重組人促紅細(xì)胞生成素對腦白質(zhì)損傷3日齡鼠膠質(zhì)纖維酸性蛋白表達(dá)的影響

齊俊冶， 宋燕燕， 周卓妍， 蔡岳鞠， 陳美苑， 肖旭文， 王蘭秀

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市婦女兒童醫(yī)療中心新生兒科，廣東廣州510623；2.暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系，廣東廣州510632）

重組人促紅細(xì)胞生成素對腦白質(zhì)損傷3日齡鼠膠質(zhì)纖維酸性蛋白表達(dá)的影響

齊俊冶1，2， 宋燕燕1， 周卓妍2， 蔡岳鞠1， 陳美苑2， 肖旭文1， 王蘭秀1

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市婦女兒童醫(yī)療中心新生兒科，廣東廣州510623；2.暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系，廣東廣州510632）

目的：探討重組人促紅細(xì)胞生成素（rhEPO）對3日齡大鼠缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷的膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）表達(dá)的影響.方法：150只3日齡（P3）SD大鼠隨機(jī)分為對照組，腦室周圍白質(zhì)軟化（PVL）組和rEPO治療組.于造模后1、7、21 d對各組大鼠腦質(zhì)量損傷百分比進(jìn)行檢測，造模后3、7、14、21 d用免疫組織化學(xué)方法觀察腦組織GFAP表達(dá)情況等來研究EPO對3日齡大鼠缺血缺氧性腦白質(zhì)損傷的保護(hù)作用.結(jié)果：PVL組和rEPO組的腦質(zhì)量損傷%在各取樣時間點均明顯大于對照組（P＜0.05），且rEPO組明顯小于PVL組（P＜0.05）.HE染色示PVL組術(shù)后7 d胼胝體結(jié)構(gòu)疏松，術(shù)后21 d可見側(cè)腦室擴(kuò)大明顯；rEPO組術(shù)后7 d胼胝體結(jié)構(gòu)基本正常，術(shù)后21 d側(cè)腦室僅稍微擴(kuò)大.術(shù)后3 d PVL組GFAP陽性表達(dá)增多（P＜0.05），術(shù)后7 d rEPO組和PVL組GFAP陽性表達(dá)均明顯增多（P＜0.05），且PVL組增多更為明顯（P＜0.05）；術(shù)后14 d rEPO組與PVL組GFAP陽性表達(dá)開始回落，但仍多于對照組（P＜0.05），PVL組陽性表達(dá)數(shù)仍然比rEPO組多（P＜0.05），術(shù)后21 d各組GFAP陽性表達(dá)數(shù)基本回落至正常水平.結(jié)論：腦白質(zhì)損傷時GFAP陽性表達(dá)增加，rEPO能減少腦白質(zhì)損傷后GFAP陽性表達(dá).

重組促紅細(xì)胞生成素；腦室周圍白質(zhì)軟化；膠質(zhì)纖維酸性蛋白；缺血缺氧

隨著圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)及新生兒重癥監(jiān)護(hù)技術(shù)的發(fā)展，早產(chǎn)兒存活率明顯增加，但早產(chǎn)兒腦損傷發(fā)病率的升高.早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化（periventricular leukomalacia，PVL）是早產(chǎn)兒最常見的腦損傷類型，可引起痙攣性腦性癱瘓、認(rèn)知及行為學(xué)異常等后遺癥［1］.促紅細(xì)胞生成素（recombinant human erythropoietin，rEPO）作為造血因子用于早產(chǎn)兒貧血的治療外，對早產(chǎn)兒缺血缺氧腦損傷也具有神經(jīng)保護(hù)作用［2-3］.膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）是腦星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的一種中間絲蛋白，生理情況下腦內(nèi)少有表達(dá)，在病理條件下，星形膠質(zhì)細(xì)胞從靜息狀態(tài)快速向活化狀態(tài)轉(zhuǎn)變，其典型表現(xiàn)是星形膠質(zhì)細(xì)胞增多、肥大.GFAP的大量表達(dá)是星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的一個重要特征.而反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生是中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷或炎癥后常見現(xiàn)象，典型表現(xiàn)是星形膠質(zhì)細(xì)胞增多、肥大，GFAP表達(dá)增加.促紅細(xì)胞生成素在缺血缺氧性腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用是否與其抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增生有關(guān)？本實驗采用3日齡SD大鼠建立PVL模型，通過給予重組促紅細(xì)胞生成素（rEPO）干預(yù)，從病理形態(tài)學(xué)和GFAP免疫組織化學(xué)表達(dá)改變的觀察來探索rEPO對3日齡腦損傷鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及其可能作用機(jī)制.

1 材料和方法

1.1 材料

（1）實驗動物 清潔級SD大鼠，購自廣東省實驗動物中心，許可證號：SCXK（粵）2009-0011，大鼠合籠分娩后取新生3日齡SD大鼠150只，雌雄不限，體質(zhì)量8.0～10.0 g.

（2）試劑3 000 IU／2 mL重組人促紅細(xì)胞生成素注射液（利血寶），批號為國藥準(zhǔn)字J20090008購自麒麟鯤鵬生物藥業(yè)有限公司；免疫組化試劑（GFAP）購于廣州微科生物科技有限公司，SABC免疫組化（兔IgG）染色試劑盒購于武漢博士德生物公司.Lecia RM2255病理切片機(jī)為德國萊卡公司產(chǎn)品，BDM130／200數(shù)碼生物顯微鏡為重慶奧特光學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品.

1.2 方法

（1）動物分組及模型的制備 3日齡SD大鼠隨機(jī)分為3組每組50只.①對照組：僅分離左側(cè)頸總動脈，然后縫合皮膚，不結(jié)扎不缺氧；②rEPO組：參照Back等［4］方法結(jié)扎左側(cè)頸總動脈后離斷，術(shù)后置于體積分?jǐn)?shù)分別為6%氧氣＋94%氮氣混合氣缺氧箱中缺氧2.5 h，PVL模型建立后給予rEPO質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 000 U／kg腹腔1次性注射；③PVL組：造模方法同rEPO組，模型建立后腹腔注射等量的生理鹽水.各組再按缺血缺氧后1、3、7、14、21 d再隨機(jī)分為5個亞組.

（2）各組大鼠各日齡腦質(zhì)量損傷百分比的檢測

各組大鼠用體積分?jǐn)?shù)為4%多聚甲醛心臟灌注后斷頭取腦，剔除嗅球、腦干、小腦等，均勻分割左右半球，用微量天平分別稱重.大鼠各日齡的腦質(zhì)量損傷%＝（右腦質(zhì)量-左腦質(zhì)量）／右腦質(zhì)量×100%.

（3）石蠟切片制作及HE染色 將腦組織置于體積分?jǐn)?shù)為4%多聚甲醛固定48 h后梯度酒精脫水，二甲苯透明后石蠟包埋，根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜［5］，選擇離前囟1.2～0.6 mm距離行冠狀切片，片厚5μm，切面包括腦室、胼胝體、內(nèi)囊、腦室周圍.行常規(guī)HE染色.

（4）GFAP表達(dá)檢測 各組大鼠用體積分?jǐn)?shù)為4%多聚甲醛心臟灌注后斷頭取腦，同上法制作石蠟切片，經(jīng)脫蠟脫水，微波抗原修復(fù)20 min，體積分?jǐn)?shù)為3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物，牛血清白蛋白（BSA）室溫封閉10～15 min，兔抗大鼠GFAP抗體（1∶50）4℃過夜，抗兔的生物素化二抗置37℃孵育20 min，鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶（SABC）試劑置37℃孵育20 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染、分化、脫水、透明、中性樹脂封片.

（5）圖像分析處理 Olypus SDP70數(shù)碼相機(jī)圖像采集系統(tǒng)采圖，Image pro plus6.0軟件對圖像進(jìn)行分析，每張切片于放大400倍鏡下同一部位隨機(jī)選取5個不同的視野采圖，免疫組化檢測測量陽性細(xì)胞數(shù)，求其平均數(shù)作為最后的陽性結(jié)果，記錄陽性細(xì)胞數(shù).

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)均以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（±s）表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)差異.免疫組化采用單盲法統(tǒng)計實驗結(jié)果即閱片時未知樣本資料.

2 結(jié)果

2.1 大鼠術(shù)后行為學(xué)改變

對照組大鼠術(shù)后無明顯行為改變，rEPO組和PVL組大鼠缺氧箱內(nèi)缺氧時主要表現(xiàn)為嗜睡，部分鼠偏向一側(cè)爬行或不能翻身，有的可見發(fā)紺，躁動不安，四肢抽動，甚至死亡.恢復(fù)氧供后皮膚顏色恢復(fù)，其余癥狀也逐步消失.

2.2 大鼠術(shù)后不同時間點腦重量變化

術(shù)后1 d rEPO組及PVL組大鼠腦重量均大于對照組，而術(shù)后7、21 d時均小于對照組腦重量（P＜0.05）；rEPO組腦重量術(shù)后7、21 d比PVL組大（P＜0.05，表1）.

表1 對照組、rEPO組及PVL組術(shù)后不同時間腦重量變化（±s）Table 1 The brain weight of control、rEPO and PVL group at different times after operation（±s）

表1 對照組、rEPO組及PVL組術(shù)后不同時間腦重量變化（±s）Table 1 The brain weight of control、rEPO and PVL group at different times after operation（±s）

1）與對照組比較P＜0.05；2）與PVL組比較P＜0.05.

組別 n／只 W術(shù)后1d／g W術(shù)后7d／g W術(shù)后21d／g對照組8 0.26±0.04 0.66±0.03 1.83±0.01 rEPO組 8 0.31±0.011） 0.57±0.021），2）1.16±0.021），2）PVL組 8 0.34±0.021） 0.43±0.031） 0.87±0.051）F值19.724 39.271 66.921

2.3 大鼠術(shù)后不同時間點腦質(zhì)量損傷%變化

各組腦質(zhì)量損傷隨著日齡的增加而增大，其中PVL組和rEPO組各日齡的腦質(zhì)量損傷均明顯大于對照組（P＜0.05）；rEPO組術(shù)后1、7 d的腦質(zhì)量損傷%均明顯小于PVL組（P＜0.05，表2）.

表2 對照組、rEPO組及PVL組術(shù)后不同時間腦質(zhì)量損傷變化（±s）Table 2 The percentage of brain damage quality of control、rEPO and PVL group at different times after operation（±s）

表2 對照組、rEPO組及PVL組術(shù)后不同時間腦質(zhì)量損傷變化（±s）Table 2 The percentage of brain damage quality of control、rEPO and PVL group at different times after operation（±s）

1）與對照組比較P＜0.05；2）與PVL組比較P＜0.05.

組別 n／只 腦質(zhì)量損傷變化／%術(shù)后1 d 術(shù)后7 d 術(shù)后21 d對照組8 0.29±0.47 0.37±0.17 0.18±0.08 rEPO組 8 13.36±5.401），2）25.32±6.511），2）34.38±10.371）PVL組 8 27.74±7.251） 37.6.52±8.121）40.95±11.341）F值93.50 80.80 97.35

2.4 大鼠腦組織形態(tài)學(xué)改變

對照組大腦不同日齡肉眼未見明顯異常，rEPO組及PVL組術(shù)后1 d可見腦水腫，術(shù)后7 d腦水腫減輕，可見腦萎縮和軟化灶，rEPO組腦水腫及腦萎縮情況均較PVL組輕.

術(shù)后3 d在結(jié)扎側(cè)側(cè)腦室周圍白質(zhì)區(qū)域出現(xiàn)小孔狀壞死灶，術(shù)后7 d皮質(zhì)下及胼胝體區(qū)組織學(xué)染色顯示：對照組結(jié)構(gòu)正常，弧形板狀的胼胝體神經(jīng)纖維束向兩半球內(nèi)部輻射，形態(tài)及走向清晰，PVL組可見皮質(zhì)下及胼胝體結(jié)構(gòu)松散，弧形板狀的胼胝體神經(jīng)纖維束紊亂、呈現(xiàn)疏松網(wǎng)狀，rEPO治療組皮質(zhì)下結(jié)構(gòu)基本正常，胼胝體神經(jīng)纖維束走向較清晰，胼胝體神經(jīng)纖維束結(jié)構(gòu)基本正常；術(shù)后7 d各組側(cè)腦室基本相同；術(shù)后21 d對照組腦室正常，rEPO組側(cè)腦室稍三角區(qū)微擴(kuò)大，PVL組側(cè)腦室三角區(qū)擴(kuò)大明顯（圖1）.

圖1 大鼠腦組織HE染色（×100）Fig.1 The brain HE staining（×100）

2.5 各組大鼠不同日齡GFAP免疫組織化學(xué)染色情況

GFAP在腦內(nèi)主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，GFAP陽性表達(dá)呈棕黃色，位于胞漿，呈或長或短、或粗或細(xì)放射狀突起.術(shù)后3 d對照組GFAP陽性細(xì)胞數(shù)較少，胞體內(nèi)GFAP棕黃色表達(dá)較少，PVL組GFAP陽性細(xì)胞數(shù)目及表達(dá)程度較對照組顯著增加，而rEPO組GFAP陽性表達(dá)僅有少量增加；術(shù)后7 d對照組GFAP陽性表達(dá)無明顯變化，rEPO組和PVL組GFAP陽性表達(dá)均明顯增多，棕黃色染色陽性表達(dá)多，呈網(wǎng)狀，片狀分布，且PVL組表現(xiàn)更明顯，GFAP陽性細(xì)胞計數(shù)明顯增多（P＜0.05），染色程度最明顯；術(shù)后14 d對照組GFAP陽性細(xì)胞仍無明顯變化，其余各組GFAP陽性表達(dá)有所回落，但依然表現(xiàn)為PVL組最多，rEPO組次之，對照組最少，各組均有顯著性差別；術(shù)后21 d各組GFAP陽性表達(dá)逐漸減少且再無顯著性差別.GFAP陽性細(xì)胞主要集中在胼胝體及腦室周圍白質(zhì)，皮層下白質(zhì)未見明顯GFAP陽性細(xì)胞（圖2，表3）.

表3 對照組、rEPO組及PVL組不同時間點胼胝體GFAP陽性細(xì)胞數(shù)的變化（±s）Table 3 The GFAP positive cells of control、rEPO and PVL group at different times after operation（±s）

表3 對照組、rEPO組及PVL組不同時間點胼胝體GFAP陽性細(xì)胞數(shù)的變化（±s）Table 3 The GFAP positive cells of control、rEPO and PVL group at different times after operation（±s）

1）與對照組比較P＜0.05；2）與PVL組比較P＜0.05.

組別 n／只 術(shù)后3 d細(xì)胞數(shù) 術(shù)后7 d細(xì)胞數(shù) 術(shù)后14 d細(xì)胞數(shù) 術(shù)后21 d細(xì)胞數(shù)對照組5.61±1.24 8.34±3.52 7.45±3.41 6.30±2.05 rEPO組 8 7.55±1.822） 28.38±5.461），2） 16.05±4.351），2） 8.95±1.61 PVL組 8 16.54±0.981） 45.38±5.011） 22.68±4.271） 11.59±3.37F值8 85.92 61.15 65.18 21.18

圖2 胼胝體及腦室周圍GFAP免疫組織化學(xué)圖像（×400）Fig.2 The immunohistochemistry staining of GFAP around the corpus callosum and ventricle

3 討論

腦白質(zhì)是大腦內(nèi)部由眾多神經(jīng)元軸突聚集形成的部位，腦白質(zhì)損傷（whitematter damage，WMD）是早產(chǎn)兒特有的腦損傷形式之一，其病理特點主要是腦白質(zhì)損傷部位出現(xiàn)缺血性損傷，反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤、少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷和髓鞘損害以及軸突損傷等［6］.星形細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最主要的膠質(zhì)細(xì)胞，生理條件下在調(diào)控未成熟腦前體細(xì)胞的分化發(fā)育和功能變化中起重要作用.在中樞神經(jīng)發(fā)育過程中，膠質(zhì)細(xì)胞在維持髓鞘發(fā)育和分布中有關(guān)鍵作用［7］.膠質(zhì)細(xì)胞損傷能導(dǎo)致髓鞘數(shù)量不足和或異常髓鞘，最后將導(dǎo)致PVL患兒發(fā)展為腦癱和認(rèn)知功能障礙［8］.因此，本研究從反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生角度探討其與腦白質(zhì)損傷的關(guān)系以及rEPO在腦白質(zhì)損傷早產(chǎn)鼠神經(jīng)系統(tǒng)中可能的保護(hù)作用.

Kellert等［9］研究中指出對7日齡新生大鼠采用不同劑量rEPO治療腦損傷，其效果顯示連續(xù)3天經(jīng)皮下注射rEPO質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 000 U／kg組比2 500 U／kg和3 000 U／kg組在大鼠缺血缺氧性腦損傷后2 d和7 d的神經(jīng)保護(hù)作用更大.Statler等［10］研究發(fā)現(xiàn)rEPO高質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 000 U／kg可使大鼠腦組織中rEPO緩慢增加，與皮下注射相比，腹腔內(nèi)注射血漿中rEPO峰值濃度更高且腦組織rEPO濃度也更高.在臨床中Brown等［11］也證實促紅細(xì)胞生成素的神經(jīng)保護(hù)作用可能是累積劑量依賴性，尤其在遠(yuǎn)期智力發(fā)育指數(shù)（MDI）分?jǐn)?shù)中明顯.不管是動物實驗還是臨床實驗均表明高質(zhì)量分?jǐn)?shù)可能對腦損傷神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用更明顯，故本實驗中采用的rEPO質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 000 U／kg，給藥方式為單次腹腔注射.

膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）是腦內(nèi)AS中間纖維的結(jié)構(gòu)蛋白組成成分，首先從腦內(nèi)AS中分離出來，為星形膠質(zhì)細(xì)胞的特征性標(biāo)記物［12］.GFAP型中間絲在維持星形細(xì)胞形態(tài)和功能上都有作用：在細(xì)胞核和細(xì)胞膜之間形成連接，參與細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架重組、細(xì)胞粘附、維持腦內(nèi)髓鞘形成和神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)以及作為細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等.生理情況下腦內(nèi)少有表達(dá)，在病理條件下，星形膠質(zhì)細(xì)胞從靜息狀態(tài)快速向活化狀態(tài)轉(zhuǎn)變，活化具有瀑布效應(yīng)，限定性表達(dá)是它發(fā)揮作用的基礎(chǔ)，上調(diào)機(jī)制尚未完全闡明.反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生是中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷或炎癥后常見現(xiàn)象，其典型表現(xiàn)是星形膠質(zhì)細(xì)胞增多、肥大，GFAP表達(dá)增加.GFAP的大量表達(dá)是星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的一個重要特征.損傷局部大量星形細(xì)胞增殖形成反應(yīng)性星形膠質(zhì)化，反應(yīng)性星形細(xì)胞參與變性髓鞘的吞噬活動，因而有利于損傷修復(fù)，但反應(yīng)性星形細(xì)胞亦能干擾未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化發(fā)育影響髓鞘形成，在腦損傷炎癥反應(yīng)中出現(xiàn)的反應(yīng)性星形細(xì)胞增生會形成以膠質(zhì)纖維酸性蛋白為特征的纖維化，纖維化形成“疤痕”是阻礙損傷的中樞神經(jīng)纖維再生的重要因素［13］.

已有研究發(fā)現(xiàn)腦白質(zhì)損傷新生兒腦室周圍白質(zhì)軟化（PVL）發(fā)生與該區(qū)GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多有密切關(guān)系，抑制損傷病變的修復(fù)［14-15］.本實驗結(jié)果顯示對照組各時間點腦室周圍組織GFAP陽性細(xì)胞數(shù)目較少，說明生理情況下GFAP僅有少量表達(dá).而缺血缺氧致PVL組該區(qū)GFAP陽性表達(dá)在術(shù)后3 d較對照組顯著加深；術(shù)后7 d GFAP陽性表達(dá)明顯增多且達(dá)高峰期，甚至可見網(wǎng)狀、片狀表達(dá).以后PVL組GFAP陽性表達(dá)會逐漸回落，但仍處于高表達(dá)狀態(tài)直到術(shù)后21 d才回復(fù)到正常.而星形膠質(zhì)細(xì)胞在缺血缺氧后3 d出現(xiàn)活化、GFAP陽性表達(dá)增加，在術(shù)后7 d GFAP的大量表達(dá)達(dá)到峰值.與國內(nèi)外腦白質(zhì)損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP表達(dá)增多的研究結(jié)果相符合［16-17］.另外，術(shù)后7 d PVL組開始出現(xiàn)胼胝體神經(jīng)纖維束紊亂、結(jié)構(gòu)松散等組織學(xué)變化，而此時對照組，EPO組組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常，胼胝體區(qū)神經(jīng)纖維束形態(tài)及走向清晰；術(shù)后21 d形態(tài)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)對照組腦室大小正常，PVL組側(cè)腦室三角區(qū)擴(kuò)大明顯，說明PVL模型是成功，GFAP高陽性表達(dá)與腦室周圍白質(zhì)軟化的組織學(xué)病理改變有相關(guān)性.

本研究結(jié)果中，3日齡新生鼠腦白質(zhì)損傷后腦組織中GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增多，而高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的rEPO治療組術(shù)后各對應(yīng)的時間點GFAP表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)明顯小于PVL組，尤其以術(shù)后7 d明顯.表明高劑量的rEPO治療可以減少GFAP的陽性表達(dá)，形態(tài)學(xué)也呈現(xiàn)rEPO組胼胝體神經(jīng)纖維束結(jié)構(gòu)及走向基本正常，提示rEPO可能在一定程度上抑制缺血缺氧所致的腦白質(zhì)損傷后新生大鼠腦內(nèi)反應(yīng)性星形膠質(zhì)化的增生，減少膠質(zhì)瘢痕的形成，對神經(jīng)系統(tǒng)起到一定的保護(hù)作用.術(shù)后更長時間（術(shù)后21 d）病理形態(tài)學(xué)觀察也證明rEPO對缺血缺氧所致的腦室周圍白質(zhì)軟化的保護(hù)作用，結(jié)果顯示術(shù)后21 d對照組側(cè)腦室正常，rEPO組側(cè)腦室三角區(qū)稍微擴(kuò)大，而未給予rEPO干預(yù)的PVL組側(cè)腦室三角區(qū)明顯擴(kuò)大，表明rEPO的及時干預(yù)能有效防止缺血缺氧所致的腦室周圍白質(zhì)軟化.本研究團(tuán)隊及他人研究均證實rEPO具有神經(jīng)保護(hù)作用［18-19］.對腦的保護(hù)作用可能是多途徑：穩(wěn)定神經(jīng)細(xì)胞膜、抑制神經(jīng)元的凋亡［20］、改善少突膠質(zhì)細(xì)胞的成熟障礙及髓鞘發(fā)育延遲［21］等.本實驗研究進(jìn)一步證實rEPO能減輕缺氧缺血對腦白質(zhì)的損傷作用，其作用的可能機(jī)制是能在一定程度抑制腦白質(zhì)損傷后反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生，減少膠質(zhì)瘢痕的形成.但具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究.

綜上，缺血缺氧所致的腦白質(zhì)軟化時GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)增加，rEPO能減少腦白質(zhì)損傷后GFAP陽性細(xì)胞的表達(dá)，在神經(jīng)細(xì)胞損傷的修復(fù)中可能起保護(hù)作用.

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［責(zé)任編輯：朱穎嫄］

Effects of recombinant human erythropoietin on the expression of GFAP in P3 neonatal rats w ith whitematter damage

QI Junye， SONG Yanyan， ZHOU Zhuoyan， CAIYuejü， CHEN Meiyuan，XIAO Xüwen， WANG Lanxiu
（1.The Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou Women and Children＇s Medical Center，Guangzhou 510623，China；2.Department of Physiology，School ofmedicine，Jinan University，Guangzhou 510632，China）

Aim：To explore the neuroprotection effects of recombinant human erythropoietin（rEPO）on 3 day-old neonatal ratswith whitematter damage.M ethods：150 three day-old Sprague-Dawley（SD）ratswere randomly divided into control，periventricular leukomalacia（PVL）and rEPO treatment groups（each group n＝50）.The brain weightand percentage of the brain damagewere recorded at1 d、7 d and 21 d post operation.Immunohistochemistrymethod was used to determine the changes of GFAP expres-sion levels in the brain at3 d、7 d、14 d and 21 d.Results：The percentage of brain damage in the rEPO and PVL groupswas found to be significantly increased compared to the control group（P＜0.05）at each sampling time point，but that of rEPO group was less than PVL group（P＜0.05）；Compared to the control group，HE staining showed that in the rEPO group the structure of callosum was basically normal at7 d post-operation but the lateral ventricles became mildly expanded at 21 d post-operation.However，a loose callosum structure and dilated lateral ventricles were observed at the same sampling time point in PVL group；The expression of GFAP in PVL group was found to be increased at 3 d post-operation（P＜0.05）.The expression of GFAP in both rEPO and PVL groups increased significantly compared to that of the control group 7 d aftermodeling，especially in PVL group（P＜0.05）.The expression of GFAP in both rEPO and PVL groups increased slightly but still higher than that of the control group（P＜0.05），and GFAP expression level in PVL group was higher than that of rEPO group（P＜0.05）14 d aftermodeling.At21 d post-operation，the expression of GFAP in each group recovered to normal levels.Conclusion：The expression of GFAP increased after damage of the whitematter.rEPO treatment can significantly reduce the expression level of GFAP after the whitematter damage.

erythropoietin； whitematter damage； glial fibrillary acidic protein； hypoxia-ischemia

R722.1；R338.2

A

1000-9965（2015）05-0410-07

10.11778／j.jdxb.2015.05.010

2015-03-30

廣東省科技計劃項目（2012B061700010）

齊俊冶（1989-），女，碩士，醫(yī)師，研究方向：新生兒腦損傷

周卓妍，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，Mobile：13602805735；E-mail：zhuoyanzhou＠126.com