牛血清白蛋白與奎寧和奎尼丁的相互作用研究

軒春芝，李 楨，馬 驕，楊成成，傅英姿

（西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶400715）

牛血清白蛋白與奎寧和奎尼丁的相互作用研究

軒春芝，李 楨，馬 驕，楊成成，傅英姿*

（西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶400715）

牛血清白蛋白（BSA）自組裝在經(jīng)電沉積納米金修飾的玻碳電極表面，構(gòu)建了簡單的電化學(xué)手性傳感界面，并討論了該界面與不同濃度范圍的抗瘧疾手性藥物奎寧和奎尼丁的相互作用。實驗采用掃描電子顯微鏡（SEM）和循環(huán)伏安技術(shù)（CV）研究了手性界面的表面形貌和電化學(xué)行為，并用差分脈沖伏安法（DPV）和紫外-可見分光光度法（UV-Vis）測試了BSA與奎寧、奎尼丁之間的選擇性作用。實驗結(jié)果表明，當(dāng)奎寧和奎尼丁濃度小于5.0×10-4mol/L時，手性界面與奎尼丁作用后獲得較大的電流響應(yīng)，而當(dāng)奎寧和奎尼丁的濃度等于或大于5.0×10-4mol/L時，手性界面與奎寧作用后獲得較大的電流響應(yīng)；這是由于較大濃度時，奎寧和奎尼丁會破壞BSA的內(nèi)部氫鍵、暴露疏水腔，使BSA以一種更疏松的狀態(tài)存在，有利于電子傳遞。

選擇性作用；奎寧；奎尼??；牛血清白蛋白；電沉積納米金

0 引言

手性是自然界的基本屬性表達(dá)了化合物分子結(jié)構(gòu)不對稱的特征，廣泛存在于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物科學(xué)和食品科學(xué)等領(lǐng)域中。特別是在手性藥物中，由于藥性與藥物分子的空間立體結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，不同構(gòu)型的對映體雖然具有相同的物理性質(zhì)但在生物體內(nèi)的代謝過程、藥效及毒理性等存在較大的差異，多數(shù)情況下手性藥物中僅其中一個對映體具有藥理活性而另一個對映體沒有活性甚至可能具有相反的藥理作用[1-3]。例如，R-巴比士衍生物在臨床上具有麻醉劑的效果，而S-異構(gòu)體不僅沒有療效，還會使人痙攣，給人體的健康帶來副作用以及危害?？鼘幒涂岫∮善矫驵鸵粋€剛性奎尼丁環(huán)與一個二級甲醇橋組成如圖1所示，是重要的金雞納堿均可以用于

治療瘧疾，但是奎尼丁的抗瘧活性是奎寧的4倍多[4]。目前，奎寧常被用于治療夜間抽搐和關(guān)節(jié)炎，而奎尼丁則用于治療先天性肌無力。因此，發(fā)展簡單、可靠、快速、低成本的識別奎寧和奎尼丁的方法具有重要意義。目前，主要的手性識別方法有光譜法、毛細(xì)管電泳法、高效液相色譜法和核磁共振法，但這些方法操作復(fù)雜、成本高而且樣品需要復(fù)雜的前處理[5-7]，電化學(xué)方法因其具有操作簡便、成本低、樣品無需前處理等優(yōu)點已成為廣大研究者關(guān)注的熱點[8-9]。

圖1 奎寧和奎尼丁的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of quinine(QN)and quinidine(QD)

血清白蛋白是生物體循環(huán)系統(tǒng)中最豐富的蛋白質(zhì)是維持血液滲透壓的主要大分子[10]，在藥物運(yùn)輸與藥效等方面發(fā)揮著重要作用[11]。血清白蛋白可以作為載體與藥物及一些具有生物活性的小分子發(fā)生可逆性結(jié)合，從而增加疏水性藥物的溶解性以調(diào)節(jié)它們在體內(nèi)或體外的運(yùn)輸[12]，因此，血清白蛋白具有重要的醫(yī)用價值。牛血清白蛋白（BSA）由于其易得，易溶，成本低等優(yōu)點使其得到了極大的關(guān)注及應(yīng)用。BSA是由583個氨基酸殘基組成的多肽鏈，其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵，在肽鏈的34位有一個自由的巰基，其二級結(jié)構(gòu)為高度的ɑ-螺旋結(jié)構(gòu)，是一種天然的手性選擇劑，已成功地用于電化學(xué)手性傳感器中。然而，由于蛋白質(zhì)對氧化還原活性位點具有屏蔽作用，會阻礙電子傳遞而制約BSA的應(yīng)用范圍[13-16]。因此，增加BSA與電極之間的電子傳遞速率是構(gòu)建電化學(xué)傳感器的關(guān)鍵。該文經(jīng)電沉積獲得具有高比表面、優(yōu)良電子傳導(dǎo)能力的納米金（AuNPs），不僅操作簡單，而且納米金良好的生物相容性為蛋白質(zhì)提供了適宜的微環(huán)境，既增加了蛋白質(zhì)的固載量又能保持其生物活性[17-19]。而后BSA通過巰基與納米金形成Au-S鍵自組裝在納米金表面形成手性表面并用于后續(xù)實驗的進(jìn)一步分析。

1 實驗部分

1.1 試劑和儀器

硫酸奎寧（98%）、硫酸奎尼?。?8%）和氯金酸（HAuCl4·4H2O,99.99%）均購于阿拉丁試劑公司（中國上海），牛血清白蛋白（BSA，98%）購于百靈威試劑公司（中國北京）。工作緩沖溶液為0.1 mol/L磷酸緩沖溶液 （PBS,pH7.4）制備的5.0×10-3mol/L[Fe(CN)6]4-/3-溶液。其余化學(xué)試劑均為分析純，無需進(jìn)一步純化即可直接使用，所有實驗用水均為二次蒸餾水。

所有電化學(xué)測試均在CHI 440A電化學(xué)工作站（中國，上海辰華）上進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)三電極體系中，以飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為對電極，玻碳電極或修飾電極為工作電極。掃描電子顯微圖像由S-4800掃描電子顯微鏡（SEM，日本日立）得到，紫外-可見吸收光譜由UV-2450紫外-可見分光光度儀（UV-Vis，日本島津）得到。

1.2 手性生物傳感界面制備

裸玻碳電極（GCE,Φ=4mm）分別用1.0、0.3和0.05 μm的Al2O3拋光粉打磨拋光，依次在乙醇和二次蒸餾水中超聲清洗，自然晾干。隨后，將玻碳電極置于1%的HAuCl4溶液中，在-0.2 V施加恒電位沉積30 s，取出并用蒸餾水沖洗干凈。然后，在該修飾電極表面滴加10 μL，1.0 mg/mL的BSA溶液，將該修飾電極置于4℃下保存過夜。電極構(gòu)建示意圖如圖2所示。

2 結(jié)果與討論

2.1 界面的SEM檢測

圖3給出了AuNPs和BSA自組裝在AuNPs（BSA/AuNPs）上的表面形貌。AuNPs為密集的待開花粒狀納米顆粒（圖a）。BSA自組裝在AuNPs上之后，AuNPs的邊緣出現(xiàn)不規(guī)則的突起且粒徑增大（圖b）。

2.2 修飾界面的電化學(xué)特性

實驗采用循環(huán)伏安技術(shù)（CV）研究了電極修飾過程中電極表面的電化學(xué)特性。電化學(xué)測試在5.0×10-3mol/L的[Fe(CN)6]4-/3-（pH7.4）溶液中進(jìn)行，掃速為0.1 V/s。如圖4所示，裸GCE呈現(xiàn)一

對可逆的氧化還原峰（曲線a），經(jīng)AuNPs修飾后（AuNPs/GCE）峰電流增加（曲線b），源于AuNPs增大了電子傳遞速率；BSA自組裝在AuNPs上后，峰電流響應(yīng)明顯降低（曲線c）。

2.3 手性傳感界面對奎寧奎尼丁的選擇性作用

紫外-可見光譜特性：紫外-可見吸收光譜是研究化學(xué)反應(yīng)活性、結(jié)構(gòu)變化和生物體系的重要方法和手段[20]。該文研究了不同濃度的奎寧、奎尼丁對手性選擇劑BSA結(jié)構(gòu)的影響，實驗結(jié)果如圖5所示，BSA（1.0 mg/mL）的紫外-可見光譜（曲線a）顯示，由于n→π*的躍遷，BSA在280 nm處出現(xiàn)最大吸收峰[21]；向BSA溶液中分別加入較小濃度的奎寧 （圖5 A）和奎尼丁 （圖5 B）后（1.0×10-5mol/L曲線b，1.0×10-4mol/L曲線 c），BSA的紫外-可見吸收強(qiáng)度在280 nm有少許的降低但并沒有消失，說明BSA分子結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生變化；然而，當(dāng)奎寧、奎尼丁的濃度增大到5.0×10-3mol/L時（曲線d），BSA在280 nm的吸收峰消失，遷移到300~400 nm處，說明BSA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生了擴(kuò)展導(dǎo)致疏水腔的減少使得BSA采用一種更疏松的狀態(tài)存在[22]。

圖2 傳感界面構(gòu)建過程圖和不同濃度的奎寧、奎尼丁的差分脈沖伏安響應(yīng)：（A）1.0×10-4mol/L QN/QD，（B）5.0×10-3mol/L QN/QD(a)BSA/AuNPs/GCE,(b)QD/BSA/AuNPs/GCE,(c)QN/ BSA/AuNPs/GCEFig.2 Stepwise assembly of the sensing platform and DPVs for different concentration of QN and QD:(A)0.1 mmol/L QN/QD(B)5 mmol/L QN/QD,(a)BSA/AuNPs/ GCE;(b)QD/BSA/AuNPs/GCE;(c)QN/BSA/AuNPs/GCE

圖3 (a)AuNPs和(b)BSA/AuNPs的SEM表征Fig.3 SEM images:(a)AuNPs,(b)BSA/AuNPs

差分脈沖伏安（DPV）響應(yīng)：采用DPV技術(shù)研究了最佳條件下不同濃度的奎寧、奎尼丁在手性傳感界面（BSA/AuNPs/GCE）上的電化學(xué)行為。如圖6A所示，當(dāng)BSA/AuNPs/GCE與1.0×10-4mol/L的奎寧、奎尼丁作用后，電流響應(yīng)信號下降，且奎尼?。ㄇ€b）的電流下降量大于奎寧（曲線c），兩者峰電流變化差（ΔI=ΔIQN-ΔIQD）為5.58 μA；當(dāng)BSA/AuNPs/GCE與5.0×10-3mol/L的奎寧、奎尼丁作用后，電流響應(yīng)信號增大，且奎寧（曲線c）的電流增加量大于奎尼?。ㄇ€b），兩者峰電流變化之差為16.23 μA（圖6 B）。

產(chǎn)生這種有趣的現(xiàn)象的原因可能是：當(dāng)BSA/ AuNPs/GCE與較低濃度 （小于5.0×10-4mol/L）奎寧、奎尼丁作用時，因BSA阻礙電子傳遞，導(dǎo)致電

流響應(yīng)信號降低，且奎尼丁降低更多，奎尼丁的作用較強(qiáng)；而當(dāng)BSA/AuNPs/GCE與較高濃度（等于或大于5.0×10-4mol/L）奎寧、奎尼丁作用時，由于高濃度的奎寧、奎尼丁會破壞BSA的內(nèi)部氫鍵、暴露疏水腔，使BSA以一種更疏松的狀態(tài)存在，有利于電子傳遞[23]，所以，不僅電流響應(yīng)信號增強(qiáng)而且作用強(qiáng)弱也發(fā)生了反轉(zhuǎn)，奎寧的電流增強(qiáng)更多。該結(jié)果與紫外-可見分光光譜所得結(jié)果一致。2.4 實驗條件的優(yōu)化

圖4 不同界面的CV響應(yīng)：（a）裸GCE，（b）AuNPs/ GCE,（c）BSA/AuNPs/GCEFig.4 CVs of different interfaces:(a)bare GCE,(b) AuNPs/GCE,(c)BSA/AuNPs/GCE

圖5 紫外-可見光譜：（A）QN/BSA，（B）QD/BSA(a-d):0,1.0×10-5,1.0×10-4,5.0×10-4mol/L奎寧、奎尼丁與1.0 mg/mL BSA作用Fig.5 UV-Vis spectra of(A)QN/BSA,(B)QD/BSA system(a-d):0,0.01,0.1,0.5 mmol/L QN/QD with 1.0 mg/mL BSA

圖6 手性傳感界面對不同濃度奎寧、奎尼丁的DPV響應(yīng)：（A）1.0×10-4mol/L奎寧、奎尼丁，（B）5.0×10-3mol/L奎寧、奎尼丁，(a)BSA/AuNPs/GCE,(b)QD/BSA/AuNPs/GCE,(c)QN/BSA/AuNPs/GCEFig.6 DPVs of(A)0.1 mmol/L QN,QD,(B)5.0 mmol/L QN,QD:(a)BSA/AuNPs/GCE,(b)QD/BSA/AuNPs/GCE, (c)QN/BSA/AuNPs/GCE

考察BSA/AuNPs/GCE在奎寧、奎尼丁溶液中的孵育時間非常重要。圖7給出了從5~30 min手性界面分別與奎寧（曲線a）和奎尼?。ㄇ€b）

作用的電流-時間圖。從圖7A可以看出，當(dāng)BSA/ AuNPs/GCE與1.0×10-4mol/L的奎寧、奎尼丁作用后，峰電流的變化隨時間的增加而增加，但奎寧電流增加的比奎尼丁的慢且低，最大峰電流變化差在15 min處出現(xiàn) （圖7 B）。當(dāng)BSA/AuNPs/ GCE與5.0×10-3mol/L的奎寧、奎尼丁作用后，峰電流的變化也隨時間的增加而增加，且奎寧電流增加的更快更高，最大峰電流變化差出現(xiàn)在15 min。因此，選用15 min為最佳手性識別孵育時間。

圖7 孵育時間對手性識別的影響：（A）1.0×10-4mol/L奎寧、奎尼丁，（B）5.0×10-3mol/L奎寧、奎尼?。海╝）奎寧，（b）奎尼丁Fig.7 Time dependence of chiral recognition:(A)0.1 mmol/L QN/QD,(B)5.0 mmol/L QN/QD:(a)QN,(b)QD

圖8 峰電流變化與奎寧和奎尼丁的濃度的響應(yīng)關(guān)系：(A)1.0×10-6~1.0×10-4mol/L,(B)5.0×10-4~1.0×10-2mol/L:(a)奎寧，(b)奎尼丁Fig.8 Dependence of the peak current change on the concentration of(a)QN,(b)QD:(A)0.001~0.1 mmol/L, (B)0.5~10.0 mmol/L

2.5 線性

為了進(jìn)一步研究電流響應(yīng)與奎寧、奎尼丁濃度的關(guān)系，在最佳條件下，進(jìn)行了手性界面與一系列濃度的奎寧（直線a）和奎尼?。ㄖ本€b）作用后的差分脈沖伏安測試。圖8（A）展示了BSA/ AuNPs/GCE與濃度從1.0×10-6mol/L到1.0×10-4mol/L的奎寧、奎尼丁作用后的峰電流的變化，可看出，BSA/AuNPs/GCE與奎寧、奎尼丁作用后的峰電流變化均與濃度的增加成比例且奎尼丁增加的更快更高，線性方程分別為y=3.865+60.80 x (R=0.9993)和y=0.4792+40.62x(R=0.9992)；圖8（B）展示了BSA/AuNPs/GCE與一系列濃度大于或等于5.0×10-4mol/L的奎寧、奎尼丁作用后峰電流的變化，可看出，BSA/AuNPs/GCE與濃度從5.0×10-4mol/L到1.0×10-2mol/L的奎寧、奎尼丁作用后的峰電流變化也與濃度的增加成比例，奎寧增加的快且高，線性方程分別為y=3.716+ 3.244 x(R=0.9988)和y=1.571+1.356x(R=0.9987)。

2.6 基于BSA與納米粒子的識別方法對比

近年來，BSA做為手性選擇劑在手性識別中得到了一定的應(yīng)用[24-25]?，F(xiàn)將已有方法對比，如表1，該研究利用BSA自組裝在納米金表面識別奎寧和奎尼丁，并具有較高的手性選擇性。

2.7 傳感器的實際應(yīng)用

通過檢測奎寧和奎尼丁消旋體溶液中奎寧的含量（QN%）來研究該傳感器的實際應(yīng)用。保持消旋體溶液總濃度為1.0×10-4mol/L和1.0×10-3mol/L，QN的含量從0到100%變化。如圖9所示，峰電流響應(yīng)與奎寧含量的增加成線性關(guān)系，說明該傳感器可用于奎寧和奎尼丁消旋體的檢測。

表1 基于BSA與納米粒子識別方法對比Tab.1 Comparison of discrimination methods based on BSA and nanoparticles

圖9 不同濃度的奎寧和奎尼丁的消旋體的電流響應(yīng)(a)1.0×10-4mol/L,(b)1.0×10-3mol/LFig.9 Current response of the enantiomeric composition of QN and QD at different concentrations:(a)0.1 mmol/L,(b) 1.0 mmol/L

3 結(jié)論

實驗利用BSA自組裝在電沉積納米金修飾的玻碳電極表面，構(gòu)建了一個簡單可靠的電化學(xué)傳感界面用于與奎寧和奎尼丁的選擇性作用研究。由于奎寧和奎尼丁的空間結(jié)構(gòu)不同，導(dǎo)致與BSA的作用程度不同；而且不同濃度范圍內(nèi)的奎寧、奎尼丁與BSA的作用方式也不同，當(dāng)奎寧、奎尼丁的濃度小于5.0×10-4mol/L時，因BSA的阻礙作用，奎寧和奎尼丁與其作用后峰電流降低且奎尼丁降低得更多；當(dāng)奎寧、奎尼丁的濃度增大到5.0×10-4mol/L時，奎寧、奎尼丁會破壞BSA的結(jié)構(gòu)而有利于電子的傳輸，使峰電流升高且奎寧升高得更多。該傳感器不僅能夠識別奎寧和奎尼丁，而且為其他手性藥物或手性小分子與BSA的作用提供了一定的理論基礎(chǔ)具有潛在的應(yīng)用價值。

[1]Trojanowicz M,Kaniewska M.Electrochemical Chiral Sensors and Biosensors[J].Electroanal.,2009,21:229-238.

[2]Chen C,Shi H J,Zhao G H.ChiralRecognition and Enantioselective Photoelectrochemical Oxidation toward Amino Acids on Single-Crystalline ZnO[J].Phys. Chem.C.,2014,118:12041-12049.

[3]Yan T Q,Orihuela C.Rapid and high throughput separation technologies—Steady state recycling and supercritical fluid chromatography for chiral resolution of pharmaceutical intermediates[J].Chromatogr.A.,2007,1156: 220-227.

[4]Caldwell J.Importance of stereospecific bioanalytical monitoring in drug development[J].Chromatogr.A., 1996,719:3-13.

[5]Walle T,Kristina-walle U,Wilson M J,et al.Stereoselective ring oxidation of propranolol in man[J].Br.J.clin. Pharmac.,1984,18:741-747.

[6]Ali I,Gaitonde V D,Aboul-Enein H Y,et al.Chiral separation of β-adrenergic blockers on CelluCoat column by HPLC[J].Talanta.,2009,78:458-463.

[7]Na N,Hu Y P,Ouyang J,et al.Use of polystyrene nanoparticles to enhance enantiomeric separation of propranolol by capillary electrophoresis with Hp-beta-CD as chiral selector[J].Anal.Chim.Acta.,2004,527: 139-147.

[8]Sanghavi B J,Srivastava A K.Adsorptive stripping voltammetric determination of imipramine,trimipramine

and desipramine employing titanium dioxide nanoparticles and an Amberlite XAD-2 modified glassy carbon paste electrode[J].Analyst.,2013,138:1395-1404.

[9]Sanghavi B J,Kalambate P K,Karna S P,et al.Voltammetric determination of sumatriptan based on a graphene/ gold nanoparticles/Nafion composite modified glassy carbon electrode[J].Talanta.,2014,120:1-9.

[10]Carter D C,Ho J X.Structure of serum albumin[J].Adv. Protein Chem.,1994,45:153–203.

[11]Olson R E,Christ D D.Plasma protein binding of drugs [J].Ann.Rep.Med.Chem.,1996,31:327–337.

[12]Hu Y J,Liu Y,Wang J B,et al.Study of the interaction between monoammonium glycyrrhizinate and bovine serum albumin[J].Pharmaceut Biomed.,2004,36: 915-919.

[13]Gübitz G.Separation of Drug Enantiomers by HPLC Using Chiral Stationary Phases-A Selective Review[J]. Chromatographia.,1990,30:555-564.

[14]Kato M,Sakai-Kato K,Matsumoto,N,et al.A Protein-Encapsulation Technique by the Sol-Gel Method for the Preparation of Monolithic Columns for Capillary Electrochromatography[J].Anal.Chem.,2002,74:1915-1921.

[15]Baptista M S,Indig G L.Effect of BSA Binding on Photophysical and Photochemical Properties of Triarylmethane Dyes[J].Phys.Chem.B.,1998,102:4678-4688.

[16]Sen T,Haldar K K,Patra A.Au Nanoparticle-Based Surface Energy TransferProbe forConformational Changes of BSA Protein[J].Phys.Chem.C.,2008,112: 17945–17951.

[17]Pingarrón J M,Yá?ez-Sede?o P,González-Cortés A. Gold nanoparticle-based electrochemical biosensors[J]. Electrochim.Acta.,2008,53:5848-5866.

[18]Wang Z J,Li M Y,Su P P,et al.Direct electron transfer of horseradish peroxidase and its electrocatalysis based on carbon nanotube/thionine/gold composites[J]. Electrochem Commun.,2008,10:306-310.

[19]Yá?ez-Sede?o P,Pingarrón J M.Gold nanoparticlebased electrochemical biosensors[J].Anal Bioanal Chem.,2005,382:884-886.

[20]Hu Y J,Liu Y,Wang J B,et al.Study of the interaction between monoammonium glycyrrhizinate and bovine serum albumin[J].Pharmaceut Biomed.,2004,36: 915-919.

[21]Cheng Z J,Zhang Y T.Fluorometric investigation on the interaction of oleanolic acid with bovine serum albumin [J].Mol.Struct.,2008,879:81-87.

[22]Kamat B P.Study of the interaction between fluoroquinolones and bovine serum albumin[J].Pharmaceut Biomed.,2005,39:1046-1050.

[23]Liu Y,Chen M M,Wang S H,et al.New insight into the stereoselective interactions of quinine and quinidine, with bovine serum albumin[J].Mol.Recognit.,2014, 27:239-249.

[24]Liu F K,Wei G Z,Cheng F Z.Immobilization of a Monolayer of Bovine Serum Albumin on Gold Nanoparticles for Stereo-specified Recognition of Dansyl-norvaline[J]. Chin.Chem.Soc.,2003,50:931-937.

[25]Liu C M,Liang R P,Wang X N,et al.A versatile polydopamine platform for facile preparation of protein stationary phase for chip-based open tubular capillary electrochromatography enantioseparation[J].Chromatogr. A.,2013,1294:145-151.

The enantioselective interaction between bovine serum albumin and quinine/quinidine

Xuan Chun-zhi,Li Zhen,Ma Jiao,Yang Cheng-cheng,Fu Ying-zi*
(School of Chemistry and Chemical Engineering,Southwest University,Chongqing 400715,China)

A simple chiral sensing platform for enantioselective recognition of the anti-malaria chiral drug of quinine(QN)and quinidine(QD)was fabricated via the self-assembled of bovine serum albumin(BSA)on the electrodepositive gold nanoparticles(AuNPs)modified glassy carbon electrode.The sensing platform was characterized with scanning electron microscope(SEM)and cyclic voltammetry(CV).Differential pulse voltammetry(DPV)and Ultraviolet-visible spectroscopy(UV-Vis)were used to study the enantioselective interaction between QN/QD and bovine serum albumin.The results displayed that after the self-assembled interface interacting with QN and QD,a larger electrochemical signal was achieved from QD when the concentration of QN and QD less than 5.0×10-4mol/L,however,a larger singal was obtained from QN when the concentration of QN and QD increased to 5.0×10-4mol/L due to QN and QD damaged the intraprotein hydrogen bonds of BSA which make BSA unfold and compelled the protein adopt a more imcompact conformation state which enhanced the electron transfer rate.

enantioselective interaction;quinine;quinidine;bovine serum albumin;gold nanoparticles

*通信聯(lián)系人，E-mail:fyzc@swu.edu.cn