子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與患者疼痛的關(guān)系

謝招娣

(海南省?？谑械谒娜嗣襻t(yī)院，海南 ?？?571100)

子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與患者疼痛的關(guān)系

謝招娣

(海南省海口市第四人民醫(yī)院，海南 ?？?571100)

目的探討子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與患者疼痛的關(guān)系。方法選取經(jīng)手術(shù)子宮切除患者46例，經(jīng)視覺模擬評(píng)分(VAS)將患者分為EMT無(wú)痛組(23例)和EMT 疼痛組(23例)。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)EMT異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維在子宮內(nèi)膜組織中的分布，分別采用兔抗人抗蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)抗體與神經(jīng)突觸生長(zhǎng)標(biāo)記物生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(GAP-43)抗體檢測(cè)有髓和無(wú)髓神經(jīng)纖維的分布。結(jié)果通過(guò)PGP9.5染色標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)EMT疼痛組患者異位內(nèi)膜功能層、子宮肌層以及異位病灶(卵巢、腹膜、深部浸潤(rùn)部位等)均有神經(jīng)纖維的異常增多，而在EMT無(wú)痛組中僅在子宮內(nèi)膜基底層有神經(jīng)纖維分布。通過(guò)GAP-43標(biāo)記物，發(fā)現(xiàn)感覺神經(jīng)纖維未出現(xiàn)在內(nèi)異灶內(nèi)形成成熟血管的基質(zhì)內(nèi)，僅和未成熟的血管相伴出現(xiàn)。結(jié)論EMT疼痛組患者有異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維的異常分布情況。EMT中神經(jīng)纖維的表達(dá)與疼痛嚴(yán)重程度有關(guān)，EMT患者疼痛的原因之一可能是神經(jīng)纖維的異常高表達(dá)。

子宮內(nèi)膜異位癥；神經(jīng)纖維；免疫組織化學(xué)；疼痛

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMT)是指在女性體內(nèi)除子宮腔被覆黏膜以外的其他部位，有活性的子宮內(nèi)膜的組織(包括腺體和間質(zhì))出現(xiàn)并種植生長(zhǎng)，簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥，是臨床上育齡期婦女常見的婦科病[1]。疼痛為該病的主要癥狀，有多種表現(xiàn)形式的疼痛，如痛經(jīng)、性交痛、慢性盆腔痛 (chronic pelvic pain，CCP)和經(jīng)期肛門墜痛等，其中以痛經(jīng)最為明顯[2-3]。EMT患者表現(xiàn)出來(lái)嚴(yán)重程度不一的疼痛癥狀，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)或反復(fù)發(fā)作，對(duì)婦女的心理和生理健康構(gòu)成了嚴(yán)重影響，同時(shí)也給患者帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)壓力[2]。對(duì)于其發(fā)病機(jī)制目前尚未有明確解釋，有研究表明經(jīng)免疫組織化學(xué)檢測(cè)有較多神經(jīng)纖維出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜功能層的EMT患者大多臨床上表現(xiàn)主要為疼痛，提示EMT患者疼痛的一個(gè)可能原因是神經(jīng)纖維異常分布[4-5]?，F(xiàn)通過(guò)檢測(cè)EMT患者異位內(nèi)膜中的神經(jīng)纖維蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的分布情況，探討其與疼痛的關(guān)系。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2011年2月—2013年8月我院收治的EMT患者40例(EMT組)，經(jīng)視覺模擬評(píng)分(VAS)分為EMT無(wú)痛組23例(VAS評(píng)分為0)和EMT疼痛組23例(VAS評(píng)分>0)。EMT疼痛組中痛經(jīng)18例、慢性盆腔痛3例、性交痛1例和經(jīng)期肛門墜痛1例；其重度疼痛(VAS≥7分)14例，中度疼痛(4≤VAS<7分)7例，輕度疼痛(VAS<4分)2例。同時(shí)術(shù)前3 個(gè)月內(nèi)所有納入統(tǒng)計(jì)資料的患者均未服用過(guò)激素類藥物，排除盆腔炎、子宮腺肌病、子宮肌瘤及其他引起盆腔疼痛疾病的患者，2組年齡、孕產(chǎn)次、月經(jīng)周期和受教育程度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

1.2方法 縱行剖開切除的子宮，得到子宮全層。根據(jù)文獻(xiàn)子宮內(nèi)膜基底層定義為距離子宮內(nèi)膜-肌層交界≤300 μm，子宮內(nèi)膜基底層與子宮內(nèi)膜上皮層的部分定義為功能層[6]。采用石蠟包埋、10%福爾馬林固定子宮內(nèi)膜標(biāo)本，標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟進(jìn)行免疫組化染色，一抗為兔抗人NGF多克隆抗體(上海工碩生物技術(shù)有限公司)，兔抗人PGP9.5多克隆抗體和兔抗人SP多克隆抗體(購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 在400倍高倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)具有代表性的視野，圖像分析利用Image-pro Plus圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行，取各自測(cè)量的灰度平均值作為該切片的灰度，反映陽(yáng)性程度。NGF細(xì)胞以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。神經(jīng)纖維密度判定：在低倍鏡下選取神經(jīng)纖維高密度區(qū)，再轉(zhuǎn)換成高倍鏡，每高倍視野下有一面積為1 mm×1 mm的正方形網(wǎng)格，共計(jì)數(shù)5個(gè)網(wǎng)格中神經(jīng)纖維的數(shù)量，取平均值作為該石蠟切片的神經(jīng)纖維密度。

2 結(jié) 果

2.1異位子宮內(nèi)膜基底層PGP9.5及GAP-43標(biāo)記神經(jīng)纖維數(shù)目比較 EMT疼痛組PGP 9.5標(biāo)記神經(jīng)纖維在異位子宮內(nèi)膜功能層和基底層均有表達(dá)，EMT無(wú)痛組PGP 9.5標(biāo)記神經(jīng)纖維僅在異位子宮內(nèi)膜基底層表達(dá)，GAP-43標(biāo)記感覺神經(jīng)纖維在EMT疼痛組和EMT無(wú)痛組患者異位子宮內(nèi)膜功能層均無(wú)表達(dá)，僅在子宮內(nèi)膜功能層淺層與子宮內(nèi)膜腺體和血管相伴出現(xiàn)。經(jīng)t檢驗(yàn)，2組異位子宮內(nèi)膜功能層PGP 9.5標(biāo)記神經(jīng)纖維數(shù)目比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 異位子宮內(nèi)膜不同部位EMT疼痛組和EMT無(wú)痛組神經(jīng)纖維數(shù)目

注：①與EMT疼痛組比較，P<0.001 3。

2.2NGF、GAP-43在內(nèi)異癥疼痛組內(nèi)膜的表達(dá)與其疼痛程度的關(guān)系 NGF、GAP-43在內(nèi)異癥重度疼痛組陽(yáng)性灰度值最高，而在輕度疼痛組組織陽(yáng)性灰度值最低，3組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2及圖1～2。

表2 NGF、GAP-43在內(nèi)異癥疼痛組內(nèi)的表達(dá)

圖1 NGF在內(nèi)異癥不同疼痛組內(nèi)表達(dá)直方圖

圖2 GAP-43在內(nèi)異癥不同疼痛組內(nèi)表達(dá)直方圖

3 討 論

EMT是臨床上生育年齡婦女常見的多發(fā)婦科疾病，為探討該病的發(fā)病機(jī)制，多年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的研究工作，但目前為止尚未明確其發(fā)病病因[7]。Berkley等[8]在EMT小白鼠中觀察到了神經(jīng)纖維的形成。Tokushige等[9]研究發(fā)現(xiàn)在育齡女性EMT患者的在位和異位子宮內(nèi)膜存在與新生血管相伴的神經(jīng)纖維分布，并且認(rèn)為EMT 的發(fā)病可能與這種神經(jīng)纖維參與有關(guān)。本次研究亦發(fā)現(xiàn)EMT患者組織中有神經(jīng)纖維分布，同時(shí)對(duì)所得數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，EMT的疼痛與子宮內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布有一定的關(guān)聯(lián)性。PGP9.5作為神經(jīng)軸突標(biāo)記物，是一種具有神經(jīng)纖維中高度特異性的物質(zhì)，任何有髓或無(wú)髓的神經(jīng)纖維都可以與抗PGP9.5抗體結(jié)合。SP是感覺神經(jīng)的肽能物質(zhì)，它同時(shí)還調(diào)節(jié)者神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)和免疫，可以傳遞痛覺和達(dá)到鎮(zhèn)痛[10]。有文獻(xiàn)報(bào)道指出女性子宮內(nèi)膜組織中的神經(jīng)纖維可能從子宮內(nèi)膜功能層起源，高表達(dá)的相關(guān)物質(zhì)導(dǎo)致了部分的神經(jīng)纖維浸潤(rùn)生長(zhǎng)，從而引發(fā)異位癥[11]。最近研究發(fā)現(xiàn)，EMT患者的子宮內(nèi)膜出現(xiàn)和健康女性子宮內(nèi)膜的神經(jīng)纖維分布存在差異性，并且認(rèn)為差異與EMT的疼痛發(fā)病有直接或間接的關(guān)系[12-13]。

本研究以兔PGP9.5抗體與GAP-43抗體檢測(cè)神經(jīng)纖維的分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EMT疼痛組患者子宮內(nèi)膜中有PGP 9.5、GAP-43的表達(dá)，而EMT無(wú)痛組在子宮內(nèi)膜基底層表達(dá)，并且EMT疼痛組中PGP 9.5的密度高于EMT無(wú)痛組(P<0.05)，說(shuō)明EMT疼痛組患者出現(xiàn)異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維的異常分布情況。EMT中神經(jīng)纖維的表達(dá)與疼痛的嚴(yán)重程度有關(guān)。本研究結(jié)果有力地說(shuō)明了神經(jīng)纖維的分布導(dǎo)致患者疼痛，但是本研究還存在一定的不足，沒有說(shuō)明神經(jīng)纖維是如何導(dǎo)致患者疼痛的，另外VAS評(píng)分也可能造成主觀誤差。這些問(wèn)題需要今后更細(xì)致的、更大樣本量的研究和探討。

[1] 賴曉嵐,華興,陳燕輝. 子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜中神經(jīng)纖維的表達(dá)[J]. 山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2011,49(1):107-109

[2] 史精華,冷金華,郎景和. 子宮腺肌病神經(jīng)纖維的分布及其臨床意義[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2011,20(5):385-391

[3] 高慧. 縮宮素受體、神經(jīng)生長(zhǎng)因子在子宮內(nèi)膜異位癥的表達(dá)及與疼痛的關(guān)系[J]. 中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志,2011,12(5):376-378

[4] 劉芳. 神經(jīng)及其他因子在子宮內(nèi)膜異位性疾病疼痛中作用的研究進(jìn)展[J]. 復(fù)旦學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2014,41(2):274-277

[5] Arnold J,Barcena de Arellano ML,Ruster C,et al. Imbalance between sympathetic and sensory innervation in peritoneal endometriosis[J]. Brain Behav Immun,2012,26(1):132-141

[6] 劉莉娜,姜盟,王廣蘭,等. 子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與疼痛關(guān)系的研究[J]. 實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2012,28(8):654-656

[7] 閆瑞玲,新羅. 子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與疼痛關(guān)系的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)工程,2013,21(6):18-19；21

[8] Berkley KJ,Dmitrieva N,Curtis KS,et al. Innervation of ectopic endometrium in a rat model of endometriosis[J]. PNAS,2004,101(30):11094-11098

[9] Tokushige N,Markham R,Russell P,et al. High density of small nerve fibers in the functional layer of the endometrium in women with endometriosis[J]. Hum Reprod,2006,21(3):782-787

[10] 郎景和，冷金花，周應(yīng)芳，等. 子宮內(nèi)膜異位癥[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2006,15(3):161-172

[11] Maytham GD,Dowson HM,Levy B,et al. Laparoscopic excision of rectovaginal endometriosis:report of a prospective study and review of the literature[J]. Colorectal Dis,2010,12(11):1105-1112

[12] Nabll H,Tuller E，Sharpe-Timms KL. Haptoglobin expression endometrioid adenocarcinoma of the uterus[J]. Reprod Sci,2010,17(1):47-55

[13] 廉玉玲,王莉. 子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性疼痛的發(fā)病機(jī)制[J]. 中國(guó)婦幼保健,2012,27(26):4159-4163

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.32.031

R711.71

B

1008-8849(2015)32-3616-02

2014-11-20