參加全國雞新城疫抗體水平測定競賽的體會

王麗娟卜春華遼寧職業(yè)學(xué)院，遼寧鐵嶺112099

參加全國雞新城疫抗體水平測定競賽的體會

王麗娟卜春華
遼寧職業(yè)學(xué)院，遼寧鐵嶺112099

摘要自2011年開始，在江蘇舉辦了3年全國雞新城疫抗體水平測定競賽項(xiàng)目，遼寧職業(yè)學(xué)院共參加2年該比賽項(xiàng)目，取得了優(yōu)異的成績。筆者作為該項(xiàng)目的指導(dǎo)教師，現(xiàn)將參賽的具體體會總結(jié)如下，供參賽選手參考與借鑒。

關(guān)鍵詞雞新城疫；抗體水平；測定；競賽

王麗娟，女，1967年生，副教授。

1　賽前熟悉考場，做好準(zhǔn)備工作

賽前一定認(rèn)真熟悉考場，對自己比賽所處的環(huán)境條件，如承辦院校所提供比賽的器材、放置位置、甚至廁所的方位等，都要心中有數(shù)，把一個陌生的新環(huán)境定位在自己過去熟悉的訓(xùn)練環(huán)境里，讓自己心情輕松地去迎接比賽。技能操作考試的時間比較長，體能消耗相當(dāng)大，考前應(yīng)休息好，保證考試時精力旺盛、體力充沛。這樣才能保證選手在比賽中按時完成考試項(xiàng)目，正常發(fā)揮水平，取得好的成績。

2　檢查考場器材，制定操作方案

進(jìn)入考場后，首先應(yīng)對儀器、材料進(jìn)行檢查，若有問題應(yīng)及時與監(jiān)考老師反映。然后根據(jù)現(xiàn)場提供的試驗(yàn)材料，確定操作方案。

3　選擇試驗(yàn)器材，擺放整齊合理

比賽開始，兩個人應(yīng)分工協(xié)作、密切配合，熟練迅速、有條不紊地將選擇的器材和物品在操作臺上擺放整齊。擺放的原則是橫豎成排，方便操作，先用放在前排，后用放在后排，低的在前排，高的在后排，污染區(qū)與清潔區(qū)分開，擺放過程中一定注意無菌操作。注意各個材料之間留有距離，方便取送。

4　儀器使用規(guī)范，正確熟練

4.1托盤天平的使用

天平使用前，先檢查游碼是否移在標(biāo)尺左端的零刻度處，然后把小燒杯置于托盤中心位置，才開始調(diào)節(jié)平衡螺母，使天平平衡。若將左右平衡螺母移至盡頭，天平仍不能平衡，應(yīng)查找原因，絕不能用移動游碼來達(dá)到平衡。天平使用完畢，將兩托盤放在一邊支架上，放上保護(hù)膠墊，不得讓其自由擺動，使其處于休止?fàn)顟B(tài)。

4.2微量移液器的使用

首先檢查移液器量程范圍，確認(rèn)所要求的移液量在量程范圍內(nèi)。轉(zhuǎn)動移液器頂部的操作按鈕至所選定移液量，保證移液量調(diào)整到位，絕對不能超出移液器標(biāo)定的容量范圍，旋動調(diào)節(jié)鍵時，一定逐檔加或減，動作要輕、慢，不能出太大聲音。在裝配吸頭時，要將移液器垂直插入吸頭，左右稍微轉(zhuǎn)動上緊即可，切勿用移液器上下反復(fù)撞擊吸頭來上緊。吸液時應(yīng)垂直握住移液器，先預(yù)潤濕吸頭，并排空然后進(jìn)行正式移液；用大拇指將按鈕壓至第一停點(diǎn)位置，并將吸頭嘴垂直浸入液面下3 mm左右深度并慢慢松開按鈕，待管嘴吸入溶液后，把管嘴撤出液面并斜貼在試劑瓶壁上淌走多余的液體。放液時將移液器傾斜一定角度，輕輕壓下操作按鈕至第一停點(diǎn)位置，打出大部分液體，稍微停頓1 s，待剩余液體聚集后，繼續(xù)將操作按鈕向下壓至第二停點(diǎn)，將剩余的液體全部排出。松開按鈕使之返回按鈕的起點(diǎn)位置。棄去管嘴，將移液器調(diào)至最大量程后放回移液器支架。

4.3普通離心機(jī)的使用

接通電源，先檢查離心機(jī)內(nèi)有無異物、運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常等。先將盛有血液和水的兩個離心管及套管置于天平上配平后，再對稱放入離心機(jī)中，注意離心管中的液體不要裝得太滿。離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)時，必須有1名選手看管，若出現(xiàn)雜音或離心機(jī)震動等異常，要立即停止使用，進(jìn)行檢查。使用完畢，各項(xiàng)數(shù)據(jù)歸零，及時拔下電源插頭，整理好電線。

4.4微量振動器的使用

先檢查振幅調(diào)節(jié)旋鈕是否調(diào)至最低，再接通電源，打開電源開關(guān)，順時針方向緩慢旋轉(zhuǎn)振幅調(diào)節(jié)旋鈕檢查其工作狀況。工作正常后逆時針方向?qū)⒄穹{(diào)至最低，關(guān)閉電源開關(guān)。振蕩時，先將微量反應(yīng)板置于振蕩器中央，按上述方法旋轉(zhuǎn)振幅調(diào)節(jié)旋鈕至適宜的振幅，振蕩所需時間后，將振幅調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至最低，取下振蕩物，關(guān)閉電源開關(guān)。不用時及時拔下電源插頭，電線整理好，整齊放在機(jī)器后面。

5　采血方法規(guī)范、熟練，采血量適宜

采血者一定做到一針見血而不淤血，采血過程中兩位參賽者的默契配合很重要。助手將雞側(cè)臥保定，并便于采血者操作；采血者展開采血側(cè)翅膀，一只手固定采血部位，另一只手拿酒精棉球消毒采血部位后，用已吸入3.8%的枸櫞酸鈉的注射器向翅靜脈叢刺入（此處比較容易采血成功且不容易淤血），吸取血液（血∶抗凝劑=4∶1）。采血完畢后，采血者一只手用干酒精棉球按壓采血部位止血，另一只手立即將抗凝劑和血液輕輕上下顛倒搖勻，防止血液凝固。采血的量要根據(jù)檢疫血清的數(shù)量而定。過多不宜洗滌，過少配制紅細(xì)胞的量不夠，影響試驗(yàn)順利進(jìn)行。采血完畢，注意手的消毒和場地整潔。

6　1%紅細(xì)胞懸液的配制

采血完畢，混勻后的血液需要取下針頭（禽用采血器則需要把前端旋下），再把抗凝血沿著傾斜的離心管管壁緩慢注入到事先已放好生理鹽水的離心管中，以防紅細(xì)胞溶血。然后扭緊瓶蓋，輕晃離心管，使血液與生理鹽水充分混勻，配平后離心。離心完畢，用移液器以畫圈的方式吸取白細(xì)胞和血小板層，再吸取剩余的液體。以此方式洗滌，一般3次即可洗凈。最后一次離心完畢，按照檢測所需1%紅細(xì)胞懸液的量，用移液器垂直從離心管的底部吸取壓積紅細(xì)胞放入到事先已加好生理鹽水的50 mL燒杯中，再反復(fù)吸取生理鹽水將吸嘴里的紅細(xì)胞沖洗下來，保證配制紅細(xì)胞濃度的準(zhǔn)確性。

7　4IU病毒的配制

4IU病毒的配制應(yīng)根據(jù)所檢測血清的份數(shù)計(jì)算出生理鹽水和抗原的用量，先用2～10mL移液器吸取生理鹽水放入50 mL小燒杯里，然后用5～50μL移液器吸取充分混勻的抗原。注意要反復(fù)用生理鹽水將移液器吸嘴里的抗原洗下來，才能保證配制濃度的準(zhǔn)確性。

8　血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)

加樣時，應(yīng)該將所加液體在V型板的底部，避免加到孔壁的上部，切勿濺出。倍比稀釋抗原或血清時，應(yīng)使用第一檔混勻，全部排空后再重新吸取液體放到下一孔。注意每孔混勻的次數(shù)要一致，避免產(chǎn)生氣泡而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。補(bǔ)加生理鹽水或加4 IU病毒液和紅細(xì)胞懸液時，應(yīng)由后往前懸滴加入，避免移液器吸頭與孔內(nèi)的液體接觸，造成各孔間液體相互污染，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差。每滴加一種材料要及時更換吸頭。注意抗原懸液、血清一定要充分混勻后加樣，4 IU病毒和紅細(xì)胞懸液要邊搖勻邊加入，這樣才能保證每孔所加的樣品量和濃度一致。振蕩時，振幅不能過大，時間不能過長，以免把紅細(xì)胞膜振破，造成溶血。感作時間和結(jié)果判定要嚴(yán)格按照國標(biāo)規(guī)定的要求，在生理鹽水對照孔紅細(xì)胞呈明顯鈕扣狀沉淀到孔底時判定結(jié)果，并且陽性對照和陰性對照成立。判定過早，血凝價容易判高，血凝抑制價容易判低；判定過晚，紅細(xì)胞會從病毒表面脫落而造成錯判。

9　填寫檢測結(jié)果報告，整理實(shí)驗(yàn)臺

填寫檢測報告，要求選手及時記錄試驗(yàn)結(jié)果，書寫規(guī)范，字體美觀。結(jié)束時整理實(shí)驗(yàn)臺，物品擺放整齊有序，把要清洗消毒的物品放到指定位置，脫下工作服疊好，洗手消毒后方可離開。

收稿日期：2015- 04- 28