中國大鯢主要傳染病病原研究進展

樊汶樵，孫志芳，楊 帆，姜玉松，李曉英，孫翰昌，徐敬明

（重慶文理學(xué)院林學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院 重慶珍稀瀕危水產(chǎn)資源保護與開發(fā)研究中心，重慶 永川402168）

中國大鯢（Andrias davidianus），俗名“娃娃 魚”，屬國家二級保護動物，是個體最大的兩棲動物，也是我國珍稀名貴特產(chǎn)，已被列入CITES 公約附錄I 中[1]。自20 世紀(jì)80 年代后，由于環(huán)境人為破壞、過度捕撈等原因，大鯢棲息地范圍嚴(yán)重縮小，自然資源數(shù)量急劇減少[2]。隨著中國大鯢人工繁育技術(shù)的發(fā)展，其養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴大，2006年中國大鯢的繁殖數(shù)量超過20 萬尾，專業(yè)養(yǎng)殖中國大鯢的單位已超過500 家。由于養(yǎng)殖密度的不斷增加和生活環(huán)境的人為改變，大鯢的病害日益增多；感染中國大鯢的傳染性疾病主要包括了細(xì)菌病、病毒病、寄生蟲病以及其他一些疾病，給生產(chǎn)上造成巨大的經(jīng)濟損失，嚴(yán)重制約了大鯢人工養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本文旨在介紹中國大鯢常見傳染病病原的研究現(xiàn)狀，對進一步的預(yù)防與控制相關(guān)疾病提供參考。

1 病毒性病原

目前報道的感染中國大鯢的病毒只有一種；盡管命名上尚未統(tǒng)一，有中國大鯢病毒（Chinese giant salamander virus，CGSV），大鯢虹彩病毒（Andrias davidianus iridovirus，ADIV），中國大鯢虹彩病毒（Chinese giant salamander iridovirus，GSIV）和大鯢蛙病毒（Andrias davidianus ranavirus，ADRV）等提法，所指的都是蛙病毒科的虹彩病毒。

1.1 流行特征 從2009 年起，陸續(xù)出現(xiàn)了病毒性疾病暴發(fā)的報道。Geng 等[3]在甘肅與陜西、Dong等[4]在陜西、四川和河南，江育林等[5]在陜西，Meng等[6]在湖北、湖南、四川、陜西和浙江等地均分離到了感染中國大鯢的病毒。感染該病毒后以皮膚出現(xiàn)白點、出血斑、潰瘍, 四肢腫脹, 潰爛和頭部腫脹為主要癥狀，死亡率極高。該病毒主要在肝、脾和腎中繁殖，在部分傳代細(xì)胞系上也能很好的復(fù)制。針對蛙病毒主要衣殼蛋白（MCP）基因設(shè)計引物測序后，發(fā)現(xiàn)該病毒MCP 基因與其他幾種蛙病毒屬成員的相似性至少在96%以上。

1.2 分子生物學(xué)特性 Wang 等[7]率先對感染中國大鯢的虹彩病毒進行了全基因序列的測定，發(fā)現(xiàn)該病毒全長為106 719個bp，G-C含量為55.04%，有101個ORF（開放閱讀框）。從進化關(guān)系上來看，感染中國大鯢的虹彩病毒與蛙病毒屬的蛙病毒3（FV3）相似性最高。Chen 等[8]發(fā)現(xiàn)了幾個涉及病毒毒力及宿主感染性的關(guān)鍵基因發(fā)生了顯著變化；這些有明顯變化的基因可能在削弱或改變宿主抗病力、增強病毒致病性以及跨種間傳播中起關(guān)鍵作用。

1.3 生物學(xué)特性 Ma 等[9]探討了中國大鯢虹彩病毒在鯉魚上皮瘤細(xì)胞（EPC）上的超微結(jié)構(gòu)變化。高正勇等[10]發(fā)現(xiàn)該病毒對熱處理敏感，經(jīng)酸、堿、氯仿、乙醚以及胰蛋白酶處理，病毒滴度（TCID）下降極大；凍融次數(shù)對病毒滴度的影響不顯著。該病毒可在鯉魚上皮瘤細(xì)胞系（Epithelioma papilloma eyprini，EPC）、斑點叉尾鮰腎臟細(xì)胞系（Channel catfish kidney，CCK）、虹鱒魚性腺細(xì)胞系（Rainbow trout gonadal，RTG-2）等 細(xì) 胞 中 增殖。孫建濱等[11]證實了該病毒經(jīng)終濃度為0.1%的β-丙內(nèi)酯（BPL）40 ℃滅活處理72 h 后可達到完全滅活的效果。

1.4 診斷方法 周勇等[12]針對中國大鯢病毒MCP基因率先建立了TaqMan 實時熒光定量PCR 方法。隨著環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）技術(shù)的發(fā)展，Zhang 等[13]和Meng 等[14]都建立了基于LAMP 技術(shù)的中國大鯢虹彩病毒檢測方法，該方法在提取病毒核酸后僅需在63 ℃下作用60 min 即可觀察結(jié)果，利用該方法可以檢測100 個拷貝的DNA 樣品，肉眼即可判定結(jié)果。

由上述研究可知，目前報道的感染中國大鯢的病毒僅有虹彩病毒一種，針對該病毒的基本特性方面的研究已經(jīng)逐漸鋪開。但是，預(yù)防和控制該病的研究鮮有報道；作為預(yù)防病毒性疾病的關(guān)鍵，特異性疫苗的研制和應(yīng)用尚需很長的時間去完成；對患病中國大鯢的治療也應(yīng)該成為下一步研究的重點。

2 細(xì)菌性病原

中國大鯢的細(xì)菌性疾病鮮見國外報道，但是國內(nèi)學(xué)者一直在廣泛研究。從目前情況來看，感染中國大鯢的細(xì)菌大多來自氣單胞菌屬，以嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）為甚。

2.1 嗜水氣單胞菌 孟彥等[15]最早從浙江某養(yǎng)殖場患“腹水病”的中國大鯢腹水和腸道分離并鑒定了嗜水氣單胞菌。鐘蕾等[16]在湖南患病中國大鯢的體表病灶和體內(nèi)器官中分離到細(xì)菌，通過人工感染、細(xì)菌形態(tài)觀察和生理生化試驗，確定了引起大鯢發(fā)病的病原為嗜水氣單胞菌。徐景峨等從皮膚潰爛、口腔黏膜彌漫性出血以及肝臟腫大為臨床病理特征的貴州某養(yǎng)殖場分離鑒定了一株致病力極強的嗜水氣單胞菌；針對該菌的滅活乳化疫苗免疫保護試驗表明，免疫后的平均保護率達83.33%[17]。

2.2 其他單胞菌 王旭等[18]在患“腐皮病”的中國大鯢上分離到一株維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii），該菌對供試大鯢、斑點叉尾鮰和小鼠均有較強的致病作用。隨后對該菌自然感染中國大鯢的肌肉、肝、腎、肺、腸道等器官的組織病理學(xué)變化進行了觀察，發(fā)現(xiàn)該菌能使中國大鯢的組織器官出現(xiàn)嚴(yán)重的病理變化而導(dǎo)致死亡[19]。王玉等和楊星等分別分離鑒定了致病的溫和氣單胞菌（Aeromonas sobria）和類志賀鄰單胞菌（plesiomonas-shigelloides）。杜宗君等還曾在四川患病中國大鯢肝、腎中分離到一株熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）。

2.3 其他致病菌 吳中明等分離鑒定了一株引起中國大鯢足部潰爛的遲鈍愛德華菌（Edwardsiella tarda）；該菌對中國大鯢可能是一種機會致病菌，病菌感染大鯢需要合適的入侵途徑和數(shù)量，感染后細(xì)菌分布于皮下、血液、肝、脾、胃等器官。高正勇等[20]分離到一株導(dǎo)致中國大鯢死亡的弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii），該致病菌對健康鯽魚也有致病性，表明感染中國大鯢的致病菌往往能夠垮種間傳播。

根據(jù)前期關(guān)于中國大鯢細(xì)菌性疾病的研究，可以發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性疾病在養(yǎng)殖中國大鯢的各個省份都有不同程度的發(fā)生，發(fā)病大多伴隨體表潰爛和部分內(nèi)臟器官出血、壞死。氣單胞菌科的細(xì)菌是感染中國大鯢并導(dǎo)致發(fā)病的最重要原因，該類細(xì)菌的致病性主要是由于氣胞溶素所致，感染后容易導(dǎo)致體表潰爛、內(nèi)臟器官特別是消化器官出血、壞死。在細(xì)菌性疾病分離鑒定的相關(guān)報道中大多進行了藥物敏感試驗以便于臨床治療藥物的篩選，對于該類疾病的控制有一定作用；特異性疫苗的研制仍是防控細(xì)菌性疾病的重點。

3 寄生蟲病原

近年來關(guān)于感染中國大鯢的寄生蟲疾病報道相對較少。陳云祥和蒲德成等分別報道了毛細(xì)線蟲感染中國大鯢的病例；Li 等[21]則從湖北野生中國大鯢上分離到2 種纖毛原蟲。

4 傳染性病原的混合感染

由于中國大鯢生活的環(huán)境復(fù)雜，養(yǎng)殖條件參差不齊，感染中國大鯢的病原往往不止一種。于喆等[22]對貴州發(fā)生“細(xì)菌性感染綜合征”病鯢的組織器官進行細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化特性鑒定和人工感染試驗，證實嗜水氣單胞菌、布拉克枸櫞酸桿菌（Citrobacter braakii）和洛菲不動桿菌（Acinetobacter lwoffi）等3 種細(xì)菌是主要致病菌。余波等[23]在患“細(xì)菌性敗血癥”的中國大鯢體內(nèi)分離到了致病的嗜水氣單胞菌、弗式檸檬酸桿菌和柱狀黃桿菌（Flavobacterium cloumnare）；還在貴州省診斷出了一例虹彩病毒和嗜水氣單胞菌的混合感染，該病例以大鯢體表和四肢多處潰爛、內(nèi)臟器官出現(xiàn)充血、出血為特征[25]。謝輝等[24]對感染中國大鯢的“水霉病”進行研究，發(fā)現(xiàn)該病大多為車輪蟲病繼發(fā)感染水霉菌所致。

5 結(jié)語與展望

中國大鯢是由水生脊椎動物向陸生脊椎動物過渡的類群；感染中國大鯢的病原往往會在其他物種中進行傳播[20]。所以，這類病原的感染進程、與機體的相互作用機制具有極大的研究意義。目前已有不少關(guān)于中國大鯢傳染性疾病的報道，但是與其他動物相比，針對其病原體的研究仍然存在很大不足；傳染性病原的生物學(xué)特性研究還比較粗淺，而如何利用特異性疫苗遏制傳染性疾病的流行，快速準(zhǔn)確的診斷，發(fā)病后的對癥治療還需要繼續(xù)探索。

目前已有的報道中，中國大鯢傳染性疾病的混合感染既有不同致病細(xì)菌的參與，也有細(xì)菌與寄生蟲、真菌、病毒的共同作用；我們在臨床診斷中一定要注意對癥狀的觀察，實驗室分離病原的時候要針對不同病原進行測試，以期更加準(zhǔn)確的確定病原，減少誤診對中國大鯢養(yǎng)殖帶來的危害。

[1] 章克家，王小明，吳巍，等.大鯢保護生物學(xué)及其研究進展[J].生物多樣性，2002，10（3）：291-297.

[2] Wang X M，Zhang K J，Wang Z H，et al.The decline of the Chinese giant salamander Andrias davidianus and implication for its conservation[J].Oryx，2004，38（2）：197-202．

[3] Geng，Y Wang K Y，Zhou Z Y，et al.First Report of a Ranavirus Associated with Morbidity and Mortality in Farmed Chinese Giant Salamanders（Andrias davidianus）[J].J Comp Path，2011，145，95-102.

[4] Dong W Z，Zhang X M，Yang C M，et al.Iridovirus Infection in Chinese Giant Salamanders，China，2010[J] .Emerg Infect Dis，2011，17（12）：2388-2389.

[5] 江育林，張旻，景宏麗，等.患病中國大鯢中分離到一株虹彩病毒及其特性的研究[J].病毒學(xué)報，2011，27（3）：274-281.

[6] Meng Y，Ma J，Jiang N，et al.Pathological and microbiological findings from mortality of the Chinese giant salamander（Andrias davidianus）[J].Arch Virol，2014，159（6）：1403-1412.

[7] Wang N，Zhang M，Zhang L F，et al.Complete Genome Sequence of a Ranavirus Isolated from Chinese Giant Salamander（Andrias davidianus）[J].Genome Announc，2014，2（1）：e01032-13.

[8] Chen Z Y，Gui J F，Gao X C，et al.Genome architecture changes and major gene variations of Andrias davidianus ranavirus（ADRV）[J].Vet Res，2013，44：101.

[9] Ma J，Zeng L，Zhou Y，et al.Ultrastructural Morphogenesis of an Amphibian Iridovirus Isolated from Chinese Giant Salamander(Andrias davidianus) [J].J Comp Path，2014，150（2-3）：325-331.