梗阻性黃疸模型建立及bcl-2、肝功能、肝臟病理變化的研究

席　量　樊向文*　李尚東

（內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院 腫瘤外科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

梗阻性黃疸模型建立及bcl-2、肝功能、肝臟病理變化的研究

席量樊向文*李尚東

（內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院 腫瘤外科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

目的 研究梗阻性黃疸時(shí)在不同時(shí)間段內(nèi)肝臟bcl-2、肝功能以及肝臟病理變化的相互影響。方法 將大鼠分為瞬間結(jié)扎組、梗阻性黃疸組。結(jié)果 ①血清ALT、AST、Tbil、Dbil、TBA、ALP、GGT值在梗阻性黃疸組各個(gè)時(shí)相均明顯高于對(duì)照組。②肝組織中bcl-2表達(dá)在梗阻性黃疸組各個(gè)時(shí)相均明顯高于對(duì)照組， 主于匯管處表達(dá)。③肝細(xì)胞呈不同程度腫脹、脂肪變性、壞死。結(jié)論 梗阻時(shí)間延長(zhǎng)bcl-2表達(dá)、肝功能、肝細(xì)胞壞死明顯升高，在時(shí)間上存在一致性。

梗阻性黃疸；肝功能；BCL-2；凋亡；動(dòng)物模型

梗阻性黃疸時(shí)導(dǎo)致了機(jī)體各系統(tǒng)器官的損害以及相應(yīng)的病理生理改變，本研究利用大鼠梗阻性黃疸模型對(duì)大鼠梗阻性黃疸時(shí)在不同時(shí)間段內(nèi)肝臟bcl-2、肝功能、肝臟病理變化的影響進(jìn)行了研究，對(duì)梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡影響的機(jī)制作探討。

1　主要材料、方法與結(jié)果

方法：選用健康雄性Wistar大鼠54只，隨機(jī)將大鼠分為：①假手術(shù)組：9只大鼠做膽總管游離和瞬間結(jié)扎；②梗阻性黃疸組：結(jié)扎膽總管4、8、12、16、20 d組，每組9只。用20%烏拉坦注射液麻醉后，經(jīng)上腹部正中切口將膽總管雙重結(jié)扎，術(shù)后自由進(jìn)食水。大鼠觀察指標(biāo)：①下腔靜脈抽血采用多道全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中ALT、AST、TBil、DBil、TBA、ALP、GGT。②肝組織 HE 染色后光鏡下觀察肝臟的病理改變。③肝組織Bcl-2蛋白測(cè)定，用免疫組化SP法測(cè)定結(jié)果。

1.1肝臟組織病理學(xué)改變：肝臟病理切片HE染色后光鏡下見：對(duì)照組肝細(xì)胞無腫脹、排列整齊，梗阻性黃疸組肝細(xì)胞呈不同程度腫脹、脂肪變性，8 d組肝細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間淤膽，纖維組織增生，膽小管擴(kuò)張及中度增生，膽栓形成，12 d組見肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，可見細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)濃縮，核染色質(zhì)向核仁或核周邊聚集，結(jié)扎20 d組，大范圍的匯管區(qū)周圍肝細(xì)胞變性，纖維組織增生向肝小葉內(nèi)擴(kuò)展，可見肝細(xì)胞壞死。隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)肝組織病理改變逐漸加重。

1.2免疫組化測(cè)肝組織Bcl-2的表達(dá)：各梗阻性黃疸組大鼠肝組織中均有Bcl-2表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆?；騽蛸|(zhì)樣棕黃色結(jié)構(gòu)為Bcl-2免疫陽(yáng)性細(xì)胞，對(duì)照組肝組織未見Bcl-2蛋白表達(dá)，梗阻性黃疸4、8、12、16、20 d組Bcl-2蛋白表達(dá)均與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.01）這些變化提示梗阻性黃疸后Bcl-2蛋白表達(dá)隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)明顯升高。

1.3各組大鼠肝功能的變化：血清ALT、AST、Tbil、Dbil、TBA、ALP、GGT值在梗黃組各個(gè)時(shí)相均明顯高于對(duì)照組，并且隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高；梗黃12 d組見AST、ALT 、GGT明顯升高，與對(duì)照組比較有差異（P＜0.05）；TBA于梗黃8 d組升高明顯與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。20 d組ALT、AST、ALP、GGT數(shù)值回落與對(duì)照組比無顯著性差異。提示梗黃后肝功能明顯受損，膽汁酸濃度顯著升高進(jìn)一步加重對(duì)肝細(xì)胞損害。肝細(xì)胞不可逆轉(zhuǎn)性壞死，導(dǎo)致肝功能喪失。

2　討 論

梗阻性黃疸是外科常見病和多發(fā)病，有研究證實(shí)［1-7］，瘀膽時(shí)肝臟發(fā)生細(xì)胞壞死并不多見，其常見的病理形態(tài)改變?yōu)榧?xì)胞凋亡。本研究建立梗阻性黃疸大鼠模型，并對(duì)梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2表達(dá)，肝功能以及肝臟病理變化的影響進(jìn)行了研究。梗阻性黃疸時(shí)，高膽紅素血癥嚴(yán)重影響肝細(xì)胞能量代謝和肝功能，引起肝細(xì)胞凋亡增多，肝再生受抑制。有研究證明，肝細(xì)胞凋亡是梗阻性黃疸肝細(xì)胞死亡的主要形式.在梗阻性黃疸引起的肝損傷發(fā)揮重要作用。而其他報(bào)道［2］也確定了肝細(xì)胞損傷在7 d內(nèi)或在14 d內(nèi)。在本實(shí)驗(yàn)研究觀察到在梗阻性黃疸大鼠肝臟細(xì)胞凋亡改變貫穿整個(gè)病程，血清ALT、AST、Tbil、Dbil、TBA、ALP、GGT值在梗阻性黃疸組各個(gè)時(shí)相均明顯高于對(duì)照組，并且隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高；其中Tbil、Dbil、ALP與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.01）；梗阻性黃疸12 d組見AST、ALT、GGT明顯升高，與對(duì)照組比較有差異（P＜0.05）；TBA于梗阻性黃疸8 d組升高明顯與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。20 d組ALT、AST、ALP、GGT數(shù)值回落與對(duì)照組比無顯著性差異［3］。

總之，研究中我們成功建立梗阻性黃疸模型，梗阻性黃疸后肝臟細(xì)胞損傷逐漸加重，凋亡細(xì)胞增加，開始進(jìn)入自我調(diào)節(jié)及修復(fù)過程，適應(yīng)梗阻性黃疸的病理環(huán)境（16 d前），20 d肝細(xì)胞壞死。16～20 d是肝細(xì)胞損傷反應(yīng)最強(qiáng)烈的時(shí)點(diǎn)，研究表明，梗阻性黃疸后16～20 d為組織學(xué)量化的一個(gè)有效時(shí)間點(diǎn)。故臨床膽道梗阻發(fā)病20 d，應(yīng)及時(shí)測(cè)定膽汁淤積性肝損傷的程度，評(píng)估病情，應(yīng)用有效藥物治療或手術(shù)治療。

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1671-8194（2015）10-0072-01