甲狀腺乳頭狀癌中MMP2、COX-2、VEGF和MVD的表達(dá)及臨床意義

賈宗良，朱宏升，柴明明，賈一凡

（1．西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一附屬醫(yī)院普外科，陜西西安 710061；2．陜西省城固縣醫(yī)院普外科，陜西漢中 723200；3．西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710061）

甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲狀腺惡性腫瘤中最常見(jiàn)的類型，約占成人惡性甲狀腺腫瘤的60%～80%以及兒童甲狀腺癌的100%。大多數(shù)臨床經(jīng)過(guò)良好，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移少并且死亡率低。但部分病例具有侵襲性，原發(fā)灶常侵犯甲狀腺被膜及周圍組織，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較早且范圍廣，臨床預(yù)后差。有報(bào)道，環(huán)氧合酶-2（cycloxygenase-2，COX-2）在人類多種惡性腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，如結(jié)直腸癌、胃癌及肝癌等，提示其可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。許多研究顯示COX-2的致癌機(jī)制不僅與促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化有關(guān)，而且與促進(jìn)腫瘤血管生成有關(guān)［1］。血管生成對(duì)甲狀腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，而甲狀腺癌細(xì)胞可分泌多種促血管生成因子［2］，誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前已知最強(qiáng)的一種促血管生長(zhǎng)因子，其與甲狀腺癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，但有關(guān)VEGF在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍不十分清楚?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）是腫瘤細(xì)胞形成過(guò)程中所需要的一類蛋白水解酶，是一組由結(jié)締組織細(xì)胞分泌的，參與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）降解的Zn2＋依賴性的蛋白酶家族。MMPs幾乎能降解除多糖以外幾乎全部的ECM成分。MMPs導(dǎo)致腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制目前還不清楚，但在其他腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)COX-2、MMP2和VEGF的表達(dá)與微血管密度（micro-vessel density，MVD）均密切相關(guān)，推測(cè)最終可能通過(guò)調(diào)控腫瘤新生血管生成，影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究通過(guò)檢測(cè)PTC中COX-2、VEGF、MMP2表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)，分析它們與PTC臨床病理特征之間的關(guān)系，明確與PTC的發(fā)生發(fā)展之間的聯(lián)系，對(duì)PTC惡性程度的判定及患者臨床病情的評(píng)估提供幫助。

1 材料與方法

1．1 材料 收集西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一附屬醫(yī)院2010～2012年經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診的PTC的石蠟標(biāo)本32例，平均年齡約50歲，其中18例男性，14例女性；腫瘤直徑＞1．0cm的17例，＜1．0cm的15例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的13例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的19例；根據(jù)TNM（UICC）分期標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期12例，Ⅳ期2例；甲狀腺被膜浸潤(rùn)的16例，未浸潤(rùn)的16例。對(duì)照組標(biāo)本來(lái)自手術(shù)時(shí)切取甲狀腺良性疾病病灶旁2cm以上正常組織，計(jì)18例，平均年齡約41歲，其中男性11例，女性7例。

1．2 主要試劑 鼠抗人VEGF多克隆抗體，購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)公司。鼠抗人COX-2單克隆抗體購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)公司。鼠抗人MMP2單克隆抗體、鼠抗人CD34單克隆抗體均購(gòu)自中杉（北京）生物科技公司，即用型SP系列檢測(cè)試劑盒亦為該公司產(chǎn)品，該試劑盒組成為：封閉用血清（山羊）工作液；生物素標(biāo)記羊抗鼠IgG；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素-卵白素工作液。

1．3 免疫組化染色及結(jié)果判定 采用鏈酶素-卵白素-生物素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物（S-P）法，將石蠟標(biāo)本切片進(jìn)行免疫組化染色。COX-2、MMP2、VEGF及MVD抗體稀釋比為1∶100。

COX-2、MMP2、VEGF的表達(dá)以腫瘤細(xì)胞和正常腺體細(xì)胞胞質(zhì)和（或）胞膜上染色強(qiáng)度計(jì)分和陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分的相加之和進(jìn)行判定。隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野（×200）進(jìn)行判斷：①無(wú)染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分，褐色為4分；②陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜5%為0分，5%～24%為1分，25%～49%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。

MVD計(jì)數(shù)：參照 MAEDA等［3］報(bào)道的方法，即在低倍鏡下，先全面觀察CD34染色陽(yáng)性的血管，選擇顏色較深的區(qū)域，然后轉(zhuǎn)到高倍鏡下（×200），取5個(gè)不同視野計(jì)數(shù)（皆取視野左上1／4區(qū)域），以其均數(shù)為MVD值。微血管判斷標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)蝹€(gè)棕黃色內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均計(jì)數(shù)為一個(gè)血管；肌層較厚或管腔內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)＞8個(gè)的血管不被計(jì)數(shù)。

1．4 蛋白表達(dá)間及與臨床病理資料的相關(guān)性分析分析COX-2、MMP2、VEGF及MVD的表達(dá)與患者的年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小的相關(guān)性，并分析COX-2、MMP2、VEGF的表達(dá)與 MVD計(jì)數(shù)的相關(guān)分析。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 在統(tǒng)計(jì)結(jié)果時(shí)，對(duì)高倍鏡下圖片的細(xì)胞陽(yáng)性率計(jì)分和染色深淺計(jì)分進(jìn)行加和，數(shù)據(jù)資料由SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)軟件和 GraphPad Prism 5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)和兩獨(dú)立樣本Mann-Whitney U檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析方法。取P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 PTC中COX-2的表達(dá) 鏡下觀察COX-2的陽(yáng)性染色顆粒主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中，顏色越深其表達(dá)越高。PTC中COX-2的表達(dá)計(jì)分為（使用中位數(shù)與四分位距，后同）：M（Q3-Q1）＝5（1），在正常甲狀腺組織中COX-2幾乎未見(jiàn)表達(dá)（圖1）。PTC中COX-2的表達(dá)與患者的性別、年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及被膜浸潤(rùn)等影響PTC進(jìn)展的因素有關(guān)（P＜0．05，表1）。為了進(jìn)一步研究 COX-2表達(dá)與PTC被膜浸潤(rùn)之間的關(guān)系，對(duì)PTC中COX-2的表達(dá)情況進(jìn)一步分析得出：在甲狀腺被膜浸潤(rùn)組中COX-2的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝6（2），而在甲狀腺被膜未浸潤(rùn)組中的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝5（1．75）；經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)分析后，表明PTC被膜浸潤(rùn)組和被膜未浸潤(rùn)組中COX-2的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．010），即表明在PTC中 COX-2的表達(dá)高低與PTC是否侵及被膜密切相關(guān)。

2．2 PTC中VEGF的表達(dá) VEGF陽(yáng)性染色顆粒在高倍鏡下主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞和甲狀腺濾泡細(xì)胞的胞質(zhì)中，鏡下顏色越深說(shuō)明其表達(dá)越高（圖2）。在PTC中 VEGF的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝5．5（2），而在正常甲狀腺組織中的表達(dá)為：M（Q3-Q1）＝5（1），二者之間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．006），表明 VEGF與PTC的發(fā)生有關(guān)系。進(jìn)一步將VEGF與影響甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)因素做分析得出：PTC中VEGF的表達(dá)與患者的性別、年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及被膜浸潤(rùn)有關(guān)（P＜0．05，表1）。

在甲狀腺被膜浸潤(rùn)組中VEGF的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝6．5（2），而在被膜無(wú)浸潤(rùn)組中表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝5（1．75）；經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)分析后表明VEGF的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．013）。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）及正常甲狀腺組織中COX-2的表達(dá)Fig．1 Expression of COX-2in PTC and normal thyroid tissues（SP，×200）

圖2 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）及正常甲狀腺組織中VEGF的表達(dá)Fig．2 Expression of VEGF in PTC and normal thyroid tissues（SP，×200）

表1 COX-2、VEGF、MMP2、MVD與PTC臨床病理特征的關(guān)系Tab．1 The relationship of COX-2，VEGF，MMP2and MVD expressions with the clinicopathological characteristics of PTC（n＝32）

2．3 PTC中 MMP2的表達(dá) 與COX-2和VEGF類似，MMP2主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞和正常濾泡細(xì)胞的胞質(zhì)中，少量位于胞核中（圖3）。PTC中MMP2的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝5．5（1），而在正常甲狀腺組織中的表達(dá)為：M（Q3-Q1）＝4．5（1），二者之間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．006），表明MMP2與PTC的發(fā)生有關(guān)系。將MMP2進(jìn)一步與影響甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)因素做分析得出：PTC中MMP2的表達(dá)與患者的年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及被膜浸潤(rùn)有關(guān)（P＜0．05，表1）。

在甲狀腺被膜浸潤(rùn)組中MMP2的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝6（1．75），而在甲狀腺被膜未浸潤(rùn)組中的表達(dá)計(jì)分為：M（Q3-Q1）＝5（1．75）；經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)分析后表明PTC被膜浸潤(rùn)組和被膜未浸潤(rùn)組中MMP2的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．000），即表明在PTC中MMP2的表達(dá)高低與PTC是否侵及被膜密切相關(guān)。

圖3 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）及正常甲狀腺組織中MMP2的表達(dá)Fig．3 Expression of MMP2in PTC and normal thyroid tissues（SP，×200）

2．4 PTC中MVD計(jì)數(shù) MVD是反映腫瘤生長(zhǎng)血管的重要指標(biāo)，任何被抗體染色的單個(gè)細(xì)胞或者細(xì)胞團(tuán)，不管是否有管腔形成，只要和周圍的血管、腫瘤細(xì)胞或者其他連接組織成分有一個(gè)比較清楚的分隔，都可認(rèn)為是一個(gè)可計(jì)數(shù)的微血管（圖4）。PTC中MVD的計(jì)數(shù)為：M（Q3-Q1）＝28（5．75），而在正常甲狀腺組織中的計(jì)數(shù)為：M（Q3-Q1）＝14（5．25），二者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．000），表明檢測(cè)甲狀腺中的MVD可能對(duì)PTC的早期發(fā)現(xiàn)有一定的參考價(jià)值。將MVD計(jì)數(shù)與影響甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)因素做分析得出：在PTC中MVD計(jì)數(shù)高低與患者的年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及被膜浸潤(rùn)有關(guān)（P＜0．05，表1）。

在甲狀腺被膜浸潤(rùn)組中MVD的計(jì)數(shù)為：M（Q3-Q1）＝30（7．75），而在甲狀腺被膜未浸潤(rùn)組中的計(jì)數(shù)為：M（Q3-Q1）＝26．5（4）；經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)分析后表明PTC被膜浸潤(rùn)組和被膜未浸潤(rùn)組中MVD的計(jì)數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05，P＝0．006），即表明在PTC中MVD的計(jì)數(shù)高低與PTC是否侵及被膜密切相關(guān)。

圖4 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）及正常甲狀腺組織中MVD計(jì)數(shù)Fig．4 Count of MVD in PTC and normal thyroid tissues（SP，×200）

2．5 PTC中COX-2、VEGF、MMP2和 MVD的相關(guān)分析 腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移離不開(kāi)血管支持，而MVD是反映腫瘤新生血管的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)它們之間的關(guān)聯(lián)分析顯示如圖5：從矩陣圖中可以看出PTC的MVD計(jì)數(shù)與COX-2、VEGF、MMP2的表達(dá)有相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r分別為0．504、0．577和0．536，且P值均小于0．01，說(shuō)明 MVD在PTC中與MMP2、VEGF、COX-2的表達(dá)具有顯著的相關(guān)性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

MMP2、VEGF和COX-2之間的表達(dá)也彼此具有相關(guān)性，其中 MMP2和 VEGF之間：r＝0．539（P＜0．05，P＝0．001）；MMP2和 COX-2之間：r＝0．555（P＜0．05，P＝0．001）；VEGF和COX-2之間：r＝0．582（P＜0．05，P＝0．000）。但圖5的散點(diǎn)圖顯示它們之間雖然具有相關(guān)性，但并不表現(xiàn)為明顯的線性相關(guān)，在一定程度上說(shuō)明他們之間相互關(guān)聯(lián)影響的復(fù)雜性。

圖5 PTC中COX-2、VEGF、MMP2和MVD之間的相關(guān)性Fig．5 The relationship between COX-2，VEGF，MMP2and MVD in PTC

3 討 論

PTC是人類最常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤之一，主要起源于甲狀腺上皮細(xì)胞，隨著飲食及環(huán)境的日益惡化，其發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)［4］。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多階段、多基因參與的復(fù)雜過(guò)程。

COX-2是多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵酶［5］，其在人類多種惡性腫瘤細(xì)胞中呈過(guò)表達(dá)，如卵巢癌、肝癌、胃癌、食道癌、肺癌、口腔癌、胰腺癌、乳腺癌等，并且表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤組織類型和分化程度相關(guān)［6］。目前，認(rèn)為COX-2可從促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤新生血管生成、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、機(jī)體免疫功能及增加腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移力等多個(gè)機(jī)制誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、凋亡抑制及促進(jìn)血管生成等，COX-2成為腫瘤防治的一個(gè)新靶點(diǎn)［7］。

MMPs是降解ECM和血管基底膜最重要的酶類，ECM又是腫瘤轉(zhuǎn)移的主要屏障［8］。NAKAMURA等［9］在研究MMPs與甲狀腺癌之間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，MMPs雖有7個(gè)成員，但只有MMP2與甲狀腺癌之間有密切聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)MMP-2能夠特異地降解ECM和基底膜的主要成分Ⅳ型膠原，不僅有促進(jìn)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的作用，而且與原發(fā)或轉(zhuǎn)移腫瘤的生長(zhǎng)和血管生成也密切相關(guān)［10］，是腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲過(guò)程中最重要、最直接的金屬蛋白酶，是腫瘤防治的另一個(gè)新靶點(diǎn)。KRYSAN等［11］通過(guò)對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的研究證實(shí)了COX-2與MMP2的表達(dá)具有相關(guān)性。國(guó)內(nèi)王喜梅等［12］研究67例PTC時(shí)，發(fā)現(xiàn)COX-2和MMP2在42例中共同表達(dá)，只有4例中二者皆表達(dá)陰性；還發(fā)現(xiàn)隨著COX-2表達(dá)的增高，MMP2表達(dá)相應(yīng)增高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示COX-2與MMP2在PTC中呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)，且與年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及被膜浸潤(rùn)等密切相關(guān)（P＜0．05），二者的表達(dá)呈現(xiàn)出正相關(guān)性（r＝0．555），這進(jìn)一步說(shuō)明了COX-2和MMP2與PTC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移離不開(kāi)腫瘤血管的營(yíng)養(yǎng)和支持。國(guó)外SASAKI等［13］在對(duì)22例腎臟細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)有18（84%）例高表達(dá)VEGF，而且其表達(dá)與一種叫做激酶結(jié)構(gòu)域（KDR）的蛋白呈現(xiàn)出關(guān)聯(lián)性，因此推斷VEGF與KDR結(jié)合可以增強(qiáng)腎臟腫瘤血管的形成。華特波等［14］對(duì)116例甲狀腺腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)COX-2、VEGF在甲狀腺惡性腫瘤組織中的蛋白表達(dá)均明顯高于甲狀腺良性病變，并且在甲狀腺癌中與年齡、包膜完整性、腫瘤大小、臨床分期顯著相關(guān)。本研究檢測(cè)正常甲狀腺組織和甲狀腺乳頭狀組織中VEGF的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的VEGF表達(dá)顯著高于正常甲狀腺組織（P＜0．05），并且表達(dá)的高低與腫瘤的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)密切相關(guān)，這進(jìn)一步驗(yàn)證了腫瘤浸潤(rùn)與VEGF表達(dá)之間的關(guān)系。腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移必須有腫瘤血管的支持，而MVD可以客觀評(píng)判腫瘤的新生血管［15］。國(guó)內(nèi)外已有很多文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)MVD與腫瘤的關(guān)系，且發(fā)現(xiàn)MVD與腫瘤的侵襲力大小、淋巴轉(zhuǎn)移預(yù)后均相關(guān)。國(guó)內(nèi)石磊等［16］對(duì)50例胃癌的研究中發(fā)現(xiàn)在正常胃黏膜組織、癌旁組織、胃癌組織中，VEGF的表達(dá)和MVD呈逐漸上升趨勢(shì)（P＜0．05），兩者表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0．05）。COX-2與 MVD的表達(dá)呈正相關(guān)，新生血管生成與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此，MVD可作為間接評(píng)估腫瘤預(yù)后和侵襲力大小的指標(biāo)。吳偉群等［17］在甲狀腺癌的研究中，發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)均明顯高于正常甲狀腺和甲狀腺腺瘤組織（P＜0．05）。在甲狀腺癌組織中有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的VEGF表達(dá)及MVD計(jì)數(shù)明顯高于無(wú)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0．05），且甲狀腺癌組織中VEGF表達(dá)及MVD值之間呈顯著正相關(guān)（r＝0．564，P＜0．05）。本實(shí)驗(yàn)PTC中VEGF呈現(xiàn)出高表達(dá)，MVD呈現(xiàn)高計(jì)數(shù)（P＜0．05），且二者與患者年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及被膜浸潤(rùn)等密切相關(guān)（P＜0．05），二者之間的表達(dá)也呈現(xiàn)出正相關(guān)性（r＝0．577），這與之前的研究結(jié)果一致。

本實(shí)驗(yàn)PTC中COX-2、MMP2、VEGF的表達(dá)和MVD呈現(xiàn)正相關(guān)性，推測(cè)其調(diào)控腫瘤新生血管影響著PTC發(fā)生、發(fā)展。對(duì)相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)PTC的惡性程度評(píng)估、預(yù)后判定及手術(shù)方式的選擇具有一定的參考價(jià)值。

［1］姬琛華，劉麗娜，呂申，等．胃癌Survivin、COX-2蛋白的表達(dá)及其相關(guān)性分析［J］．大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30（1）：10-13．

［2］王化修，李景和，肖小芹．甲狀腺癌組織 MVD和β-連環(huán)素蛋白表達(dá)及其相關(guān)性研究［J］．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，8（7）：1276-1279．

［3］MAEDA K，CHUNG YS，TAKATSUKA S，et al．Tumor angiogenesis as a predictor of recurrence in gastric carcinoma［J］．J Clin Oncol，1995，13（2）：477-481．

［4］李曉靜．甲狀腺癌臨床及病理學(xué)特點(diǎn)的回顧性分析［D］．山東大學(xué)，2012．

［5］GREENHOUGH A，SMARTT HJ，MOORE AE，et al．The COX-2／PGE2 pathway：key roles in the hallmarks of cancer and adaptation to the tumour microenvironment［J］．Carcinogenesis，2009，30（3）：377-386．

［6］王菊勇，郭凈，鄭展．iNOS／COX-2與惡性腫瘤［J］．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20（1）：183-186．

［7］黃曉靜，姚和權(quán)，吳曉明，等．環(huán)氧合酶-2抑制劑類抗腫瘤藥物研究進(jìn)展［J］．藥學(xué)與臨床研究，2013，21（3）：251-256．

［8］王振，李新華，王新軍，等．乳癌組織中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表達(dá)［J］．鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2012，47（5）：704-707．

［9］NAKAMURA M，ONODA N，NODA S，et al．E-cadherin expression and cell proliferation in the primary tumor and metastatic lymph nodes of papillary thyroid microcarcinoma［J］．Mol Clin Oncol，2014，2（2）：226-232．

［10］李蕊．VEGF對(duì)人肝癌細(xì)胞體外形成血管生成擬態(tài)能力的影響［D］．天津醫(yī)科大學(xué)，2012．

［11］KRYSAN K，DALWADI H，SHARMA S，et al．Cyclooxygenase 2-dependent expression of survivin is critical for apoptosis resistance in non-small cell lung cancer［J］．Cancer Res，2004，64（18）：6359-6362．

［12］王喜梅，孫雷，劉逢吉，等．環(huán)氧化酶和基質(zhì)金屬蛋白酶在甲狀腺乳頭狀癌組織中的增強(qiáng)表達(dá)及意義［J］．腫瘤防治雜志，2004，（6）：593-596．

［13］SASAKI R．Microvessel count and vascular endothelial growth factor in renal cell carcinoma［J］．Nihon Hinyokika Gakkai Zasshi，1996，87（8）：1032-1040．

［14］華特波，孟憲瑛，張強(qiáng)，等．COX-2、MMP-9、VEGF在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)［J］．中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（9）：1520-1522．

［15］盧鳳迎，廖新紅，李智賢，等．微血管密度在經(jīng)直腸超聲血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)鑒別診斷前列腺癌和慢性前列腺炎中的應(yīng)用及其評(píng)價(jià)［J］．吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014，40（5）：1104-1108．

［16］石磊，賴銘裕，梁志海，等．胃癌組織中COX-2、VEGF和 MVD的表達(dá)及其臨床意義［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（8）：1004-1006．

［17］吳偉群，何小杰，李延輝，等．VEGF在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及與腫瘤血管生成的關(guān)系［J］．中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2013，3（12）：23-25．