婦炎舒膠囊對慢性子宮內(nèi)膜炎大鼠的治療作用及其機(jī)制

黃 譜，周 筠，崔 剛，楊寶德，趙文寶，劉傳鎬，胡 浩

（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部：1．第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科；2．藥理學(xué)系；3．病理學(xué)系，陜西西安 710061）

慢性子宮內(nèi)膜炎是指由各種原因?qū)е碌淖訉m內(nèi)膜組織結(jié)構(gòu)發(fā)生的炎癥改變，是慢性盆腔炎的一種病理改變，嚴(yán)重威脅著女性的健康［1］。作為一種婦科多發(fā)病，子宮內(nèi)膜炎常發(fā)于急性感染之后，或者由于體質(zhì)較差、抵抗力較弱而引發(fā)。子宮內(nèi)膜炎好發(fā)于已婚育齡期婦女，臨床多表現(xiàn)為子宮不規(guī)則出血、不孕、流產(chǎn)、反復(fù)發(fā)作的盆腔痛以及性交困難［2］。慢性子宮內(nèi)膜炎的有效治療對提高女性生活質(zhì)量及生育功能有著重要意義。西醫(yī)治療慢性子宮內(nèi)膜炎一般是以去除病因?yàn)橹?，而抗生素和激素的長期應(yīng)用很容易產(chǎn)生耐藥性，并且副作用較多。采用傳統(tǒng)中藥治療該病可以在很大程度上減少上述弊端的發(fā)生［3-4］。婦炎舒膠囊是由忍冬藤、大血藤、大青葉、甘草、赤芍、蒲公英、丹參、大黃（制）、虎杖、川楝子（制）和延胡索（制）11味中藥制成的棕褐色的顆粒物，具有清熱涼血、活血止痛的功效，用于女性盆腔炎癥等引起的帶下量多、腹痛的臨床治療。本實(shí)驗(yàn)主要觀察了婦炎舒膠囊對苯酚膠漿劑致大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎的治療作用及其抗炎機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供更充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動物 SD品系大鼠60只，SPF級，雌性，體質(zhì)量180～220g，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心，動物合格證號：SCXK 2007-001。

1．2 藥品和試劑 婦炎舒膠囊，楊凌東科麥迪森制藥有限公司，批號：20110309；金雞膠囊，廣西靈峰藥業(yè)有限公司，批號：7509073；戊巴比妥鈉，中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司；腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素-2（IL-2）放免試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所。

1．3 方法

1．3．1 模型的建立 參照文獻(xiàn)方法［3，5］，取60只健康SD品系雌性大鼠，其中50只制作慢性子宮內(nèi)膜炎動物模型。戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠后暴露其子宮，用4號頭皮針頭在子宮分叉處右側(cè)朝卵巢方向進(jìn)針，緩緩注入250mL／L苯酚膠漿0．05mL（液化苯酚5mL，西黃耆膠1g，甘油4mL，加蒸餾水配至20mL）；左側(cè)子宮不注射作為自身對照。另外10只SD大鼠為假手術(shù)組，僅做開關(guān)腹手術(shù)，不注射苯酚膠漿造模。

1．3．2 分組及給藥 造模后所有動物正常喂養(yǎng)1周，第8天將大鼠隨機(jī)分為6組：①假手術(shù)組（給予蒸餾水10mL／kg）；②模型組；③金雞膠囊組（0．65g／kg）（即標(biāo)準(zhǔn)對照組）；④婦炎舒膠囊大劑量組（1．8g／kg）；⑤婦炎舒膠囊中劑量組（0．9g／kg）；⑥婦炎舒膠囊小劑量組（0．45g／kg）。大鼠灌胃給藥容積均為1mL／100g體重，連續(xù)給藥28d。

1．3．3 炎癥因子的檢測 給藥28d后，在戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉下開腹從腹主動脈取血，離心血清，放免法測定血清中腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素-2（IL-2）含量。

1．3．4 大鼠子宮病理學(xué)檢測 連續(xù)給藥28d后，麻醉取血后肉眼觀察大鼠子宮腫脹、積水、充血、扭曲以及與其他盆腔臟器粘連情況；之后仔細(xì)摘取大鼠雙側(cè)子宮卵巢進(jìn)行稱重，子宮左右兩側(cè)的重量差值即為炎癥腫脹程度，求出腫脹率及子宮卵巢臟體比值的變化；將子宮組織用100mL／L甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，進(jìn)行HE染色后鏡下觀察子宮組織病理形態(tài)學(xué)改變。參照文獻(xiàn)方法［6］進(jìn)行評價(jià)，指標(biāo)包含：①子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增生變化；②上皮細(xì)胞變性、壞死變化；③子宮內(nèi)膜炎癥細(xì)胞浸潤改變；④子宮內(nèi)膜充血、水腫情況。按照病變發(fā)生的嚴(yán)重程度分為4級：正常、輕度、中度和重度，分別給予0、1、2、3分的評分。

2 結(jié) 果

2．1 婦炎舒膠囊對苯酚膠漿劑致子宮內(nèi)膜炎大鼠體質(zhì)量的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠造模后5周體重減輕較明顯（P＜0．01）；與模型組比較，婦炎舒膠囊大、中劑量組大鼠給藥后4周體重增加較明顯（P＜0．05，表1），提示婦炎舒膠囊對苯酚膠漿致子宮內(nèi)膜炎大鼠體重下降具有一定的減緩作用。

表1 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠體質(zhì)量的影響Tab．1 Effects of Fuyanshu Capsule on body weight in endometritis rats（±s，n＝10）

表1 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠體質(zhì)量的影響Tab．1 Effects of Fuyanshu Capsule on body weight in endometritis rats（±s，n＝10）

與假手術(shù)組比較，＃＃P＜0．01；與模型組比較，＊P＜0．05。

分 組 劑量（g／kg） 造模前體質(zhì)量（g） 給藥前體質(zhì)量（g） 給藥后4周體質(zhì)量（g）假手術(shù)組-190．30±7．80 211．20±6．83 253．80±11．61模型組 - 192．00±10．18 209．40±9．44 238．20±12．15＃＃金雞膠囊組 0．65 192．60±11．82 208．10±12．96 239．10±7．96婦炎舒大劑量組 1．80 191．20±9．91 211．91±8．56 249．36±6．47＊婦炎舒中劑量組 0．90 191．90±11．41 210．90±8．99 248．70±5．52＊婦炎舒小劑量組0．45 191．20±8．88 208．60±10．43 239．30±5．83

2．2 婦炎舒膠囊對苯酚膠漿劑致子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮卵巢臟體比值及子宮腫脹率的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠子宮卵巢臟體比值明顯增加（P＜0．01）；與模型組比較，金雞膠囊組和婦炎舒膠囊大、中、小劑量組大鼠子宮卵巢臟體比值均顯著降低（P＜0．05，P＜0．01）。與模型組比較，金雞膠囊組和婦炎舒膠囊大、中、小劑量組子宮腫脹率均明顯下降（P＜0．01，表2）。說明婦炎舒膠囊對苯酚膠漿劑致子宮內(nèi)膜炎大鼠的子宮炎癥程度有較顯著的抑制作用。

2．3 婦炎舒膠囊對苯酚膠漿劑致子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮內(nèi)膜組織病理學(xué)的影響 肉眼大體觀察可見，模型組大鼠中絕大多數(shù)子宮管壁變薄，管腔內(nèi)可見大量黃色或清亮液體，管腔呈重度擴(kuò)張；子宮漿膜面可見充血、腫脹，顏色多暗紅。與模型組比較，各給藥組子宮積水、充血、腫脹以及子宮扭曲等炎癥表現(xiàn)均有不同程度減輕。子宮組織病理學(xué)檢測表明，模型組大鼠子宮內(nèi)膜出現(xiàn)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞等不同程度浸潤，而且子宮內(nèi)膜有程度不等的水腫、充血病變，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)增生、變性、壞死等改變。與模型組大鼠比較，用藥后金雞膠囊組和婦炎舒膠囊大、中、小劑量組大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增生、變性、壞死等變化以及炎細(xì)胞浸潤和子宮內(nèi)膜的水腫、充血等病理改變改善顯著（表3、圖1）。婦炎舒膠囊大劑量組大鼠用藥后上述病理改變改善更為顯著，說明婦炎舒膠囊對慢性子宮內(nèi)膜炎有良好的治療作用。

表2 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮卵巢臟體比值及子宮腫脹率的影響Tab．2 Effects of Fuyanshu Capsule on the ratio of swelling uterus and ovaries to body weight in endometritis rats（±s，n＝10）

表2 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮卵巢臟體比值及子宮腫脹率的影響Tab．2 Effects of Fuyanshu Capsule on the ratio of swelling uterus and ovaries to body weight in endometritis rats（±s，n＝10）

與假手術(shù)組比較，＃＃P＜0．01；與模型組比較，＊＊P＜0．01。

組別 劑量（g／kg）子宮卵巢臟體比值（g／100g）腫脹率（%）假手術(shù)組- 0．19±0．02 0．53±1．12模型組 - 0．23±0．02＃＃ 37．83±11．04＃＃金雞膠囊組 0．65 0．21±0．01＊＊ 19．95±7．51＊＊婦炎舒大劑量組 1．80 0．20±0．02＊＊ 17．07±5．10＊＊婦炎舒中劑量組 0．90 0．21±0．02＊＊ 21．98±4．99＊＊婦炎舒小劑量組 0．45 0．22±0．02＊＊ 22．17±7．68＊＊

表3 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮內(nèi)膜組織病理學(xué)觀察結(jié)果評分的影響Tab．3 Effects of Fuyanshu Capsule on endometrial histopathology in endometritis rats（±s，n＝10）

表3 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮內(nèi)膜組織病理學(xué)觀察結(jié)果評分的影響Tab．3 Effects of Fuyanshu Capsule on endometrial histopathology in endometritis rats（±s，n＝10）

與假手術(shù)組比較，＃＃P＜0．01；與模型組比較，＊P＜0．05，＊＊P＜0．01。

組別 劑量（g／kg） 上皮細(xì)胞增生 上皮細(xì)胞變性、壞死 炎細(xì)胞浸潤 內(nèi)膜充血、水腫假手術(shù)組-0．20±0．42 0．10±0．32 0．30±0．48 0．10±0．32模型組 - 0．90±0．57＃＃ 0．80±0．63＃＃ 1．50±0．71＃＃ 0．80±0．63＃＃金雞膠囊組 0．65 0．30±0．48＊ 0．30±0．48 0．50±0．53＊＊ 0．40±0．52婦炎舒大劑量組 1．80 0．20±0．42＊＊ 0．20±0．42＊ 0．30±0．48＊＊ 0．30±0．48婦炎舒中劑量組 0．90 0．20±0．42＊＊ 0．30±0．48 0．60±0．52＊＊ 0．40±0．52婦炎舒小劑量組 0．45 0．30±0．48＊ 0．40±0．52 0．80±0．42＊0．50±0．53

圖1 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮內(nèi)膜組織病理學(xué)的影響Fig．1 Effects of Fuyanshu Capsule on endometria histological changes in endometritis rats（×100）

2．4 婦炎舒膠囊對苯酚膠漿劑致子宮內(nèi)膜炎大鼠血清炎癥因子的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清白細(xì)胞介素-2（IL-2）水平顯著升高（P＜0．05）；與模型比較，婦炎舒膠囊大劑量組大鼠血清IL-2水平明顯降低（P＜0．05）；其余各組與模型組比較，血清腫瘤壞死因子（TNF-α）和IL-2水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表4）。

表4 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠血清炎癥因子的影響Tab．4 Effects of Fuyanshu Capsule on serum inflammatory cytokines in endometritis rats（±s，n＝10）

表4 婦炎舒膠囊對子宮內(nèi)膜炎大鼠血清炎癥因子的影響Tab．4 Effects of Fuyanshu Capsule on serum inflammatory cytokines in endometritis rats（±s，n＝10）

與假手術(shù)組比較，＃P＜0．05；與模型組比較，＊P＜0．05。

組別 劑量TNF-αIL-2（g／kg） （ng／mL） （ng／mL）假手術(shù)組- 1．95±0．37 5．79±2．14模型組 - 2．04±0．36 8．45±1．97＃金雞膠囊組 0．65 1．80±0．63 6．90±2．07婦炎舒大劑量組 1．80 2．12±0．58 6．47±1．98＊婦炎舒中劑量組 0．90 1．78±0．67 6．95±1．54婦炎舒小劑量組0．45 2．03±0．64 8．13±2．59

3 討 論

慢性盆腔炎是一種較常見的婦科疾病，是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥改變。該病易反復(fù)發(fā)作并且遷延不愈，對女性生活質(zhì)量影響嚴(yán)重。目前，慢性盆腔炎還沒有一種效果顯著的臨床療法。諸多臨床實(shí)踐和研究資料表明，中藥及其成分治療慢性盆腔炎已形成其獨(dú)特優(yōu)勢，不僅療效確切，而且反復(fù)長時(shí)間用藥后不易產(chǎn)生耐藥性及不良反應(yīng)［4，7］。慢性子宮內(nèi)膜炎是慢性盆腔炎的一種病理改變。本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制苯酚膠漿致大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎模型，主要觀察了婦炎舒膠囊對慢性子宮內(nèi)膜炎的治療作用及其抗炎機(jī)制。結(jié)果表明，婦炎舒膠囊可顯著改善子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮內(nèi)膜的相關(guān)病理改變，其抗炎作用機(jī)制可能與降低IL-2水平有關(guān)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，子宮內(nèi)膜炎多是由于濕熱瘀結(jié)而引起，日久正氣受損，氣血運(yùn)行不暢，經(jīng)絡(luò)受阻，從而導(dǎo)致不通則痛［8］。婦炎舒膠囊能有效治療慢性子宮內(nèi)膜炎，與該方具有清熱涼血、活血止痛的功效密切相關(guān)。婦炎舒膠囊中忍冬藤、大血藤、丹參活血化瘀、疏風(fēng)通絡(luò)，使氣血運(yùn)行通暢；大青葉、蒲公英、甘草、赤芍清熱涼血、解毒抗炎，能除其標(biāo)；佐以大黃、虎杖、川楝子、延胡索以清熱利濕、散瘀止痛。諸藥相合既能抗炎止痛，又能改善微循環(huán)，共奏清熱利濕、理氣化瘀、散瘀止痛之功，因此對慢性子宮內(nèi)膜炎有良好的療效。

子宮內(nèi)膜炎不僅是盆腔炎的主要病理改變，還可能由于其上行感染從而導(dǎo)致盆腔其他臟器的炎癥表現(xiàn)。由于大鼠子宮在盆腔生殖器官中占有相當(dāng)大的比例，因而復(fù)制大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎基本上可以代表慢性盆腔炎的特征，在動物實(shí)驗(yàn)中常應(yīng)用大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎代表大鼠慢性盆腔炎［9-10］。本研究結(jié)果顯示，大鼠子宮內(nèi)注射苯酚膠漿后，子宮管壁變薄，管腔內(nèi)可見大量黃色或清亮液體，管腔呈重度擴(kuò)張；子宮漿膜面可見充血、腫脹，顏色多暗紅；組織病理學(xué)結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜出現(xiàn)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞等不同程度浸潤，而且有程度不等的水腫、充血病變，上皮細(xì)胞出現(xiàn)增生、變性、壞死等改變。婦炎舒膠囊能不同程度的抑制慢性子宮內(nèi)膜炎大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增生、變形、壞死，以及炎細(xì)胞浸潤。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，婦炎舒膠囊對苯酚膠漿致大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎有良好的治療作用。

炎癥反應(yīng)對機(jī)體的損害主要由炎癥過程中釋放的多種炎癥因子共同作用所致。TNF-α和IL-2是參與炎癥反應(yīng)的重要炎癥因子，可激發(fā)一系列級聯(lián)反應(yīng)，造成組織細(xì)胞的損害［11］。婦炎舒膠囊組方中的忍冬藤、大血藤、甘草、大青葉、蒲公英、虎杖等味藥均具有解毒抗炎的功效。本研究進(jìn)一步探討了婦炎舒膠囊對炎癥因子TNF-α及IL-2的影響。結(jié)果顯示，婦炎舒大劑量組大鼠血清IL-2水平明顯降低，而對TNF-α無明顯影響，提示婦炎舒膠囊治療子宮內(nèi)膜炎的抗炎作用機(jī)制可能與降低IL-2水平有關(guān)。

［1］SMITH M，HAGERTY KA，SKIPPER B，et al．Chronic endometritis：a combined histopathologic and clinical review of cases from2002 to 2007［J］．Int J Gynecol Pathol，2010，29（1）：44-50．

［2］DI PIETRO C，CICINELLI E，GUGLIELMINO MR，et al．Altered transcriptional regulation of cytokines，growth factors，and apoptotic proteins in the endometrium of infertile women with chronic endometritis［J］．Am J Reprod Immunol，2013，69（5）：509-517．

［3］向海燕，侯連兵，黃嗣航，等．金剛藤分散片對大鼠慢性盆腔炎的藥效學(xué)研究［J］．中藥材，2007，30（4）：449-452．

［4］CAO D．Clinical application of the empirical prescriptions for chronic pelvic inflammation［J］．J Tradit Chin Med，2004，24（2）：112-115．

［5］王靜，楊軍，劉超．盆腔炎顆粒對大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎療效的研究［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12（1）：56-58．

［6］常潤，胡浩，郭鑫，等．婦炎舒膠囊對大鼠慢性盆腔炎治療作用的研究［J］．中藥藥理與臨床，2012，28（4）：86-88．

［7］徐文崢，江偉華．紅藤湯中藥配方顆粒治療慢性盆腔炎的臨床觀察［J］．中國中藥雜志，2011，36（10）：1386-1387．

［8］李曉燕，朱曉芙，朱長玲，等．慢盆消炎方對慢性子宮內(nèi)膜炎模型大鼠IL-2、MMP-2及TIMP-2的影響［J］．浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，22（10）：762-764．

［9］ZHENG Y，JIN Y，ZHU HB，et al．The anti-inflammatory and anti-nociceptive activities of Patrinia villosa and its mechanism on the proinflammatory cytokines of rats with pelvic inflammation［J］．Afr J Tradit Complement Altern Med，2012，9（3）：295-302．

［10］仇萍，盛孝邦，邱賽紅．菝葜不同工藝提取物對慢性盆腔炎大鼠的治療作用［J］．中草藥，2010，41（12）：2046-2049．

［11］TORTORELLA C，PIAZZOLLA G，MATTEO M，et al．Interleukin-6，interleukin-1β，and tumor necrosis factorαin menstrual effluents as biomarkers of chronic endometritis［J］．Fertil Steril，2014，101（1）：242-247．