不同發(fā)酵類型的茶葉原花青素含量的比較分析

侯冬巖，回瑞華，刁全平，李鐵純，武曉英

(鞍山師范學院 化學與生命科學學院,遼寧 鞍山 114007)

不同發(fā)酵類型的茶葉原花青素含量的比較分析

侯冬巖，回瑞華，刁全平，李鐵純，武曉英

(鞍山師范學院 化學與生命科學學院,遼寧 鞍山 114007)

采用超聲波法從不同發(fā)酵類型的茶葉中提取原花青素化合物，通過正交實驗確定了最佳提取條件，并建立了原花青素的光譜分析方法.方法的回收率為99.15%～104.50%，相對標準偏差小于1.27%.結(jié)果表明，3種不同發(fā)酵類型的茶葉中原花青素的含量情況是：不發(fā)酵的綠茶含量最多，其次是半發(fā)酵青茶，全發(fā)酵紅茶含量最少.

不同發(fā)酵類型的茶葉；原花青素；超聲波法；正交實驗

原花青素(Procyanidins，簡稱PC)是指從植物中分離得到的一類在熱酸處理下能產(chǎn)生花色素的多酚化合物.近年來,該類化合物所體現(xiàn)的生物活性屢見報道,如抗氧化和清除自由基等[1～6],這些引起了人們極大的關(guān)注.目前,關(guān)于原花青素的測定方法還無統(tǒng)一標準,而文獻報道的幾種方法中,正丁醇法[7]受原花青素結(jié)構(gòu)的影響較大,對于低聚合度原花青素的測定并不適宜，香草醛-硫酸法[8]由于硫酸的強氧化作用也使得測定結(jié)果偏低.本文在低濃度香草醛-鹽酸法[9]基礎(chǔ)上進行了改進,采用超聲波法提取不同發(fā)酵類型茶葉中原花青素，對提取條件進行了正交實驗，對不同發(fā)酵類型茶葉中原花青的含量進行比較分析.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

UV-036紫外分光光度計(美國Varian公司)；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)；離心機(上海安亭科學儀器廠).

原花色素標準品：天津市金測分析技術(shù)有限公司;甲醇、氯仿、乙酸乙酯、鹽酸、香草醛等試劑均為分析純.

1.2 實驗樣品

樣品：玉帶綠茶、青茶王子冠、滇紅工夫紅茶，均產(chǎn)于云南.

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制 精確稱取0.010 g原花青素標準品，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋溶解定容至刻度，得到濃度為1.00 mg/mL標準品儲備液，搖勻，備用.

1.3.2 樣品前處理及樣品溶液的制備 將茶樣品粉碎，過0.45 mm的篩，得茶樣品粉末.

準確稱取茶樣品粉末2.00 g置于50 mL錐形瓶中，加入10 mL 90%甲醇溶液，在20 ℃下超聲提取4次，每次提取60 min[10]，再放入離心機中，以3 000 r/min離心20 min后，合并提取液并從中準確移取1 mL提取液至10 mL容量瓶中，用90%甲醇定容，搖勻，作為樣品儲備液備用.

1.3.3 原花青素吸收曲線的繪制及測定波長的確定 準確吸取1.3.1標準溶液1 mL，置于10 mL具塞試管中，加入5 mL 1∶1混合的1%的香草醛-8%鹽酸溶液，放入30 ℃的水浴中避光加熱30 min，后取出靜置至室溫，在波長400～800 nm范圍內(nèi)掃描，最大吸收波長為497.0 nm，如圖1.

準確移取1.3.2樣品儲備液1 mL，置于10 mL具塞試管中，加入5 mL 1∶1混合后的1%的香草醛-8%鹽酸溶液，在30 ℃的水浴中避光加熱30 min，后取出靜置至室溫，在波長400～800 nm范圍內(nèi)掃描，最大吸收波長為497.0 nm，如圖2.

由圖1和圖2看到，原花青素可做為測定的標準品，測定波長為497.0 nm.

1.3.4 標準曲線的繪制 分別取0.10,0.20,0.30,0.40,0.50,0.60,0.70 mL的原花青素標準溶液于10 mL具塞試管中，加入5 mL1∶1混合的1%的香草醛-8%鹽酸溶液，放入30 ℃的水浴中避光加熱30 min，取出靜置至室溫.在吸收波長為497.0 nm處測定A值，A與濃度關(guān)系的回歸方程為:A=1.179 8×C-0.010 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 2，在0.10～0.70mg/mL范圍內(nèi)，A與濃度C呈良好線性關(guān)系如圖3所示.

1.3.5 測定方法 將3種茶樣分別按1.3.2處理，在497.0nm波長下分別測定其吸光度值，每個樣品測定3次，按標準曲線法求出其原花青素的含量.

2 結(jié)果分析

2.1 超聲波提取茶樣中原花青素的正交實驗

采用正交設(shè)計的方法對甲醇溶劑濃度、超聲提取時間、次數(shù)、溫度因素進行實驗[11]，確定茶樣中原花青素的最佳提取條件見表1.

表1 水平因素表

正交實驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析：取16份茶樣品，按表1正交設(shè)計方法進行實驗，結(jié)果見表2和表3.

由表3正交實驗的方差分析可知，由于D的偏差平方和>C的偏差平方和>B的偏差平方和>A的偏差平方和，所以4種因素對實驗結(jié)果的影響依次為超聲溫度、次數(shù)、時間、甲醇溶劑濃度值.分析結(jié)果表明，最佳提取條件為：D1C2B4A4，即為：超聲溫度20 ℃、超聲次數(shù)4次、超聲時間60min、甲醇溶劑濃度值為90%.

表2 正交實驗結(jié)果

表3 正交實驗的方差分析

注F0.05(3,3) = 9.28

2.2 樣品穩(wěn)定性實驗

用1.3.2的方法配制的茶樣品進行穩(wěn)定性實驗，結(jié)果表明：樣品放置120min，測得其吸光度值基本不變.

表4 方法精密度

2.3 方法精密度實驗

制備一定濃度的標準品溶液，測定9次，求得其標準偏差及變異系數(shù)，結(jié)果列于表4.

2.4 方法回收率實驗

取相同濃度的樣品，按標準加入法加入3個不同濃度的原花青素標準品溶液，測定A值，帶入回歸方程，計算回收率，結(jié)果見表5.

表5 方法回收率

2.5 樣品中原花青素含量的測定

3種茶樣在497.0nm波長下分別測定其吸光度值，按標準曲線法定量分析出其中所含原花青素的含量，結(jié)果列于表6.

表6 原花青素的含量

3 結(jié)論

實驗結(jié)果表明3種不同發(fā)酵類型的茶葉中原花青素的含量情況是：不發(fā)酵的綠茶含量最多，其次是半發(fā)酵青茶，全發(fā)酵紅茶含量最少，說明茶葉中原花青素的含量隨著發(fā)酵程度增大而減少.

原花青素是自然界中廣泛存在的聚多酚類混合物，研究表明，原花青素具有抗氧化、清除自由基、抑制腫瘤、抗誘變的能力.目前國內(nèi)外的研究僅限于對葡萄、山楂、銀杏、高粱等等植物中原花青素的研究[12～14]，對于茶葉中原花青素的研究少見報道.因此對茶葉中原花青素含量的分析很有必要，可以豐富我國原花青素的天然植物資源，為進一步開發(fā)利用茶葉起到一定推動作用.

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(責任編輯：陳 欣)

HOU Dongyan，HUI Ruihua,DIAO Quanping,LI Tiechun,WU Xiaoying

(SchoolofChemistryandLifeScience,AnshanNormalUniversity,AnshanLiaoning114007,China)

Ultrasonic method is used to extract procyanidins from different types of tea fermentation compounds,the best extraction conditions were determined through orthogonal experiment,and establish the spectral analysis method of procyanidins.Method of recovery is 99.15%～99.15%,relative standard deviation less than 1.27%.Results show that the three different types of tea fermentation zhongyuan anthocyanin content is:not fermented green tea most abundant,followed by half fermented oolong tea,all is least fermented black tea. Key words different types of fermentation tea;procyanidins;ultrasonic method;orthogonal test

2015-10-10

遼寧省教育廳科學技術(shù)基金資助課題(20331079).

侯冬巖(1962-)，男,吉林省吉林市人，鞍山師范學院化學與生命科學學院教授，主要從事天然功能食品科學研究.

O657．3

A

1008-2441(2015)06-0039-04