癲癇患者腦組織中SCG10的表達(dá)與耐藥性的相關(guān)性分析

田 光

河南周口市川匯區(qū)中醫(yī)院西醫(yī)普內(nèi)科 周口 466000

癲癇是臨床常見的短暫性大腦功能障礙慢性疾病，現(xiàn)將我院收治的40例耐藥性癲癇患者作為對象進(jìn)行研究，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2011-08—2013-06收治的40例耐藥性癲癇患者為觀察組，男27例，女13例；年齡7～60歲，平均（32.8±6.7）歲；選取同期40例神經(jīng)外科減壓或清創(chuàng)治療患者為對照組，男26例，女14例；年齡8～58歲，平均（33.2±5.4）歲；2組性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備和隨機(jī)化處理：2組取出腦組織后，以4%多聚甲醛48h固定，以石蠟常規(guī)包埋，保存?zhèn)溆?。將石蠟塊取出，使用石蠟切片機(jī)連續(xù)性冠狀切片，控制切片厚度為5 μm，每份標(biāo)本制備10張切片，隨機(jī)抽取2張，實(shí)施免疫組化和熒光染色檢測。

1.2.2 免疫組化檢測：組織切片，使用電吹風(fēng)烘烤10min，乙醇脫蠟，自來水浸泡5min，PBS緩沖液反復(fù)沖洗3次。蒸餾水配備3%雙氧水，室溫放置10min；以0.01枸櫞酸鈉緩沖液熱修復(fù)抗原30min，溫度95℃。加入抗原修復(fù)液Ⅰ，室溫放置10min，隨后PBS緩沖液反復(fù)沖洗3次，每次沖洗3 min。加入正常兔血清，室溫放置30min，甩掉多余液體。加入適量稀釋后益康山羊抗人SCG10，使用PBS代替一抗室溫過夜作為陰性對照。設(shè)置冰箱溫度4℃，于第2天37℃水浴箱中孵育30min，PBS反復(fù)沖洗3次，5min／次。添加生物素化二抗，上述相同步驟孵育沖洗，加入SABC，相同步驟孵育沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，二甲苯脫水、透明，中性樹膠封片。MAPK檢測步驟相同于SCG10。

1.2.3 免疫熒光檢測：切片脫蠟，抗原修復(fù)，加入1%牛血清蛋白及0.4%ritonX-100，室溫放置60min，添加兔血清封閉液，封閉5h。添加SCGl0山羊抗人多克隆一抗和MAPK小鼠抗人多克隆一抗，以PBS替代作為陰性對照，4℃放置一夜。于第2天37℃水浴箱中孵育30min，PBS反復(fù)沖洗3次，5min／次。體添加RITC-兔抗羊二抗及FITC一兔抗小鼠二抗，室溫下3h孵育，PBS反復(fù)沖洗，以油-PBS封片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)資料采用SPSS 20.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組SCG10及MAPK表達(dá)情況比較 觀察組SCG10表達(dá)（0.484±0.025）明顯高于對照組（0.314±0.020），觀察組MAPK表達(dá)（0.447±0.148）顯著高于對照組（0.315±0.130），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 癲癇患者SCG10及MAPK表達(dá)情況比較 觀察組經(jīng)熒光雙標(biāo)檢測，患者腦組織SCG10及MAPK表達(dá)處于同一細(xì)胞。

3 討論

癲癇為神經(jīng)系統(tǒng)常見疾病，屬于短暫腦功能失調(diào)綜合征，具有反復(fù)發(fā)作性特點(diǎn)，其特征主要表現(xiàn)為腦神經(jīng)元異常放電致癲癇反復(fù)發(fā)作。研究［2］認(rèn)為，癲癇病理變化表現(xiàn)為細(xì)胞骨架變化，而事實(shí)為神經(jīng)可塑性結(jié)構(gòu)改變。癲癇發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，發(fā)病率高，嚴(yán)重影響患者身心健康，目前臨床以藥物治療為主，但發(fā)病機(jī)制尚未明確，尚無特效藥物。

SCG10是神經(jīng)特異性蛋白，胚胎期神經(jīng)元發(fā)生期間，SCG10在生長錐部位表達(dá)較高，但胎兒娩出后，SCG10表達(dá)大幅度降低，而在成熟大腦神經(jīng)元突觸重塑部位，SCG10依然存在表達(dá)。SCG10會促進(jìn)神經(jīng)延伸，重塑突觸，影響了神經(jīng)系統(tǒng)可塑性。同時(shí)在動(dòng)物癲癇模型中，SCG10表達(dá)明顯增高［3］，可見SCG10與癲癇形成有很大關(guān)系。MAPK為絲裂原活化蛋白激酶，于中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)廣泛，受到各種細(xì)胞外刺激信號時(shí)，會對突觸傳遞、神經(jīng)元重塑等產(chǎn)生影響。SCG10是MAPK的下游底物，研究［4］發(fā)現(xiàn)，MAPK和神經(jīng)元重塑有關(guān)，與癲癇發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)系。在本組研究中，2組經(jīng)免疫組化檢測后，觀察組患者SCG10和MAPK表達(dá)均顯著高于對照組（P＜0.05）。且癲癇患者經(jīng)熒光雙標(biāo)檢測，患者腦組織SCG10及MAPK表達(dá)處于同一細(xì)胞。由此可見，SCGl0表達(dá)及MVPK表達(dá)與癲癇患者發(fā)病密切相關(guān)，且處于同一細(xì)胞。說明癲癇患者腦組織中SCG10的表達(dá)水平明顯較高，通過對其觀察能夠明確患者病情，而SCG10及MAPK之間相互作用與療效有一定的相關(guān)性。

［1］姚蘭，張美林，陳陽美.難治性癲癇患者腦組織中SCGl0的表達(dá)及其意義［J］.世界科技研究與發(fā)展，2010，32（2）：239-242.

［2］韓璞.ATP-結(jié)合相關(guān)基因mRNA在耐藥性癲癇患者腦組織中的表達(dá)［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2011，33（2）：198-199.

［3］楊柳.ROCK1，TRAF3mRNA在耐藥性癲癇患者海馬組織中的表達(dá)及意義［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，36（6）：176-177.

［4］葛曉霞.癲癇患者腦組織中SCG10的表達(dá)及其與耐藥的相關(guān)性分析［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2014，9（1）：183-184.