組織金屬蛋白酶抑制物對大鼠腦外傷后神經(jīng)細胞凋亡及基質(zhì)金屬蛋白酶9、胱天蛋白酶3表達的影響

羅　魁,王知非,廖達光

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院神經(jīng)外科,長沙 410013)

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組織金屬蛋白酶抑制物對大鼠腦外傷后神經(jīng)細胞凋亡及基質(zhì)金屬蛋白酶9、胱天蛋白酶3表達的影響

羅魁,王知非※,廖達光

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院神經(jīng)外科,長沙 410013)

摘要：目的探討組織金屬蛋白酶抑制物(TIMP)對大鼠腦外傷后海馬區(qū)腦組織中神經(jīng)細胞凋亡及基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、胱天蛋白酶3(caspase-3)表達的影響，以了解TIMP在大鼠腦外傷后的腦保護作用及其機制。方法將90只體質(zhì)量為250～350 g的SD大鼠按抽簽法隨機分為3組，各30只。正常對照組：不作處理；生理鹽水組：制作大鼠彌漫性軸索損傷模型前0.5 h向側(cè)腦室注入0.9%氯化鈉溶液10 μL；TIMP組：制作大鼠彌漫性軸索損傷模型前0.5 h向側(cè)腦室注入TIMP 10 μL。將生理鹽水組及TIMP組大鼠利用顱腦瞬間旋轉(zhuǎn)模型致鼠腦彌漫性軸索損傷。每組分別于制作腦損傷模型后1、3、6、24、72、168 h共6個時間點處死大鼠，每個時間點隨機選取大鼠5只，取3組大鼠海馬區(qū)腦組織標(biāo)本，用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法檢測凋亡神經(jīng)細胞，用免疫組織化學(xué)法測定MMP-9、caspase-3表達，并比較分析同一時間點3組間的差異。結(jié)果①正常對照組中少見凋亡神經(jīng)細胞，受損傷兩組中凋亡神經(jīng)細胞數(shù)明顯增多(P<0.05)，TIMP組各時間點凋亡神經(jīng)細胞數(shù)均顯著低于生理鹽水組(P<0.05)。②與正常對照組比較，生理鹽水組和TIMP組中MMP-9、caspase-3有明顯表達(P<0.05)，與生理鹽水組比較，TIMP組中在各時間點MMP-9、caspase-3表達顯著下降(P<0.05)。結(jié)論腦外傷后大鼠海馬區(qū)腦組織中存在神經(jīng)細胞凋亡及MMP-9、caspase-3表達的變化,而TIMP能抑制MMP-9表達及caspase-3的激活，使抗凋亡作用增強，減少腦外傷后大鼠海馬區(qū)腦組織中神經(jīng)細胞凋亡，表明其對腦外傷后大鼠具有一定的腦保護作用。

關(guān)鍵詞：腦外傷；細胞凋亡；組織金屬蛋白酶抑制物；基質(zhì)金屬蛋白酶9；胱天蛋白酶3

顱腦損傷在全身創(chuàng)傷中為一種常見的損傷，腦損傷分為原發(fā)性和繼發(fā)性，神經(jīng)細胞凋亡的多少與繼發(fā)性腦損傷程度，乃至整個預(yù)后都密切相關(guān)。研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)參與腦損傷后神經(jīng)細胞凋亡等一系列的病理過程[1]，組織金屬蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP)為MMP的特異性抑制因子，已有研究證實TIMP對顱腦損傷后神經(jīng)細胞凋亡有抑制作用[2]，但其抑制顱腦損傷后神經(jīng)細胞凋亡效果、作用機制目前尚不十分明確。本實驗建立SD(Sprague-Dawley)大鼠顱腦瞬間旋轉(zhuǎn)模型，探討TIMP對大鼠腦彌漫性軸索損傷后海馬區(qū)腦組織中神經(jīng)細胞凋亡及MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)表達的影響，以了解TIMP在大鼠腦彌漫性軸索損傷后的腦保護作用及其機制。

1材料與方法

1.1實驗動物將90只2月齡左右清潔級SD大鼠(體質(zhì)量為200～250 g，中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供)按抽簽法隨機分為3組，雌雄不限，分別為：正常對照組(30只)、生理鹽水組(30只)、TIMP組(30只)。

1.2方法

1.2.1彌漫性軸索損傷模型制作10%水合氯醛(國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號：20100306)按4 mL/kg腹腔注射麻醉SD大鼠，生理鹽水組側(cè)腦室注射0.9%氯化鈉溶液10 μL，TIMP組側(cè)腦室注射CTT[相對分子質(zhì)量為1167.4 g/moL(H-Cys-Thr-Thr-His-Trp-Gly-Phe-Thr-Leu-Cys-OH)，白色粉末，溶于水,BIOMOL公司生產(chǎn)，產(chǎn)品編號:PI136-0001]10 μL,濃度為70 mg/kg，以4 μL/min的速度緩慢注入，參照賀曉生等[3]自制裝置，將側(cè)腦室注射后麻醉狀態(tài)下的大鼠固定于裝置上，待大鼠意識狀態(tài)基本恢復(fù)正常后，利用顱腦瞬間旋轉(zhuǎn)法制作顱腦瞬間旋轉(zhuǎn)模型致鼠腦彌漫性軸索損傷，正常對照組僅做腹腔注射麻醉。

1.2.2腦組織標(biāo)本制作每組分別于制作腦損傷模型后1、3、6、24、72、168 h共6個時間點處死大鼠，每個時間點隨機選取5只大鼠，斷頭取腦，由枕骨大孔處咬開顱骨，完整取出腦組織，注意軟腦膜剝離干凈，在海馬區(qū)附近取5 mm×5 mm×5 mm大小腦組織，放入預(yù)先新鮮配置4%多聚甲醛溶液中浸泡固定>4 h，然后移入30%蔗糖溶液中4 ℃下浸泡，直至沉底(最少2 d)，制成標(biāo)本待檢。

1.2.3TUNEL法檢測凋亡神經(jīng)細胞取腦組織標(biāo)本用冰凍切片機切片，每張片厚20 μm，標(biāo)本片用磷酸鹽緩沖液、蒸餾水洗滌，用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL)檢測3組中6個時間點大鼠腦組織標(biāo)本的凋亡神經(jīng)細胞，取標(biāo)本切片在200倍光鏡下觀察，凋亡神經(jīng)細胞表現(xiàn)為細胞核呈棕色、棕褐色著色，細胞核形態(tài)呈碎點狀，不規(guī)整，大小不一致，結(jié)果判定以細胞核中有棕色、棕褐色顆粒者為TUNEL陽性細胞，隨機觀察并計數(shù)海馬區(qū)5個不重復(fù)視野的TUNEL陽性細胞數(shù)目，計算平均值。

1.2.4免疫組織化學(xué)法測定MMP-9、caspase-3表達取腦組織標(biāo)本在4%多聚甲醛(4 ℃)中固定，過夜，常規(guī)石蠟包埋，石蠟切片機切片，片厚5 μm，每組切片3張，石蠟切片脫蠟，切片放入枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)中微波抗原修復(fù)15 min，用免疫組織化學(xué)法測定3組中6個時間點大鼠的MMP-9、caspase-3表達，取標(biāo)本切片在400倍光鏡下觀察，MMP-9、caspase-3表達陽性的細胞主要表現(xiàn)為細胞質(zhì)著色，細胞核也可見染色，呈彌漫或散在棕黃色、黃色，結(jié)果判定以細胞質(zhì)中有棕黃色、黃色顆粒者為陽性細胞，隨機觀察并計數(shù)海馬區(qū)5個不重復(fù)視野的陽性細胞數(shù)目，計算平均值。

2結(jié)果

2.1用TUNEL法檢測3組大鼠中6個時間點的凋亡神經(jīng)細胞結(jié)果正常對照組中大鼠海馬區(qū)腦組織見少量凋亡神經(jīng)細胞，與正常對照組比較，生理鹽水組和TIMP組各時間點凋亡神經(jīng)細胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，TIMP組各時間點凋亡神經(jīng)細胞數(shù)均顯著低于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。凋亡神經(jīng)細胞表現(xiàn)為細胞核呈棕色、棕褐色著色(圖1，見封三)。

表13組大鼠造模后各時間點凋亡神經(jīng)細胞數(shù)比較

組別1h3h6h24h72h168h正常對照組27.8±1.529.2±1.926.8±1.427.4±1.628.2±2.227.4±1.6生理鹽水組68.2±3.9a71.6±3.4a78.4±3.8a87.6±4.5a89.6±4.4a70.4±3.8aTIMP組48.6±2.4ab50.2±3.0ab54.8±2.5ab67.6±3.7ab56.4±3.8ab33.8±2.6abF328.984346.979530.830451.206418.941421.718P0.0000.0000.0000.0000.0000.000

a與正常對照組比較，P<0.05；b與生理鹽水組比較，P<0.05； TIMP:組織金屬蛋白酶抑制物

2.2用免疫組織化學(xué)法測定3組大鼠中6個時間點的MMP-9表達結(jié)果正常對照組中大鼠海馬區(qū)腦組織見少量MMP-9表達陽性細胞，與正常對照組比較，生理鹽水組及TIMP組各時間點MMP-9表達陽性細胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，MMP-9有明顯表達，與生理鹽水組比較，TIMP組各時間點MMP-9表達陽性細胞數(shù)均顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，MMP-9表達顯著下降。見表2。MMP-9表達陽性細胞主要表現(xiàn)為細胞質(zhì)著色，細胞核也可見染色，呈棕黃色(圖2，見封三)。

表23組大鼠造模后各時間點MMP-9表達陽性細胞數(shù)的比較

組別1h3h6h24h72h168h正常對照組3.2±1.03.4±1.03.4±1.22.0±0.83.2±0.93.6±1.1生理鹽水組6.2±1.5a10.8±1.5a17.2±1.6a27.0±2.4a28.2±2.2a9.4±1.7aTIMP組4.8±1.8ab7.2±1.9ab12.0±2.1ab18.8±2.1ab13.4±1.7ab4.6±1.9abF7.39649.021102.764271.746361.58727.892P0.0080.0000.0000.0000.0000.000

a與正常對照組比較，P<0.05；b與生理鹽水組比較，P<0.05; MMP-9：基質(zhì)金屬蛋白酶9； TIMP:組織金屬蛋白酶抑制物

2.3用免疫組織化學(xué)法測定3組大鼠6個時間點的caspase-3表達結(jié)果正常對照組大鼠海馬區(qū)腦組織見少量caspase-3表達陽性細胞，與正常對照組比較，生理鹽水組及TIMP組各時間點caspase-3表達陽性細胞數(shù)顯著增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05)，caspase-3有明顯表達，與生理鹽水組比較，TIMP組各時間點caspase-3表達陽性細胞數(shù)均顯著減少 (P<0.05)，caspase-3表達顯著下降。見表3。caspase-3表達陽性細胞主要表現(xiàn)為細胞質(zhì)著色，細胞核也可見染色，呈棕黃色(圖3，見封三)。

表33組大鼠造模后各時間點caspase-3

表達陽性細胞數(shù)比較

組別1h3h6h24h72h168h正常對照組4.4±1.24.6±1.03.8±1.14.4±1.44.2±1.25.2±1.5生理鹽水組10.8±1.815.2±2.026.4±2.441.6±2.943.2±2.513.8±1.9TIMP組7.4±1.711.8±2.019.0±2.430.8±2.521.4±2.26.8±1.8F31.84365.484193.528443.390532.29953.413P0.0000.0000.0000.0000.0000.000

caspase-3:胱天蛋白酶3； TIMP:組織金屬蛋白酶抑制物

3討論

彌漫性軸索損傷是一種常見、嚴(yán)重的原發(fā)性顱腦損傷，具有發(fā)生率高、癥狀重、預(yù)后差等特點。彌漫性軸索損傷是由患者頭部遭受旋轉(zhuǎn)暴力所致，在暴力作用下頭部產(chǎn)生旋轉(zhuǎn)加速或減速運動，顱內(nèi)各種組織質(zhì)量不同，尤其是灰、白質(zhì)之間質(zhì)量的差異引起顱內(nèi)各種組織運動速度不一而產(chǎn)生剪應(yīng)力，導(dǎo)致神經(jīng)軸索斷裂、撕裂毛細血管引起局灶性出血。在肉眼下常見胼胝體、大腦灰白質(zhì)交界區(qū)的局灶性出血，嚴(yán)重者可累及橋腦背外側(cè)1/4。彌漫性軸索損傷典型的病理學(xué)改變是軸縮球形成。賀曉生等[3]研究發(fā)現(xiàn),大鼠傷后6 h即在延髓腹側(cè)及中腦頂蓋區(qū)見大量軸索腫脹和軸縮球。

1995年,Rink等[4]在腦外傷后大鼠腦組織中證實創(chuàng)傷性腦損傷后存在神經(jīng)細胞凋亡。1999年,Clark等[5]首次記載了人類腦損傷后存在細胞凋亡。顱腦損傷后很多原因誘發(fā)神經(jīng)細胞凋亡，如機械性損傷、細胞毒性產(chǎn)物、鈣超載、氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸釋放等。腦損傷后凋亡的細胞包括神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞等[6]。神經(jīng)細胞凋亡主要發(fā)生在缺血、缺氧區(qū)及對缺血、缺氧敏感的海馬區(qū)、齒狀回、丘腦及大腦皮質(zhì)等處。近年來對細胞凋亡的研究證明細胞凋亡參與顱腦損傷后繼發(fā)性病理生理演變的全過程[7]。顱腦損傷后神經(jīng)細胞凋亡受多種基因表達產(chǎn)物調(diào)控，如MMP家族、Bcl-2家族、C-Myc、p53、caspases家族等[7]。研究表明,MMP尤其是MMP-9參與各種腦損傷的繼發(fā)性病理生理過程[8]。Gursoy-Ozdemir等[9]在大鼠皮質(zhì)沖擊性腦創(chuàng)傷模型中，應(yīng)用明膠酶譜法及Western blots檢測MMP-9，結(jié)果顯示：腦創(chuàng)傷3 h MMP-9表達開始升高，24 h達高峰。顱腦損傷后MMP-9高表達的可能原因包括[10-11]：①顱腦損傷作為細胞外應(yīng)激信號激活了多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，包括氧化應(yīng)激和絲裂原活化蛋白激酶通路，這兩條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路涉及的主要蛋白質(zhì)為活化蛋白1和核因子κB，它們存在于MMP-9啟動子序列中；②顱腦損傷后迅速發(fā)生炎癥反應(yīng)，這種無菌性炎癥反應(yīng)將產(chǎn)生大量炎性細胞因子，如腫瘤壞死因子、白細胞介素1、白細胞介素6等，這些炎性細胞因子與MMP-9之間存在正反饋關(guān)系。MMP-9高表達途徑可能為：腦損傷→炎性細胞因子(如白細胞介素1、腫瘤壞死因子等)、氧自由基等→氧化應(yīng)激、激活絲裂原活化蛋白激酶→調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白1和核因子κB→MMP-9表達。顱腦損傷后MMP-9高表達既有有害的一面，又有有利的一面。其有害的一面為加重腦損傷，可能機制有[12-13]：①MMP-9能降解血管基質(zhì)、破壞血腦屏障的完整性，導(dǎo)致血腦屏障通透性增加和腦水腫，繼發(fā)腦組織缺血、缺氧；②MMP-9能降解細胞外基質(zhì)，阻斷神經(jīng)細胞間、細胞與細胞外基質(zhì)間的聯(lián)系，導(dǎo)致細胞外網(wǎng)絡(luò)中的細胞存活信號丟失，誘導(dǎo)神經(jīng)細胞失巢凋亡；③MMP-9的另一作用底物是構(gòu)成腦白質(zhì)髓鞘的重要成分——髓磷脂堿蛋白，MMP-9降解髓磷脂堿蛋白引起脫髓鞘病變，導(dǎo)致神經(jīng)功能的損害、缺失；④MMP-9降解血管基質(zhì)從而促進血管內(nèi)白細胞溢出，釋放炎性介質(zhì)，擴大炎癥反應(yīng)，造成腦損害。其有利一面為可重塑細胞外基質(zhì)，促進新生血管形成和細胞遷移有助于修復(fù)損傷。細胞凋亡的發(fā)生是一個復(fù)雜的由caspases家族成員介導(dǎo)的蛋白酶級聯(lián)水解切割反應(yīng)過程[13]。caspase-3處于此過程中的核心地位，被稱為死亡蛋白酶。目前發(fā)現(xiàn)以下3條激活caspases家族途徑[14-15]。①細胞內(nèi)信號(線粒體/細胞色素C介導(dǎo))途徑：通過線粒體釋放細胞色素C到胞質(zhì)，與凋亡激活因子、caspase-9及dATP形成復(fù)合體激活caspase-3，滅活DNA酶的抑制劑而激活DNA酶，導(dǎo)致DNA降解為寡聚核苷酸片段。②細胞外信號(死亡受體介導(dǎo))途徑:即膜死亡受體介導(dǎo)激活caspase-8，再激活caspase-3導(dǎo)致細胞凋亡。③內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)途徑:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放Ca2+，引起胞質(zhì)內(nèi)Ca2+超載，激活caspase-12導(dǎo)致細胞凋亡?；罨腸aspases特別是caspase-3可水解細胞DNA、降解細胞骨架蛋白、裂解DNA修復(fù)關(guān)鍵酶——多聚ADP核糖多聚酶，最終導(dǎo)致細胞凋亡。

本實驗發(fā)現(xiàn)正常對照組中大鼠海馬區(qū)腦組織僅見少量凋亡神經(jīng)細胞及MMP-9、caspase-3表達陽性細胞，受損傷兩組(生理鹽水組及TIMP組)中凋亡神經(jīng)細胞數(shù)及MMP-9、caspase-3表達陽性細胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，生理鹽水組中大鼠腦彌漫性軸索損傷后1 h凋亡神經(jīng)細胞數(shù)開始明顯增多，在24 h達到一個較高的水平，并持續(xù)至72 h到達峰值后開始減少，在168 h減少至接近在1 h數(shù)目，同時MMP-9、caspase-3表達陽性細胞數(shù)存在與凋亡神經(jīng)細胞數(shù)相似的隨時間變化趨勢,說明彌漫性軸索損傷后大鼠海馬區(qū)腦組織中存在神經(jīng)細胞凋亡、MMP-9、caspase-3表達的變化且MMP-9、caspase-3參與神經(jīng)細胞凋亡的過程?？傊?，考慮彌漫性軸索損傷后大鼠海馬區(qū)腦組織中神經(jīng)細胞凋亡、MMP-9、caspase-3表達變化有內(nèi)在聯(lián)系的可能原因為：腦損傷后多因素引起神經(jīng)細胞MMP-9表達上升，MMP-9高表達可引起過度降解血管基質(zhì)、破壞血腦屏障完整性，導(dǎo)致血腦屏障通透性增加和腦水腫，腦組織缺血、缺氧，細胞能量代謝障礙、線粒體功能損害，線粒體膜通道開放、通透性增加，釋放細胞色素C、凋亡誘導(dǎo)因子、Ca2+等物質(zhì)至胞質(zhì)，激活caspase-3表達，最終導(dǎo)致細胞凋亡。

TIMP為MMP的特異性抑制因子，目前已發(fā)現(xiàn)4種，分別命名為TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4。TIMP分為兩個功能區(qū)，N端功能區(qū)的半胱氨酸殘基與MMP的鋅離子活性中心結(jié)合，C端功能區(qū)與MMP的其他部位結(jié)合，阻斷MMP與底物結(jié)合而抑制MMP作用。本實驗TIMP組各時間點凋亡神經(jīng)細胞數(shù)均顯著低于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與生理鹽水組比較，TIMP組各時間點MMP-9、caspase-3表達陽性細胞數(shù)均顯著減少(P<0.05)，TIMP組大鼠腦彌漫性軸索損傷后1 h凋亡神經(jīng)細胞數(shù)開始增多，在72 h到達峰值后開始減少，在168 h減少至接近1 h數(shù)目，同時MMP-9、caspase-3表達陽性細胞數(shù)存在與凋亡神經(jīng)細胞數(shù)相似的隨時間變化趨勢,說明TIMP能抑制神經(jīng)細胞凋亡及MMP-9、caspase-3表達并將MMP-9、caspase-3表達峰值時間縮短。其作用機制可能為：①TIMP能抑制MMP-9表達，減少血管基質(zhì)降解，保持血腦屏障完整性及功能，減輕腦水腫，改善腦組織缺血、缺氧，改善細胞能量代謝障礙、線粒體功能損害，穩(wěn)定線粒體膜、降低線粒體膜通透性，抑制細胞色素C、凋亡誘導(dǎo)因子、Ca2+等物質(zhì)釋放至胞質(zhì)，抑制caspase-3激活，最終減少細胞凋亡。②TIMP能減少細胞外基質(zhì)降解，抑制細胞失巢凋亡。③TIMP能抑制MMP-9引起的髓磷脂堿蛋白降解，保護髓鞘及神經(jīng)功能。④TIMP能減少血管基質(zhì)降解從而抑制血管內(nèi)白細胞溢出，抑制炎性介質(zhì)釋放，縮小炎癥反應(yīng)，減輕腦損害。

綜上所述，TIMP能抑制MMP-9表達及caspase-3的激活，使抗凋亡作用增強，減少神經(jīng)細胞凋亡，對彌漫性軸索損傷后大鼠具有一定的腦保護作用。

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The Effect of Tissue Inhibitor of Metalloproteinase on the Apoptosis of Neuron and Expressions of Matrix Metalloproteinase 9,Caspase-3 after Brain Trauma in Rats

LUOKui,WANGZhi-fei,LIAODa-guang.

(DepartmentofNeurosurgery,theThirdXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410013,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the impact of the tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP) on the nerve cells′ apoptosis and the expressions of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9)s,caspase-3 in the rats′ hippocampus tissue after brain trauma,to study the protections and its′ mechanisms of the TIMP for the rats′ brain after brain trauma.MethodsA total of 90 Sprauge-Dawley rats weighted from 250 to 350 grams were randomly divided into three groups, 30 in each. Control group:no treatment;physiological saline group(PS group):0.9% NaCl 10 μL was injected to the cerebral ventricle 0.5 h before making brain—diffuse axonal injury model;TIMP group: TIMP 10 μL was injected to the cerebral ventricle 0.5 h before making brain—diffuse axonal injury model.Then PS group and TIMP group were made into diffuse axonal injury models by instant rotation model. All rats were killed at 1,3,6,24,72 and 168 h after injury(five rats randomly each time) respectively.The nerve cells′ apoptosis in the rats′ hippocampus tissue was detected by TUNEL and the expressions of MMP-9,caspase-3 in the rats′ hippocampus tissue were detected by immunohistochemistry staining.The differences among three groups at the same time point were compared and analyzed.Results①Neural cell apoptosis was rarely observed in normal control group,while in the other two groups the numbers increased significantly(P<0.05), the number of apoptosis neuronal cells of TIMP group at each time point was significantly lower than the PS group(P<0.05).②Compared with the normal control group,MMP-9 and caspase-3 of the injury group had obvious expression(P<0.05),compared with the PS group, the caspase-3 and MMP-9 expression in TIMP group at each time point was significantly lower(P<0.05).ConclusionThere are nerve cells′ apoptosis and changes of the expressions of MMP-9 and caspase-3 in the rats′ hippocampus tissue after diffuse axonal injury.TIMP can inhibit the expression of MMP-9 and the activation of caspase-3,enhance the anti-apoptosis function,reduce the nerve cells′ apoptosis in the rats′ hippocampus tissue after injury,indicating that TIMP has a certain protection for the rats′ brain after brain injury.

Key words:Brain trauma; Cell apoptosis; Tissue inhibitor of metalloproteinase; Matrix metalloproteinase-9; Caspase-3

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.03.050

中圖分類號：R651.15

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)03-0515-04

收稿日期：2014-06-03修回日期：2014-10-16編輯：樓立理