血管內(nèi)皮生長因子含量表達與喉癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性

血管內(nèi)皮生長因子含量表達與喉癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性

蘇凱劉敩蔡郁孫立群

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130041)

摘要〔〕目的探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量變化與喉癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測68例喉癌患者血清VEGF含量與病理分級、臨床分期及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素關(guān)系。結(jié)果喉癌轉(zhuǎn)移組和喉癌非轉(zhuǎn)移組病人血清中VEGF含量表達與正常對照組相比差異顯著(P<0.01)。結(jié)論VEGF含量檢測可以作為喉癌的復(fù)發(fā)和區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的客觀指標，動態(tài)監(jiān)測對于指導(dǎo)臨床治療有重要意義。

關(guān)鍵詞〔〕喉腫瘤；VEGF；ELISA

中圖分類號〔〕R735.34〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：蔡郁(1976- )，女，主管護師，主要從事頭頸腫瘤治療研究。

第一作者：蘇凱(1973-)，男，主管技師，主要從事頭頸腫瘤研究。

喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤，喉癌的局部復(fù)發(fā)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠端轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要因素〔1〕。因此，尋找與喉癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移相關(guān)的腫瘤標志物對預(yù)測腫瘤的生物學(xué)行為以及指導(dǎo)治療有重要的臨床意義。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測不同時期喉癌患者血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量變化，觀察其與喉癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，旨在為喉癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷提供客觀指標。

1材料與方法

1.1對象68例喉癌病人血清由我院住院病人提供。均經(jīng)病理診斷喉鱗狀細胞癌，手術(shù)前后均進行采血，分離血清凍存。其中男45例，女23例，平均年齡56歲；隨機分為喉癌非轉(zhuǎn)移組40例，喉癌轉(zhuǎn)移組28例。根據(jù)美國抗癌協(xié)會第七版TNM分期，T116例，T224例，T318例，T410例；病理分級，Ⅰ級18例，Ⅱ級26例，Ⅲ級24例?？谷薞EGF試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。取40例健康體檢人員為對照組。各組年齡性別無明顯差別。

1.2方法取-70℃冰箱凍存的人喉癌血清做1∶10倍稀釋。分別加入含有VEGF抗體的酶標板內(nèi)100μl，4復(fù)孔，置37℃5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)反應(yīng)60min，取出后磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次，5min/次。每孔內(nèi)加入酶標抗體工作液100μl，置37℃ 5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)反應(yīng)60min，取出后甩干，PBS洗3次，加入鄰苯二胺工作液100μl，避光保溫10min，每孔加入終止液50μl,立即于酶標儀492nm處測OD值，根據(jù)標準品OD值在半對數(shù)坐標紙上作圖。結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即為VEGF含量。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS11.0軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1手術(shù)前后血清中VEGF含量比較與術(shù)前比較，術(shù)后VEGF含量水平明顯下降〔(489.7±16.2)ng/mlvs(261.4±9.6)ng/ml〕(P<0.01)。

2.2各組VEGF含量比較喉癌病人血清中VEGF總體水平高于正常對照組〔(236.8±6.9)ng/ml〕。但是喉癌轉(zhuǎn)移組VEGF含量〔(567.5±19.1)ng/ml〕明顯高于非轉(zhuǎn)移組〔(438.4±13.3)ng/ml〕(P<0.01)。

2.3喉癌病人血清VEGF含量表達與病理分級相關(guān)性分析呈正相關(guān)關(guān)系，即病理分級越高，VEGF含量隨之升高，Ⅰ級與Ⅱ級Ⅲ級相比〔(451.2±15.3)ng/ml，(495.5±13.8)ng/ml，(51.54±17.4)ng/ml〕差別顯著(P<0.05)，但Ⅱ級Ⅲ級相比無顯著差異。

2.4喉癌病人血清VEGF含量表達與臨床分期相關(guān)性T1T2兩組間VEGF含量水平〔(447.2±13.4)ng/ml，(468.2±16.2)ng/ml〕無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而T1、T2兩組分別與T3、T4〔(521.6±16.8)ng/ml，(563.3±19.3)ng/ml〕相比差異顯著(P<0.05)。

3討論

近年來，喉癌治療技術(shù)有了很大的發(fā)展，但是單純手術(shù)治療效果仍難讓人滿意，局部復(fù)發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移率較高〔2〕。因此，目前許多學(xué)者從腫瘤分子生物學(xué)角度對喉癌細胞因子進行了研究，發(fā)現(xiàn)喉癌組織中VEGF含量異常表達，與腫瘤侵襲復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，腫瘤如果沒有新生血管的支持，當腫瘤體積達到1mm3時就會停止生長并發(fā)生退化〔3〕，所以抑制VEGF表達就可以阻止腫瘤生長。因為臨床分期是制定臨床決策的主要因素，臨床分期越高證明疾病的侵襲范圍就越廣〔4〕。所以VEGF含量檢測可以作為臨床分期的參考指標，為正確的臨床分期提供理論依據(jù)。本研究結(jié)果表明隨著病理分級的升高血清中VEGF含量亦升高。文獻報道〔5〕，喉癌組織類型和組織分化程度是決定腫瘤行為及預(yù)后關(guān)鍵因素,掌握組織病理學(xué)的特征，將有助于選擇早期篩查腫瘤標志物和有針對性的治療方案尤其重要。VEGF是血管內(nèi)皮細胞特異性生長因子，具有促進內(nèi)皮細胞增殖，提高血管通透性等生物學(xué)作用，是目前發(fā)現(xiàn)最重要的促進腫瘤血管生成因子，因此，通過血清VEGF水平表達監(jiān)測喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的發(fā)展規(guī)律，為腫瘤抗血管生成治療帶來了新的思路，由于血清腫瘤標志物的檢測方法簡便、經(jīng)濟、快速無創(chuàng)、尤其對晚期腫瘤的診斷及療效的評估，預(yù)后判斷有較高的臨床實用價值。

4參考文獻

1李曉明，宋琦.喉癌治療后復(fù)發(fā)的外科手術(shù)治療〔J〕.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2014；49(8)：701-3.

2黎學(xué)佳，葉進，莊士民,等.慢病毒介入的類表皮生長因子域基因沉默抑制喉癌Hep-2細胞增殖和細胞侵襲的研究〔J〕.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014;49(8)：643-8.

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4PerignyM,BairatiI,HarveyI,et al.Roleofimmunohistochemicaloverex-pressionofmatrixmetalloproteinasesMMP-2andMMP-11intheprogno-sisofdeathbyovariancancer〔J〕.AmJClinPathol,2008;129(2):226-31.

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〔2015-03-22修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)