中國傘菌屬一新記錄種

朱翠玲,馬洪兵*,孟憲鵬,王振,姜淑霞**

1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,山東泰安2710182.山東省泰安市泰山風(fēng)景名勝管理委員會(huì),山東泰安271000

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中國傘菌屬一新記錄種

朱翠玲1,馬洪兵1*,孟憲鵬2,王振1,姜淑霞1**

1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,山東泰安271018
2.山東省泰安市泰山風(fēng)景名勝管理委員會(huì),山東泰安271000

摘要:本文報(bào)道了傘菌屬中國一新記錄種Agaricus flocculosipes，標(biāo)本采自山東省徂徠山國家森林公園。將采集標(biāo)本進(jìn)行詳細(xì)的形態(tài)描述及ITS序列分析，并與傘菌屬相近種進(jìn)行比較。根據(jù)其菌柄表面直立的叢毛狀鱗片這一特點(diǎn)及其拉丁學(xué)名含義命中文名為鱗柄傘。

關(guān)鍵詞:Agaricus flocculosipes;形態(tài)學(xué); ITS序列;分類

傘菌屬Agaricus由林奈1753年建立，目前已知約有200個(gè)種[1,2]。其種類分布廣泛，以溫帶地區(qū)最常見，多為散生或群生[1,3]。該屬主要特征為孢子印紫褐色，菌褶離生，有菌環(huán)，菌蓋與菌柄易分離；菌絲通常無鎖狀聯(lián)合[4-6]，本屬有許多重要的食藥用菌，如廣泛栽培的雙孢菇A. bisporus、巴西蘑菇A. brasiliensis等[7,8]。

在山東省泰山區(qū)系進(jìn)行大型真菌資源調(diào)查過程中，于2012年8月、2013年9月分別在徂徠山國家森林公園光華寺景區(qū)的北瓜場、里峪兩地采集到一傘菌屬大型真菌，采用傳統(tǒng)分類學(xué)及分子生物學(xué)研究方法鑒定標(biāo)本，確定該標(biāo)本為趙瑞琳在泰國發(fā)現(xiàn)并于2012年發(fā)表的新種—Agaricus flocculosipes[9]。目前國內(nèi)并無該種的相關(guān)報(bào)道，為中國新記錄種。根據(jù)菌柄有直立叢毛狀鱗片這一特征及其拉丁學(xué)名含義暫定中文名為鱗柄傘。

1　材料與方法

1.1供試標(biāo)本

本研究標(biāo)本于2012年8月、2013年9月采自山東省泰安市徂徠山國家森林公園。標(biāo)本存放于山東農(nóng)業(yè)大學(xué)省農(nóng)業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室A413室，標(biāo)本編號(hào)12CLS43、13CLS62、13CLS63、13CLJW2、13CLJW5。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集在野外對(duì)標(biāo)本的生態(tài)環(huán)境及外部形態(tài)進(jìn)行現(xiàn)場觀察，填寫采集記錄表，詳細(xì)記錄采集地點(diǎn)的海拔、植被、生長基物等生境及菌體形態(tài)特征，同時(shí)進(jìn)行拍照。將標(biāo)本清理干凈，編號(hào)裝袋后帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.2.2形態(tài)特征觀察將標(biāo)本帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行詳細(xì)形態(tài)描述。用變色硅膠在干燥器內(nèi)吸濕制成干制標(biāo)本。用5% KOH溶液復(fù)原組織結(jié)構(gòu)，顯微鏡下觀察其顯微結(jié)構(gòu)并記錄拍照。隨機(jī)選取100個(gè)成熟的擔(dān)孢子，觀察測量。擔(dān)孢子的大?。簻y量其側(cè)面觀的長度和寬度，小梗的長度不計(jì)入內(nèi)。擔(dān)孢子的長或?qū)捯?a~)b~c(~d)表示，90%的測量數(shù)值為b~c, a、b分別為測量數(shù)據(jù)中的最小值和最大值；擔(dān)孢子的長寬比用Q表示。梅爾澤試劑（Melzer's reagent）染色，判斷其孢子壁是否為淀粉質(zhì)[10]。

1.2.3 ITS序列獲得和系統(tǒng)發(fā)育分析用CTAB法提取子實(shí)體總DNA。內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS1和ITS2）、5.8 S及部分18 S和28 S區(qū)域用ITS1/ITS4引物進(jìn)行擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增在MycyclerTM熱循環(huán)儀上進(jìn)行。反應(yīng)程序如下：94℃預(yù)變性3 min，94℃變性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸1 min、進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min，4℃保存。取5 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后測序，將得到的堿基序列進(jìn)行同源性分析，從GenBank下載同源近似表中相近種序列用于系統(tǒng)發(fā)育分析，以傘菌科青褶傘屬的大青褶傘Chlorophyllum molybdites作為外群，采用MEGA5.05軟件建立系統(tǒng)發(fā)育樹。

2　結(jié)果與分析

2.1生境

在山東泰安8~9月份生于覆蓋枯葉層的板栗林地中，群生，采集地點(diǎn)海拔250~380 m，采集時(shí)日平均氣溫為28~31℃，氣候較干燥，晝夜溫差大。

2.2形態(tài)學(xué)特征

子實(shí)體大型，成熟個(gè)體菌蓋直徑100~150 mm，菌蓋幼時(shí)半球形，呈淺黃至棕褐色；成熟時(shí)平展，顏色暗黃至灰白色；老熟個(gè)體菌蓋中間呈黃褐色，邊緣灰黃色至灰褐色。菌蓋表面有細(xì)鱗片，由于氣候干燥，成熟時(shí)部分個(gè)體菌蓋從中間開裂（圖1-A），老熟后蓋表皮出現(xiàn)銹色斑塊（圖1-B）。菌肉白色，無傷變現(xiàn)象。菌褶離生，幼時(shí)白色，后逐漸變?yōu)轸骷t直至黑褐色。菌褶密，不等長，易于菌肉剝離，寬5~8 mm。子實(shí)體幼時(shí)菌褶全部被內(nèi)菌幕包被，初成熟時(shí)內(nèi)菌幕不規(guī)則破裂呈薄膜狀懸掛于菌蓋邊緣或菌柄上，后逐漸脫落（圖1-B、圖1-D）。菌環(huán)中到大型，位于菌柄上部，單層膜質(zhì)，白色，易脫落。菌柄100~160 mm×10~15 mm（上部）×15~30 mm（基部），中空棒狀，下端膨大，灰白至微黃色，菌環(huán)以上光滑，菌環(huán)以下部位表面有白色鱗片（圖1-C）。無菌托。

圖1　子實(shí)體宏觀形態(tài)圖Fig.1 Axternal morphylogy of the specimen

擔(dān)孢子長橢圓形，(4.41~)4.79~7.64(~8.19)μm×(2.64~)2.88~4.57(~4.94)μm(平均6.25×3.75 μm，Q=1.661)，臍部突出，表面光滑，褐色，壁厚(圖2-G)。梅爾澤試劑不能使孢子壁著色，孢子壁非淀粉質(zhì)。擔(dān)子棒狀，無隔，有四個(gè)小梗(圖2-E、圖2-F)，未觀察到囊狀體。菌髓規(guī)則平行排列(圖2-H)。

圖2　標(biāo)本微觀形態(tài)圖Fig.2 Micro-morphylogy of the specimen

2.3ITS序列獲得和系統(tǒng)發(fā)育分析

用ITS1和ITS4引物對(duì)標(biāo)本的ITS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得長度710~730 bp的序列，將其與Genbank數(shù)據(jù)庫中的核苷酸序列BLAST比較，結(jié)果顯示與Agaricus floculosipes序列（Genbank登錄號(hào)：JN662351等）同源性為99%，相差堿基數(shù)最大為6個(gè)，最小僅1個(gè)。

圖3　基于ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.3 Bootstrap tree based on ITS sequences

刪除相關(guān)序列兩端引物及其上下游序列后建樹，軟件生成的系統(tǒng)樹如圖3所示。傘菌屬Arvensis組的種類A. flocculosipes、A.augustus、A.arvensis、A.subrufescens在系統(tǒng)樹上優(yōu)先聚類。Arvensis組中，所采標(biāo)本（GenBank登錄號(hào)分別為KJ162113、KJ162116、KJ162117、KJ162114、KJ162115）與A. floculosipes模式標(biāo)本序列（GenBank登錄號(hào)JN662351）自展支持率為99%，外群菌株及較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系處在系統(tǒng)樹的外圍，因此確定所采標(biāo)本為A. floculosipes。

系統(tǒng)樹上，2013年采自里峪的標(biāo)本序列（GenBank登錄號(hào)為KJ162114、KJ162115和KJ162116）自展支持率為94%，分離自編號(hào)13CLS63號(hào)的標(biāo)本菌絲序列（GenBank登錄號(hào)KJ162113）與模式標(biāo)本序列自展支持率為28%，這表現(xiàn)出A. flocculosipes基因序列有區(qū)域性差異及種內(nèi)多態(tài)性的特點(diǎn)。

3　討論

本研究標(biāo)本與模式標(biāo)本在子實(shí)體的顏色、菌蓋和菌柄上的鱗片、菌環(huán)形態(tài)及老熟蓋表有紅色斑點(diǎn)等主要特征基本一致，且子實(shí)體均發(fā)生在高溫干燥的氣候條件下。差異之處:徂徠山采集到的標(biāo)本菌蓋直徑100~150 mm，較模式標(biāo)本略小，且沒有觀察到褶緣囊狀體；模式標(biāo)本菌蓋直徑110~180 mm，褶緣囊狀體橢圓形至球形或者棒狀，單個(gè)或鏈狀，有時(shí)缺無。分布的地區(qū)和海拔也有一定的差異，本文報(bào)道種主要分布在N35°E116°的溫帶地區(qū)，海拔為250~380 m；而模式標(biāo)本發(fā)現(xiàn)于N18-20° E98-99°的亞熱帶地區(qū)：泰國及馬約里島，海拔范圍為900~1700 m。

在采集時(shí)有兩個(gè)傘菌屬近似種易混淆：大紫蘑菇A.augustus Fr.、褐鱗蘑菇A. subrufescens Peck，前者較鱗柄傘子實(shí)體略大，菌蓋黃色，蓋表有纖毛組成的紫褐色鱗片，擔(dān)孢子略大，為（7~9）×（5.5~6.5）μm[12]；褐鱗蘑菇較鱗柄傘子實(shí)體個(gè)體相對(duì)較小，菌蓋表面底色米黃，覆蓋有叢毛狀褐色鱗片，孢子橢圓形，(4.5~5.5)×(3~3.5)μm[13]。

本研究種其菌蓋較大，菌肉清香，經(jīng)兩年野外觀察其子實(shí)體均發(fā)生在高溫干燥氣候條件下。采用最大耐受法對(duì)其進(jìn)行了急性毒力測定[14,15]，結(jié)果表明，該種對(duì)昆明小白鼠無急性毒性。由于傘菌屬真菌在食藥用方面占有重要地位，因此推斷該種類具有一定的開發(fā)價(jià)值。

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**通訊作者:Author for correspondence. E-mail:jsx6206@163.com

ANew Record of Agaricus in China

ZHUCui-ling1,MAHong-bing1*,MENGXian-peng2,WANGZhen1,JIANGShu-xia1**

1. College of Plant Protection/Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, China
2. Management Committee of Mountain Tai Scenic Zone, Tai’an 271000, China

Abstract:A species of the genus Agaricus flocculosipes has been recorded for the first time in China and the specimens were collected from Mount Culai National Forest Park in Shandong Province. We described the morphology of Agaricus flocculosipes and ITS sequence analysis comprehensively, compared with those of similar taxa. We named it Linbingsan because of its distinguishing erect floccose squamules on the surface of the stipe and the Chinese translation of its latin name.

Keywords:Agaricus flocculosipes; morphology; ITS sequence; taxonomy

作者簡介:朱翠玲(1988-),女,碩士研究生,研究方向:大型真菌分類. E-mail:zhucuiling1988@163.com.*并列第一作者

基金項(xiàng)目:山東省自然科學(xué)基金(ZR2011CM033)

收稿日期:2014-02-23修回日期: 2014-04-11

文章編號(hào):1000-2324(2015)04-0533-04

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

中圖法分類號(hào):Q-9