高效液相色譜法測(cè)定五黃養(yǎng)陰顆粒中黃芩苷含量

楊帆

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

高效液相色譜法測(cè)定五黃養(yǎng)陰顆粒中黃芩苷含量

楊帆

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

目的 建立測(cè)定五黃養(yǎng)陰顆粒中黃芩苷含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法 色譜柱為Waters Symmetry Shield RP18柱(150 mm× 3.9 mm，5 m)，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.7的0.05 mol／L磷酸二氫鈉溶液(42∶58），檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，流速為1.5 mL／min，柱溫30℃。結(jié)果 黃芩苷進(jìn)樣量在0.10～2.00 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9)；平均回收率為98.70%，RSD=1.40% （n=6）。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、靈敏度高，重復(fù)性好，可用于五黃養(yǎng)陰顆粒的質(zhì)量控制。

五黃養(yǎng)陰顆粒；黃芩苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

五黃養(yǎng)陰顆粒為黃連、黃芩等藥味組成的復(fù)方制劑，具有燥濕化痰、益氣養(yǎng)陰的功效，用于消渴病屬痰濕內(nèi)滯、氣陰兩虛證，證見口渴喜飲，多食善饑，尿頻尿多，頭身困重，嘔惡痰涎，倦怠乏力，氣短懶言，自汗盜汗，心悸失眠，形體肥胖，咽燥口干，心煩畏熱，溲赤便秘等。方中黃芩清熱燥濕，與療效具有直接的關(guān)系，但質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)其進(jìn)行含量控制。筆者參考文獻(xiàn)[1-3]，建立了高效液相色譜（HPLC）法，用于測(cè)定方中黃芩所含有效成分黃芩苷的含量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國(guó)）；HP-Chemstation色譜工作站。黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110715-201117，含量為91.7%）；五黃養(yǎng)陰顆粒（重慶東田藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為130302，130504，130702）；甲醇為色譜醇，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry Shield RP18柱（150 mm×3.9 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-用磷酸調(diào) pH至2.7的0.05 mol／L磷酸二氫鈉溶液(42∶58）；流速：1.5 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品0.010 91 g，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取樣品適量，研細(xì)，精密稱取0.2 g，置50 mL量瓶中，加70%乙醇40 mL，密塞，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺黃芩的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法制取陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液10 μL，注入液相色譜儀，依法進(jìn)樣。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜與黃芩苷對(duì)照品溶液及供試品溶液色譜峰相應(yīng)位置無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1，5，10，15，20 μL，以進(jìn)樣量 C(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積 A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程 Y=3 456 X-40.28，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.10～2.00 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.9%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同批樣品（批號(hào)為130302），依法制備供試品溶液，測(cè)定黃芩苷的含量。結(jié)果的 RSD為1.03%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取新制備的同一供試品溶液，分別于放置0，2，4，8，12 h時(shí)進(jìn)樣10 μL，測(cè)定黃芩苷峰面積。結(jié)果的 RSD=1.08% （n=5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已測(cè)定含量的同批樣品（批號(hào)為130302）6份各0.1 g，分置50 mL容量瓶中，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液適量，按供試品溶液制備方法操作，測(cè)定黃芩苷量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品適量，依法測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為130302，130504，130702的樣品中黃芩苷含量分別為16.79，17.32，16.51 mg／g。

3 討論

參照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》黃芩藥材黃芩苷含量測(cè)定項(xiàng)下方法，采用70%乙醇作為提取溶劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。試驗(yàn)中分別對(duì)超聲提取時(shí)間20，30，40 min進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲處理30 min能將樣品中黃芩苷提取完全。

在流動(dòng)相選擇試驗(yàn)中，考察了黃芩苷測(cè)定常用的流動(dòng)相：甲醇 -水-磷酸（47∶53∶0.2）[4-7]、甲醇-用磷酸調(diào) pH至2.7的0.05mol／L磷酸二氫鈉溶液(42∶58），結(jié)果采用后者為流動(dòng)相時(shí)，供試品溶液中黃芩苷色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間更穩(wěn)定。

綜上，本法操作簡(jiǎn)便，黃芩苷分離效果較好，具有良好的重復(fù)性和回收率，可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

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Determination of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules by HPLC

Yang Fan
(Chongqing Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 401121)

Objective To establish a method for the determination of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules by HPLC.Methods Waters SymmetryShield RP18column(150 mm×3.9 mm，5 m)was used with the mobile phase of methnol-0.05% sodium dihydrogen phosphate solution(pH=2.7，42∶58)，The flow rate was 1.5 mL／min,the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 280 nm. Results Baicalin showed good linear relationship at the range 0.10～2.00 g(r=0.999 9).The average recovery was 98.70% （RSD=1.40%，n=6）.Conclusion The method is convenient，quick，accurate，repeatable and is suitable for the quality control of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules.

Wuhuangyangyin Granules;baicalin;HPLC;determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)17-0052-02

楊帆（1982-），女，大學(xué)本科，副主任中藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治?、藥品?shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，（電話）023-86072723（電子信箱）18695847＠qq.com。

2015-01-27；

2015-03-24)