抗磷脂綜合征患者補體、抗心磷脂抗體和炎性因子檢測的臨床意義

楊春華 杜榮花 張金文

抗磷脂綜合征是血清中持續(xù)性抗磷脂抗體或β2糖蛋白I陽性引起臨床癥狀，且以性反復動、靜脈血栓或習慣性流產(chǎn)為主要表現(xiàn)的綜合征。其病理表現(xiàn)為小葉間動脈閉塞，纖維蛋白血栓，內(nèi)膜纖維增生，灶性皮質(zhì)萎縮假性腎小球和血栓性微血管?。?］?？沽字C合征作為一種自身免疫疾病，其發(fā)病與血漿補體、自身抗體有一定關(guān)系［2，3］。王海波等［4］研究表明，白介素-6 (IL-6)、白介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)等炎性因子表達參與了抗磷脂綜合征的發(fā)病。本研究對抗磷脂綜合征血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子進行檢測，觀察上述指標在抗磷脂綜合征的發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年9月至2014年11月在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院就診的抗磷脂綜合征患者32例，入選患者均符合中華醫(yī)學會風濕病學會分會制定的“抗磷脂綜合征診斷和治療指南”［5］中的相關(guān)標準，其中男11例，女21例;年齡16～72歲，平均年齡(44 ±11)歲;病程5～229個月，平均病程(68±42)個月;合并疾病:系統(tǒng)性紅斑狼瘡24例，類風濕性關(guān)節(jié)炎3例，干燥綜合征2例，銀屑病2例，強直性脊柱炎1例; 27例發(fā)生血栓事件(發(fā)生腦梗死12例)，其中靜脈血栓15例，動脈血栓7例，動靜脈血栓3例，微血栓2例。選取同期在我院體檢的健康人30例作為對照組，其中男10例，女20例;年齡23～68歲，平均年齡(45±10)歲。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學研究倫理委員會批準。2組性別比、平均年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 入選與排除標準

1.2.1 入選標準:①患者符合“抗磷脂綜合征診斷和治療指南”中的診斷標準;②患者意識清楚，能夠配合檢查;③患者或家屬知情同意，并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準:①腫瘤患者;②嚴重肝、腎和心臟功能不全者;③精神疾病患者，不能配合檢查。

1.3 方法 使用真空采血管抽取受檢者清晨空腹周靜脈血5 ml，2 500 r/min，離心10 min，取血漿、血清備檢。

1.3.1 血漿補體檢測:采用美國貝克庫曼爾特實驗系統(tǒng)(蘇州)有限公司生產(chǎn)的C3、C4、C4d、C5b-9試劑盒，采用Elisa方法進行檢測。檢測時首先將標準品進行稀釋，然后在酶標板進行加樣，使用封板膜封板37℃溫育30 min，同時將濃縮洗滌液進行稀釋，揭掉封板膜，棄去液體甩干，每孔加入襲擊也靜置后棄去，重復5次，拍干后加入酶標試劑，再次進行溫育和洗滌，加入顯色劑，振蕩混勻后，避光顯色，然后加入終止液，在450 nm波長測定吸光光度值，以標準誤濃度為橫坐標，吸光光度值為縱坐標，繪制標準曲線，計算實際濃度。

1.3.2 血清抗心磷脂抗體檢測:檢測患者IgA、IgG、IgM水平，檢測試劑盒購自上海撫生實業(yè)有限公司，采用ELISA方法進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3.3 血漿炎性因子檢測:檢測患者TNF-α、IL-6、白介素-1β(IL-1β)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)水平，檢測試劑盒購自上海閎巨實業(yè)有限公司，采用ELISA方法進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統(tǒng)計學分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，患者血漿補體、炎性因子均為正態(tài)分布的計量資料，以±s表示，采用t檢驗，血清抗心磷脂抗體陽性率為計數(shù)資料，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 2組血漿補體水平比較 抗磷脂綜合征組患者C3、C4水平低于對照組，而C4d和C5b-9水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 2組血漿補體水平比較 ±s

表1 2組血漿補體水平比較 ±s

注:與抗磷脂綜合征組比較，*P＜0.05

組別 C3(g/L) C4(g/L) C4d (μg/ml) C5b-9 (μg/ml)抗磷脂綜合征組(n=32)0.91±0.29 0.19±0.06 5.5±2.3 2 750±657對照組(n=30) 1.31±0.44*0.28±0.05*1.8±1.3* 711±325*

2.2 2組血清抗心磷脂抗體陽性率比較 抗磷脂綜合征組IgA、IgG和IgM陽性率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 2組血清抗心磷脂抗體陽性率比較 例(%)

2.3 2組血漿炎性因子水平比較 抗磷脂綜合征組TNF-α和 IL-1β水平顯著高于對照組，而 IL-6和VEGF水平低于對照組，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 2組血漿炎性因子水平比較 pg/ml，±s

表3 2組血漿炎性因子水平比較 pg/ml，±s

注:與抗磷脂綜合征組比較，*P＜0.05

組別 TNF-α IL-6 IL-1βVEGF抗磷脂綜合征組(n=32)29±6 1.89±0.26 5.3±2.3 67±15對照組(n=30) 23±3* 2.95±1.31* 2.1±1.4* 110±42*

3 討論

抗磷脂綜合征是一種自身免疫性疾病，其特點為抗磷脂抗體引起的血栓栓塞事件和(或)流產(chǎn)。Prinz等［6］研究表明，抗磷脂綜合征患者的3種人單克隆抗磷脂抗體與IgG組分可增加漿細胞樣樹突狀細胞細胞內(nèi)Toll樣受體和單核細胞TLR8的mRNA表達。同時，它們也可誘導TLR7或TLR8從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)易位至內(nèi)體。王芳［2］對文獻資料整理發(fā)現(xiàn)，補體系統(tǒng)的過度激活是抗磷脂綜合征患者發(fā)生流產(chǎn)和血栓的關(guān)鍵因素?？紫槊竦龋?］發(fā)現(xiàn)，抗β2GPⅠ-β2GPⅠ復合物能夠促進小鼠腹腔巨噬細胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達，而β2GPⅠ是抗磷脂抗體的主要靶抗原［8］。本研究對抗磷脂綜合征血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子進行檢測，觀察上述指標在抗磷脂綜合征的發(fā)病中的作用。

3.1 抗磷脂綜合征與血漿補體的關(guān)系 機體內(nèi)的補體可以輔助和補充特異性抗體，介導免疫溶菌、溶血作用，C3在補體系統(tǒng)活化過程中起連接作用，C4主要參與C3經(jīng)典激活途徑中C3轉(zhuǎn)化酶的形成，與免疫識別和維持免疫穩(wěn)定有關(guān)。C4d可以與細菌、免疫復合物等結(jié)合，促進吞噬細胞吞噬。C5b-9是一種末端效應(yīng)產(chǎn)物，可以促使多種細胞表達蛋白、產(chǎn)生炎性因子等。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)C3、C4水平降低，可能與補體系統(tǒng)過度激活，消耗大量補體有關(guān)［9］。本研究表明，抗磷脂綜合征組患者C3、C4水平低于對照組，而C4d和C5b-9水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C4d和C5b-9為補體降解產(chǎn)物，而上述指標的升高說明補體激活失控，研究發(fā)現(xiàn)，血栓形成與補體活化產(chǎn)物增多，沉積到血管內(nèi)皮細胞有關(guān)［10］。

3.2 抗磷脂綜合征與抗心磷脂抗體的關(guān)系 郭虹等［11］對反復流產(chǎn)的患者進行研究發(fā)現(xiàn)，抗心磷脂抗體陽性率明顯高于對照組(P＜0.05)。王喜春等［12］發(fā)現(xiàn)腦梗死患者抗心磷脂抗體陽性率高于正常人群(P＜0.05)。上述研究表明，抗心磷脂抗體與流產(chǎn)和血栓形成有密切關(guān)系，其主要作用機制可能是(1)抗心磷脂抗體能與血小板和(或)血管內(nèi)皮細胞膜磷脂發(fā)生反應(yīng)，抑制前列環(huán)素的產(chǎn)生，同時損傷內(nèi)皮細胞后，使纖溶酶原激活物水平降低，血小板發(fā)生聚集，從而發(fā)生血栓;(2)抗心磷脂抗體可以使子宮PG12水平降低，胎盤發(fā)生梗塞，也可以損傷胎盤血管內(nèi)皮發(fā)生血管炎，導致胎兒發(fā)生宮內(nèi)窘迫或者死亡。本研究表明，抗磷脂綜合征組IgA、IgG和IgM陽性率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3.3 抗磷脂綜合征與炎性因子的關(guān)系 張鵬等［13］對靜脈血栓栓塞患者進行研究發(fā)現(xiàn)，血栓患者TNF-α、IL-6水平與對照組比較，顯著升高(P＜0.05)，TNF-α、IL-6與凝血因子相互作用從而發(fā)生血栓。而王暉等［14］研究表明，反復流產(chǎn)的患者IL-6水平反而降低。動物實驗發(fā)現(xiàn)VEGF在血栓溶解和血管再通中發(fā)揮積極作用，本研究中抗磷脂綜合征患者VEGF水平明顯低于對照組(P＜0.05)。說明抗磷脂綜合征患者發(fā)生血栓的幾率較大。

綜上所述，抗磷脂綜合征患者血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子與正常人群比較，均有不同程度的改變，說明血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子可能參與了抗磷脂綜合征的發(fā)病過程。

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