藥物獎賞和環(huán)境、線索之間的關(guān)聯(lián)性學(xué)習(xí),并且伴藥環(huán)境、藥物本身或用藥線索的暴露可以激活原有成癮記憶,使記憶處于不穩(wěn)定狀態(tài),長時的記憶激活后可誘發(fā)消退過程,而消退則能抑制覓藥行為的恢復(fù),具有干預(yù)藥物復(fù)吸的潛力[2]。

    本研究檢測了嗎啡CPP的建立和消退情況,結(jié)果顯示經(jīng)CPP建立階段訓(xùn)練后,成癮大鼠在伴藥箱停留時間明顯增加(即偏愛),表明對嗎啡產(chǎn)生了精神依賴。消退階段的結(jié)果顯示,經(jīng)過生理鹽水CPP消退訓(xùn)練后,已經(jīng)建立的CPP可以消退。實(shí)驗結(jié)果揭示了嗎啡誘導(dǎo)的CPP的建立和消退過程,如果能深入研究其內(nèi)在機(jī)制,將對成癮的形成機(jī)制和探索成癮治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)和治療新思路。

    [1]Merighi S,Gessi S,Varani K,et al.Morphine mediates a proinflammatory phenotype via μ-opioid receptor-PKCε-Akt-ERK1/2 signaling pathway in activated microglial cells.Biochem Pharmacol,2013,86(4):487-496.

    [2]王益琦,劉惠芬.覓藥行為消退的研究進(jìn)展.中國藥物依賴性雜志,2011,20(5):334-339.

    [3]劉文濤,王維勝,何玲,等.成癮行為消退性學(xué)習(xí)的研究進(jìn)展.中國藥理學(xué)通報,2011,27(6):741-745.

    [4]Niwa M,Nitta A,Mizoguchi H,et al.A novel molecule "shati" is involved in methamphetamine-induced hyperlocomotion,sensitization,and conditioned place preference.J Neurosci,2007,27(28):7604-7615.

    [5]邵曉霞,李潔,何繁漪,等.嗎啡誘導(dǎo)條件位置性偏愛大鼠海馬CA1區(qū)NR2A、NR2B的變化.昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,34(6):17-20.

    [6]盧關(guān)伊,吳寧,李錦,等.不同消退方法對嗎啡誘導(dǎo)的小鼠條件性位置偏愛行為的影響.國際藥學(xué)研究雜志,2014,41(4): 473-477.

    [7]張開鎬.評價藥物精神依賴性的試驗方法(二).中國藥物依賴性雜志,2000,9(3):172-173.

    [8]崔彩蓮,韓濟(jì)生.天然獎賞與藥物獎賞.生理科學(xué)進(jìn)展,2005,36(2):103-108.

    [9]郭萍,錢剛,楊明理,等.延胡索和左旋延胡索乙素對大鼠嗎啡條件性位置偏愛效應(yīng)消退作用的比較.時珍國醫(yī)國藥,2012,23(4):831-833.

    Research of acquisition and extinction of conditioned place preference in morphine-induced rats

    CUI Yue,LI Li,GUO Peng-ji,et al.School of Basic Medicine of Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China

    ObjectiveTo observe process in acquisition and extinction of conditioned place preference (CPP) in morphine-induced rats.MethodsA total of 20 healthy male SD rats were randomly divided into control group and morphine group,with 10 rats in each group.Morphine was given through continuous back subcutaneous injection by constant dosage (10 mg/kg).Rats were put in morphine-paired chamber for 30 min after each time of morphine CPP training.After acquisition of CPP,normal saline was used,replacing morphine,for CPP extinction training.Process in morphine CPP extinction was observed.ResultsSubcutaneous injection of morphine by 10 mg/kg for 6 d could provide successfully induced acquisition of CPP in rats.Compared with the control group,the morphine group had longer remain time in morphine-paired chamber (P<0.05).Injection of normal saline would provide CPP extinction.In 9 d of training,there was no statistically significant difference of remain time in morphine-paired chamber between the two groups (P>0.05).ConclusionMorphine training for 6 D can induce acquisition of CPP in rats,and normal saline can provide extinction of CPP.

    Conditioned place preference; Morphine; Acquisition; Extinction

    2015-04-13]

    ∶國家自然科學(xué)基金資助(項目編號∶81441110);遼寧省教育廳科學(xué)研究一般項目(項目編號∶L2014405);沈陽醫(yī)學(xué)院博士科研啟動基金(項目編號∶20133049)

    ∶110034 沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

    DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.205

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