膽囊癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)變化及其與Bcl-2、p53表達(dá)的關(guān)系

劉誼，李強(qiáng)

(1天津市兒童醫(yī)院，天津300074;2天津市腫瘤醫(yī)院)

膽囊癌是肝外膽道中最常見的惡性腫瘤，在我國消化道腫瘤中居第5位。膽囊癌的發(fā)生發(fā)展是多基因改變、多階段的復(fù)雜過程，聯(lián)合應(yīng)用手術(shù)、放療、化療、生物治療等各種手段用于膽囊癌患者，但其預(yù)后并無明顯改善。Survivin蛋白是一種新型凋亡抑制因子，其基因位于染色體17 q25上，在幾乎所有的惡性腫瘤組織中均廣泛的表達(dá)。Bcl-2和p53是迄今為止研究的最深入、廣泛的腫瘤相關(guān)基因，與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，二者與Survivin的相關(guān)性是近來研究的熱點(diǎn)。本研究采用免疫組化法檢測膽囊癌、正常膽囊、膽囊息肉、膽囊炎組織中Survivin的表達(dá)，研究其與膽囊癌臨床特征的關(guān)系，并探討其與Bcl-2、p53表達(dá)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1995年1月～2005年1月收治的臨床及病理資料完整的原發(fā)性膽囊癌患者56例，其中男19例、女37例，年齡25～76歲、平均56.3歲。臨床 Nevin(1976)分期:Ⅰ期1例，Ⅱ期9例，Ⅲ期17例，Ⅳ期19例，Ⅴ期10例。組織學(xué)分化:高分化9例，中分化18例，中低分化14例，低分化15例。局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，伴有膽囊結(jié)石27例。所有患者均行根治術(shù)或擴(kuò)大根治術(shù)，術(shù)前均未接受過放療或化療等任何治療。同時(shí)隨機(jī)選取膽囊炎患者15例、膽囊良性息肉患者15例、正常者10例作為對照。所有病例均經(jīng)病理證實(shí)。

1.2 Survivin、Bcl-2、p53蛋白檢測 從病理科調(diào)取全部入組患者存檔的術(shù)后原始病理組織蠟塊，重新進(jìn)行切片、制片，采用SP法［1］對切片進(jìn)行預(yù)處理、涂膠、免疫組化染色，并選用已知陽性肝癌切片作陽性對照，用 PBS代替一抗作陰性對照，檢測 Survivin、Bcl-2、突變型p53蛋白。結(jié)果判定:Survivin和Bcl-2均表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，p53表達(dá)于細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核被染為淡黃色至棕黃色，染色強(qiáng)度明顯高于背景者為Survivin、Bcl-2或p53表達(dá)陽性;細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核無黃色染色或顯色強(qiáng)度與背景無明顯差別者為表達(dá)陰性。

1.3 隨訪方法 采用門診復(fù)查、電話及書信進(jìn)行隨訪。生存時(shí)間為自手術(shù)治療之日至末次隨訪日或死亡的時(shí)間，以月為單位計(jì)算總體生存率，隨訪滿5 a截止。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，生存率采用Kaplan-Meier方法計(jì)算;各變量與預(yù)后的關(guān)系采用單因素方差分析;相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Survivin蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)陽性率為73.2%(41/56)，在膽囊炎、膽囊良性息肉、正常膽囊組織中均無Survivin表達(dá)。與膽囊炎、膽囊良性息肉、正常膽囊組織比較，膽囊癌Survivin表達(dá)增強(qiáng)(P均＜0.05)。膽囊癌組織中Survivin蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系見表1。膽囊癌中Survivin的表達(dá)與患者的年齡、性別、臨床分期、組織學(xué)分化、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否伴有膽囊結(jié)石等均無相關(guān)性(P均＞0.05)。56例膽囊癌中29例p53蛋白陽性表達(dá)，陽性率為51.8%。p53表達(dá)陽性者中Survivin蛋白表達(dá)陽性率為86.2%(25/29)，p53表達(dá)陰性者中為59.3%(16/27)，兩者比較，P ＜0.05。56 例膽囊癌中34例 Bcl-2蛋白陽性表達(dá)，陽性率為60.7%。Bcl-2表達(dá)陽性者中Survivin蛋白陽性率為85.3%(29/34);Bcl-2表達(dá)陰性者中為54.5%(12/22)，兩者比較，P＜0.05。膽囊癌患者Survivin蛋白陽性表達(dá)的生存時(shí)間為(16.7±1.9)個(gè)月，中位生存時(shí)間(15.0±2.3)個(gè)月，其1、3年生存率分別為58.5%和4.9%。而Survivin蛋白陰性表達(dá)的生存時(shí)間為(26.5 ±4.3)個(gè)月，中位生存時(shí)間(27.0±5.8)個(gè)月，其 1、3 年生存率分別為 73.3% 和13.3%。兩者相比，Survivin陽性表達(dá)的膽囊癌患者1、3年生存率低于 Survivin陰性者(P均 ＜0.05)。詳見圖1。

表1 Survivin蛋白表達(dá)與膽囊癌患者臨床病理特征的關(guān)系

圖1 Survivin蛋白表達(dá)與膽囊癌患者生存率的關(guān)系

3 討論

細(xì)胞凋亡異常在許多人體惡性腫瘤的發(fā)病學(xué)上占有十分重要的地位。早在1967年，Iversen［2］就提出腫瘤的生長并不僅是生長迅速，同時(shí)其細(xì)胞的凋亡率也明顯減少。正常機(jī)體處在細(xì)胞增殖和凋亡的動(dòng)態(tài)平衡中，二者的動(dòng)態(tài)平衡被打破時(shí)就會(huì)形成腫瘤。Survivin在多種腫瘤中均可見其表達(dá)［3～9］。本研究采用免疫組化SP法檢測膽囊癌組織中Survivin的表達(dá)，結(jié)果表明Survivin在膽囊癌組織中高度表達(dá)，陽性率為73.2%，而在非腫瘤的膽囊組織中未檢測到表達(dá)，提示Survivin對膽囊癌的發(fā)生發(fā)展起重要作用。本研究顯示，Survivin的表達(dá)與膽囊癌患者的年齡、性別、臨床分期、組織學(xué)分化、是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及是否伴有膽道結(jié)石均無明顯相關(guān)性。Nigam等［3］定量評估了 Survivin在膽囊癌中的表達(dá)，血清Survivin蛋白濃度在109 pg/mL時(shí)診斷膽囊癌的敏感性為82.05%，特異性為93.33%。推斷Survivin的表達(dá)上調(diào)出現(xiàn)在膽囊癌發(fā)生的早期階段，通過抑制細(xì)胞凋亡促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。研究Survivin在膽囊癌中的表達(dá)對膽囊癌的診斷和治療有重要的現(xiàn)實(shí)意義。同樣，檢測血清中抗Survivin抗體及膽汁脫落細(xì)胞的Survivin表達(dá)水平將有助于膽囊癌的早期診斷。另外，由于Survivin具有很強(qiáng)的抗凋亡作用，對其阻滯可能成為膽囊癌基因治療的新靶點(diǎn)［10］。

本研究結(jié)果顯示，膽囊癌組織中Bcl-2的表達(dá)與Survivin蛋白表達(dá)有密切關(guān)系。Bc1-2基因定位于染色體18q21，Survivin基因定位于染色體17q25上，此位點(diǎn)不穩(wěn)定時(shí)可能涉及t(14;18)(q24;q21)易位，使Bcl-2基因轉(zhuǎn)位到14號染色體免疫球蛋白重鏈JH片段，導(dǎo)致Bcl-2基因轉(zhuǎn)錄激活而表達(dá)失控;而且Survivin和Bc1-2基因均能通過富含鳥嘌呤和胞嘧啶的啟動(dòng)子調(diào)節(jié)，并在增生活躍的細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄。推測Survivin和Bcl-2可能有共同的轉(zhuǎn)錄激活機(jī)制，兩者協(xié)同發(fā)揮抗凋亡效應(yīng)。本研究還表明，p53可負(fù)性調(diào)節(jié)Survivin表達(dá)。在體內(nèi)外多種致DNA損傷因素的作用下，p53-Survivin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被激活，使細(xì)胞周期停滯在G1/S期并誘發(fā)細(xì)胞凋亡。但在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，由于p53基因發(fā)生突變，其功能喪失，致使Survivin表達(dá)增高，細(xì)胞周期停滯在G2/M期，細(xì)胞凋亡減少，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。目前，這一推測在急性淋巴細(xì)胞白血病中已經(jīng)得到了證實(shí)［11］。此外，在胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌中也有類似報(bào)道［4，5，12］。

本研究發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白陽性表達(dá)的膽囊癌患者1、3年生存率明顯低于 Survivin陰性表達(dá)者。Nigam等［3］的研究也得出了相似的結(jié)論。但目前關(guān)于Survivin的生物學(xué)特性及其具體調(diào)控機(jī)制還不十分明確，針對Survivin的靶向基因治療所采用的分子拮抗劑、所需載體、轉(zhuǎn)移途徑和療效方面還需進(jìn)一步研究。相信隨著分子生物學(xué)和生物工程學(xué)等各種學(xué)科的發(fā)展，針對Survivin的靶向基因治療可能會(huì)為腫瘤的治療帶來新的生機(jī)。

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