胰腺癌組織中Survivin和Caspase-3蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征及生存期的關(guān)系

陳愛華,于皆平

(1.華潤武鋼醫(yī)院,湖北 武漢 430080；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院/湖北省人民醫(yī)院，湖北 武漢 430060)

胰腺癌組織中Survivin和Caspase-3蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征及生存期的關(guān)系

陳愛華1,于皆平2

(1.華潤武鋼醫(yī)院,湖北 武漢 430080；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院/湖北省人民醫(yī)院，湖北 武漢 430060)

目的 探討胰腺癌組織中生存素(Survivin)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征和生存期的關(guān)系。方法 收集70例胰腺癌組織與30例急性胰腺炎胰腺組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化SP染色，檢測Survivin和Caspase-3蛋白表達(dá)，并且結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析。結(jié)果 胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3蛋白陽性表達(dá)率分別為84%和86%，急性胰腺炎組織中Survivin、Caspase-3蛋白陽性表達(dá)率分別為33%和33%，胰腺癌組織Survivin、Caspase-3蛋白陽性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度明顯高于急性胰腺炎組織(P均<0.05)；胰腺癌患者性別、年齡、腫瘤部位、TNM分期、腫瘤大小、組織學(xué)分化程度、血管是否被侵犯與胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3的陽性表達(dá)均無顯著相關(guān)(P均>0.05)，有淋巴轉(zhuǎn)移者Survivin陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，Caspase-3陽性表達(dá)率與患者有無淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)；Survivin、Caspase 3不同表達(dá)強(qiáng)度時(shí)患者生存時(shí)間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；胰腺癌組織中有29例Survivin、Caspase-3共同陽性表達(dá)，單獨(dú)Survivin陽性表達(dá)者中有80%是Caspase-3陰性表達(dá)，Spearman相關(guān)分析顯示Survivin與Caspase-3蛋白的陽性表達(dá)之間具有負(fù)相關(guān)性(P均<0.05)。結(jié)論 Survivin和Caspase-3蛋白在胰腺癌組織中均表達(dá)異常，Caspase-3蛋白表達(dá)陰性患者相對Survivin陽性表達(dá)升高，具有負(fù)相關(guān)性；Survivin與患者淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，提示Survivin蛋白可能是通過對Caspase-3蛋白的抑制而影響了胰腺癌組織細(xì)胞的凋亡，并且可能參與了胰腺癌的轉(zhuǎn)移過程，Survivin、Caspase-3蛋白表達(dá)水平的監(jiān)測可做為患者預(yù)后的評價(jià)指標(biāo)。

胰腺癌；Survivin蛋白；Caspase-3蛋白；病理特征

胰腺癌是來源于胰腺導(dǎo)管上皮的惡性腫瘤，為消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，其發(fā)生及發(fā)展可能與基因的異常表達(dá)或突變有關(guān)[1]。生存素(Survivin)是凋亡抑制蛋白(IAPa)家族成員，是作用最強(qiáng)的組織細(xì)胞凋亡抑制蛋白之一，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和病情預(yù)測中均有重要意義[2]。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)是組織細(xì)胞在凋亡過程中期關(guān)鍵環(huán)節(jié)的蛋白，在細(xì)胞凋亡過程中需要與其他蛋白一起協(xié)調(diào)作用調(diào)控細(xì)胞的凋亡[3]。Caspase-3是Caspase家族中的一員，與胰腺癌關(guān)系密切[4]。本研究對胰腺癌組織中的Survivin和Caspase-3蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測，并分析了患者臨床病理特征及預(yù)后，旨在探討胰腺癌組織中Survivin和Caspase-3蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征和生存期的關(guān)系。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2009年1月—2010年12月在華潤武鋼醫(yī)院和湖北省人民醫(yī)院手術(shù)治療的胰腺癌患者標(biāo)本70例，均經(jīng)病理證實(shí)為胰腺癌，均行手術(shù)治療?；颊哔Y料完整，有完整隨訪記錄。其中男37例，女33例；年齡36～80(64.21±10.04)歲；TNM分期Ⅰ期17例,Ⅱ期33例,Ⅲ期18例，Ⅳ期12例；組織病理分級高分化15例,中分化33例,低分化22例。收集同期急性胰腺炎患者胰腺組織標(biāo)本30例，均經(jīng)病理證實(shí)為正常胰腺組織，其中男16例，女14例；年齡24～67(60.45±8.50)歲。

1.2 試劑 濃縮型二甲基聯(lián)苯胺、SP染色試劑盒、Survivin兔抗人多克隆抗體和Caspase-3兔抗人多克隆抗體均為北京中杉金橋生物技術(shù)公司生產(chǎn)。

1.3 免疫組化檢測方法 術(shù)中取得的標(biāo)本均用10%甲醛液進(jìn)行固定，以石蠟包埋處理，以4 μm厚度進(jìn)行連續(xù)切片，取得切片標(biāo)本5張，HE染色進(jìn)行病理診斷及組織學(xué)分級。免疫組化SP法檢測時(shí)Survivin以微波抗原進(jìn)行修復(fù)，Caspase-3采用pH值為6.0、濃度為0.01 mol/L的枸櫞酸緩沖液在高溫下抗原修復(fù)，PS檢測具體方法根據(jù)說明書操作及相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行[5-6]，以已知的Survivin、Caspase-3陽性表達(dá)的胰腺癌組織標(biāo)本作為陽性對照，以PBS液作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 參照文獻(xiàn)[7]方法，在細(xì)胞質(zhì)中觀察到棕褐色深染區(qū)域或顆粒區(qū)域?yàn)镾urvivin表達(dá)陽性，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有淡黃色或棕黃色著色為Caspase-3表達(dá)陽性。每個(gè)切片均取10個(gè)視野在400倍光學(xué)顯微鏡下觀察，觀察陽性細(xì)胞數(shù)量，陽性細(xì)胞數(shù)占到視野內(nèi)細(xì)胞的百分比小于5%為陰性(-)，5%～25%為弱陽性(+)，26%～50%為中等強(qiáng)度陽性()，50%以上為強(qiáng)陽性()。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。計(jì)數(shù)資料采用率表示，進(jìn)行卡方檢驗(yàn)；等級資料采用秩和檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin、Caspase-3在胰腺癌及急性胰腺炎組織中的表達(dá) 胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3蛋白陽性表達(dá)分別為59例、60例，陽性表達(dá)率分別為84%和86%。Survivin蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度分別為(+)27例、()25例、()7例，Caspase-3蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度分別為(+)16例、()20例、()24例；急性胰腺炎組織中Survivin、Caspase-3蛋白陽性表達(dá)分別為10例、10例，陽性表達(dá)率分別為33%和33%，Survivin蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度分別為(+)7例、()2例、()1例，Caspase-3蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度為(+)10例；胰腺癌組織Survivin、Caspase-3蛋白陽性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度明顯高于急性胰腺炎組織(陽性表達(dá)率：2=25.49，27.44；陽性表達(dá)強(qiáng)度：U=4.35,4.86；P均<0.05)。

2.2 胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 胰腺癌患者性別、年齡、腫瘤部位、TNM分期、腫瘤大小、組織學(xué)分化程度與胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3的陽性表達(dá)均無顯著相關(guān)(P均>0.05)，有淋巴轉(zhuǎn)移者Survivin陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，Caspase-3陽性表達(dá)率與患者有無淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。見表1。

2.3 Survivin和Caspase-3表達(dá)與胰腺癌術(shù)后總體生存率的關(guān)系 截止2014年4月30日，通過門診及電話隨訪，70例患者有3例存活，43例死亡，24例失訪。Survivin表達(dá)(-)和(+)的患者死亡15例，存活3例，失訪20例，生存時(shí)間(15.83±3.20)個(gè)月；表達(dá)()和()的患者死亡28例，失訪4例，生存時(shí)間(12.88±1.13)個(gè)月。Caspase-3表達(dá)(-)和(+)的患者死亡17例，失訪9例，生存時(shí)間為(8.47±2.18)個(gè)月；表達(dá)()和()的患者死亡26例，存活3例，失訪15例，生存時(shí)間為(18.22±3.16)個(gè)月。Survivin、Caspase-3不同表達(dá)強(qiáng)度時(shí)患者生存時(shí)間比較差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.49，11.23，P均<0.05)。

2.4 胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3蛋白表達(dá)相關(guān)性 胰腺癌組織中有49例患者有Survivin、Caspase-3共同陽性表達(dá)，10例單獨(dú)為Survivin陽性表達(dá)，11例單獨(dú)為Caspase-3陽性表達(dá)。10例Caspase-3陰性表達(dá)患者中有8例為單獨(dú)Survivin陽性表達(dá)，表達(dá)率為80%。 經(jīng)過Spearman相關(guān)分析顯示胰腺癌組織中Survivin與Caspase-3蛋白的陽性表達(dá)之間具有負(fù)相關(guān)性(r=-0.37，P<0.05)。

表1 胰腺癌組織中Survivin、Caspase-3蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 例

3 討 論

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，細(xì)胞凋亡出現(xiàn)異常會(huì)影響到腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程，因而對影響細(xì)胞凋亡的相關(guān)基因進(jìn)行研究一直是臨床研究的熱點(diǎn)[8-9]。Survivin是IAPs家族成員，是一種凋亡抑制蛋白，在宮頸癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中均有高表達(dá)，但是在正常成人細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)或低表達(dá)[10]。臨床研究發(fā)現(xiàn)在胰腺癌和急性胰腺炎組織中均有Survivin的表達(dá)，李震東等[11]研究發(fā)現(xiàn)在正常胰腺組織中無Survivin的表達(dá)，在急性胰腺炎組織中隨著病情的發(fā)展程度Survivin程度表達(dá)逐漸升高，認(rèn)為Survivin對胰腺細(xì)胞的凋亡具有抑制作用，可通過促使胰腺受損細(xì)胞的凋亡轉(zhuǎn)為壞死加重病情。Survivin在胰腺癌組織中也表現(xiàn)為高表達(dá)，表達(dá)程度高于胰腺周圍組織，提示與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展也關(guān)系密切，孫建建等[7]研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌組織中Survivin表達(dá)明顯上調(diào)，比急性胰腺炎及胰腺囊腫組織中的Survivin表達(dá)程度高。本研究結(jié)果也顯示Survivin在胰腺癌組織中表達(dá)程度明顯高于急性胰腺炎組織。同時(shí)，對胰腺癌患者不同臨床病理特征時(shí)Survivin表達(dá)進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，Survivin的表達(dá)與患者年齡、性別、TNM分期及組織學(xué)分級、血管是否被侵犯等均無關(guān)，但是與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，在淋巴轉(zhuǎn)移患者中Survivin表達(dá)明顯上調(diào)，推測Survivin的高表達(dá)可能是影響到患者預(yù)后的調(diào)控基因之一，而且這一研究結(jié)果也與在其他研究結(jié)果一致[7]，將不同Survivin表達(dá)強(qiáng)度時(shí)患者生存期進(jìn)行分析，結(jié)果顯示Survivin表達(dá)強(qiáng)度與患者生存期有關(guān)，表達(dá)強(qiáng)度為(-)和(+)的患者生存期明顯長于表達(dá)強(qiáng)度為()()的患者，進(jìn)一步提示Survivin的高表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系密切。

Caspase-3蛋白是特異性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，是細(xì)胞凋亡過程中的關(guān)鍵元件，大多數(shù)的細(xì)胞凋亡均依存于Caspase-3介導(dǎo)的途徑，對細(xì)胞凋亡過程直接進(jìn)行影響，如Caspase-3在組織中出現(xiàn)異常表達(dá)，則直接會(huì)對組織細(xì)胞凋亡生物學(xué)變化等帶來影響。Caspase-3影響的細(xì)胞凋亡過程在人體的各種細(xì)胞中均存在，并且多種惡性腫瘤的細(xì)胞凋亡均與Caspase-3蛋白介導(dǎo)的凋亡過程密切相關(guān)[3-4]。在胰腺癌組織中Caspase-3陽性表達(dá)也明顯出現(xiàn)上調(diào)，比較正常胰腺組織和急性胰腺炎組織均陽性表達(dá)幅度更高[4，12]。本研究結(jié)果顯示Caspase-3的表達(dá)與患者自身的年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期、病理組織學(xué)分級、血管是否被侵犯等均無關(guān)，也與淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)，但是將不同Caspase-3表達(dá)強(qiáng)度時(shí)患者生存期進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Caspase-3表達(dá)強(qiáng)度不同者生存期明顯不同，提示Caspase-3的表達(dá)強(qiáng)度可能與患者預(yù)后也存在一定關(guān)系。胰腺癌組織中Caspase-3表達(dá)陰性的患者中，Survivin表達(dá)陽性，Caspase-3表達(dá)陰性患者中Survivin表達(dá)明顯高于Caspase-3表達(dá)陽性者，相關(guān)性分析顯示兩者間具有負(fù)相關(guān)性，提示Survivin與Caspase-3之間存在抑制關(guān)系，可能Survivin通過對Caspase-3的抑制而影響了細(xì)胞的凋亡，引起細(xì)胞發(fā)生突變，促使腫瘤的發(fā)生，因而Caspase-3與患者預(yù)后存在一定關(guān)系可能就是此途徑影響。

綜上所述，Survivin和Caspase-3蛋白在胰腺癌組織中均表達(dá)出現(xiàn)異常，Caspase-3蛋白表達(dá)陰性患者相對Survivin陽性表達(dá)高，之間具有負(fù)相關(guān)性，Survivin與患者淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，提示Survivin蛋白可能是通過對Caspase-3蛋白的抑制而影響了胰腺癌組織細(xì)胞的凋亡，并且可能參與了胰腺癌的轉(zhuǎn)移過程。

[1] 呂文超, 崔云甫.胰腺癌流行病學(xué)和病因?qū)W研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志,2011,19(27):2805-2809

[2] Cheng CX,Yang XM.Research Progress in Subcellular Localization of Survivin Associated with Cancer Prognosis[J].Med Recap,2011,17(1):72-74

[3] Visan I.Inflammasome caspase[J].Nature Immunology,2012,13(4):358-358

[4] Li C,Wu JJ, Hynes M,et al.C-Met is a marker of pancreatic cancer stem cells and therapeutic target[J].Gastroenterology,2011,141(6):2218-2227

[5] Huang Q,Li F,Liu X,et al.Caspase 3-mediated stimulation of tumor cell repopulation during cancer radiotherapy[J].Nature Medicine,2011,17(7):860-866

[6] Khan S,Jutzy JMS,Aspe JR,et al.Survivin is released from cancer cells via exosomes[J].Apoptosis,2011,16(1):1-12

[7] 孫建建，李勝棉，趙松，等.Survivin和Caspase-3在胰腺癌組織中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系[J].腫瘤防治研究,2012,39(1):62-67

[8] Milrot E,Jackman A,Kniazhanski T,et al.Methyl jasmonate reduces the survival of cervical cancer cells and downregulates HPV E6 and E7, and survivin[J].Cancer letters,2012,319(1):31-38

[9] Tolcher AW,Quinn DI,Ferrari A,et al.A phase II study of YM155,a novel small-molecule suppressor of survivin, in castration-resistant taxane-pretreated prostate cancer[J].Ann Oncol,2012,23(4):968-973

[10] Patacsil D,Osayi S,Tran AT,et al.Vitamin E succinate inhibits survivin and induces apoptosis in pancreatic cancer cells[J].Genes & Nutrition,2012,7(1):83-89

[11] 李震東，馬清涌，羅羽宏，等.Survivin基因在急性胰腺炎中的表達(dá)及其意義[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(6):1141-1143；1146

[12] 杜媛，馮一中，李峰.胰腺癌中l(wèi)ivin、caspase-3基因的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2009,25(6):610-614

Relationships of pancreatic cancer tissue of Survivin and Caspase-3 protein expression and clinical pathologic features and Survival time of patients

CHEN Aihua1, YU Jieping2

(1.Huarun Wugang Hospital, Wuhan 430080, Hubei, China; 2.The People’s Hospital of Hubei Provincial/The People’s Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, Hubei, China)

Objective It is to approach the relationships of the expression of survival element (Survivin) in pancreatic cancer tissue and cysteine aspartic acid protease-3 (Caspase-3) protein with the clinical pathological characteristics and survival time of patients.Methods 70 cases of pancreatic cancer tissue and 30 cases of acute pancreatitis tissue specimens were collected to detect the expression of Survivin and Caspase-3 protein by immunohistochemical SP staining, and analyze the clinical pathological features.Results The positive expression rate of Survivin, Caspase-3 protein was 84%, 86% in pancreatic cancer tissue respectively, and was 33%, 33% in acute pancreatitis tissues respectively, the positive expression rate of Survivin, Caspase-3 protein and expression intensity of pancreatic cancer were significantly higher than those of acute pancreatitis group (allP<0.05).There was no significant correlation between the gender, age of pancreatic cancer patients, the tumor site, TNM stage, tumor size, Whether the vessels have been violated, histological differentiation and the positive expression of Survivin, Caspase-3 in pancreatic tissue (allP>0.05), the Survivin positive expression rate was significantly higher than patients with no lymph node metastasis (P<0.05), but there was no significant correlation between positive expression rate of Caspase-3 and without lymph node metastasis (P>0.05).There was significant difference in survival time of patients with different expression intensity of Survivin and Caspase-3 (P<0.05).There were 29 patients in pancreatic cancer tissue with Survivin, Caspase-3 common positive expression, 80% of the patients with positive expression of Survivin alone had with negative expression of Caspase-3.Spearman correlation analysis showed that there was a negative correlation between the positive expression of Survivin and Caspase-3 protein (P<0.05).Conclusion The expression of Survivin and Caspase-3 protein in pancreatic cancer tissues is abnormal.The relative positive expression of Survivin in patients with Caspase-3 negative expression is raised, there is a negative correlation.There is a closely associated with lymph node metastasis in patients with Survivin, prompt Survivin protein may be based on the inhibition of Caspase-3 protein and influence the apoptosis of pancreatic cancer tissues and cells, and may participate in the process of pancreatic cancer metastasis, Survivin and Caspase-3 protein expression levels of monitoring can be used as prognostic evaluation.

pancreatic cancer; Survivin protein; Caspase-3 protein; pathological features

陳愛華，女，副主任醫(yī)師，從事胃腸疾病、胰腺疾病診治，胃腸鏡檢查及鏡下EMR治療。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.15.009

R735.9

A

1008-8849(2015)15-1625-04

2014-06-25