胃腺癌組織中RhoC、CD105蛋白的表達(dá)變化及意義

肖興國

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院，鄭州450007)

胃腺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生、發(fā)展及確切分子病理機(jī)制尚未完全明確。Rho家族屬于小分子G蛋白基因亞家族。文獻(xiàn)表明，Rho家族與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。2000年6月～2013年6月，我們觀察了胃腺癌組織中RhoC、CD105蛋白的表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院收治的胃腺癌患者108例，男 70例，女38例;年齡 25～78(57.0±11.7)歲。所有患者術(shù)前均未接受放化療及免疫治療。其中高、中分化腺癌40例，低分化腺癌68例;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期42例，Ⅲ、Ⅳ期66例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者67例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者41例;腫瘤浸潤黏膜及黏膜下層者19例，肌層者42例，漿膜及漿膜外者47例。手術(shù)留取胃腺癌組織108例份(胃癌組)、癌旁不典型增生組織40例份(癌旁組)、正常胃黏膜組織30例份(正常組)。

1.2 主要試劑 RhoC蛋白山羊抗多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，即用型SABC試劑盒、DAB顯色試劑盒(武漢博士德公司)，鼠抗人CD105單克隆抗體(北京中杉金橋公司)。

1.3 組織 RhoC、CD105蛋白檢測 所有標(biāo)本均經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟，高溫高壓熱抗原修復(fù)，嚴(yán)格按照免疫組化SABC試劑盒操作步驟進(jìn)行;DAB顯色，蘇木素復(fù)染。以已知RhoC、CD105蛋白陽性胃腺癌組織切片作陽性對照，PBS代替一抗設(shè)陰性對照。RhoC染色陽性信號定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核，每例選擇10個不同高倍視野，計算RhoC陽性細(xì)胞數(shù)占視野中腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比，無陽性著色或陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性(－)，陽性細(xì)胞數(shù)在5% ～50%為陽性(+)，陽性細(xì)胞數(shù)＞50%為強(qiáng)陽性(++)，陽性與強(qiáng)陽性合計為陽性表達(dá)。CD105蛋白標(biāo)記微血管，計數(shù)微血管密度(MVD)，凡呈現(xiàn)棕色單個內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇計為一個血管，但肌層較厚及管腔面積＞8個紅細(xì)胞直徑的血管不計數(shù);先在10×10低倍鏡下掃視整張切片，確定微血管最密集的5個視野，然后在高倍鏡(10×40)視野范圍內(nèi)計數(shù)所有染色的微血管，取5個視野計數(shù)結(jié)果的均數(shù)為該切片的微血管數(shù)［1］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，多組間比較采用方差分析;計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組RhoC、CD105蛋白表達(dá)比較 胃癌組、癌旁組、正常組 RhoC蛋白陽性率分別為86.1%、60.0%、26.7%，胃癌組、癌旁組分別與正常組比較，P 均 ＜0.01;MVD 分別為 32.63 ±3.79、12.03 ±1.32、10.76 ±1.96，胃癌組與癌旁組、正常組比較，P 均 ＜0.01。

2.2 RhoC、CD105蛋白表達(dá)與胃腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見表1。由表1可知，RhoC蛋白表達(dá)與胃腺癌臨床分期、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，CD105蛋白與胃腺癌細(xì)胞分化程度、臨床分期、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)。

表1 RhoC、CD105蛋白表達(dá)與胃腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 胃腺癌組織中RhoC蛋白與CD105蛋白表達(dá)的關(guān)系 胃腺癌組織中RhoC蛋白陽性表達(dá)組MVD高于 RhoC 蛋白陰性表達(dá)組(t=3.584，P ＜0.05)。

3 討論

胃腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤，其具有高發(fā)病率、高病死率的特點(diǎn)，且腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移嚴(yán)重程度直接關(guān)系到胃腺癌患者預(yù)后質(zhì)量。目前，臨床上關(guān)于胃腺癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移的具體分子機(jī)制尚不明確。近年來，關(guān)于癌癥組織中RhoC表達(dá)及RhoC表達(dá)在癌浸潤、淋巴轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究較多。何娟等［2］發(fā)現(xiàn)，喉癌組織中RhoC表達(dá)水平受腫瘤浸潤程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等影響，認(rèn)為RhoC可能作為喉癌發(fā)展進(jìn)程中的一項重要標(biāo)志物，在喉癌浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起參與作用;其可能機(jī)制為RhoC屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的一種，主要通過對細(xì)胞周期依賴性激酶有效調(diào)控來改變細(xì)胞周期，進(jìn)而達(dá)到調(diào)控細(xì)胞生長、增殖的目的［3，4］。相關(guān)研究［5］表明，RhoC蛋白在眾多組織和細(xì)胞中表達(dá)。趙志華等［6］發(fā)現(xiàn)，食管癌細(xì)胞中 RhoC mRNA、蛋白表達(dá)高于正常食管黏膜及癌旁組織。本研究亦顯示，胃腺癌組織RhoC陽性率高于癌旁及正常胃黏膜組織。

另外研究發(fā)現(xiàn)，RhoC與Rho在調(diào)控細(xì)胞分裂、生長、增殖等作用機(jī)制基本類似，且兩者呈正相關(guān)性。為此可以通過Rho研究反映RhoC表達(dá)。Rho亞家族蛋白(RhoA、B、C、D、E)屬于 Ras超家族 GTP蛋白酶，Rho蛋白通過其下游靶效應(yīng)分子，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的活動，參與調(diào)控細(xì)胞分裂和增殖。Rho在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用，其可能機(jī)制主要包括:①對磷酸化(與細(xì)胞骨架蛋白密切相關(guān))進(jìn)行調(diào)節(jié)，以促進(jìn)肌動蛋白絲、肌球蛋白相互作用，形成收縮性，進(jìn)而讓腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步轉(zhuǎn)移活動;②該物質(zhì)能對細(xì)胞極性產(chǎn)生破壞，減少細(xì)胞的黏附作用，提高細(xì)胞運(yùn)動及重塑(細(xì)胞外基質(zhì))能力，以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤;③增強(qiáng)癌細(xì)胞內(nèi)血管生成因子水平，新生成腫瘤血管，為腫瘤細(xì)胞生長、參與血液循環(huán)提供重要途徑，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移［7，8］。趙增強(qiáng)等［9］通過對比分析正常胃黏膜組織與胃腺癌組織中RhoC表達(dá)，發(fā)現(xiàn)正常胃黏膜組織中低表達(dá)RhoC，而胃腺癌組織中RhoC陽性表達(dá)率高達(dá)62.5%，同時通過多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)RhoC表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胃腺癌分期有關(guān)。這與何娟等［2］報道相似。本研究顯示，RhoC陽性表達(dá)與胃腺癌臨床分期、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

轉(zhuǎn)移和浸潤是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，而腫瘤組織中血管生成是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移浸潤的基本前提。CD105作為一種細(xì)胞膜糖蛋白，是調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子-β受體復(fù)合物的成分之一，其表達(dá)與新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞密切相關(guān)［10，11］。CD105能夠體現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖狀態(tài)，反映腫瘤新生血管的生長及分布，對于腫瘤的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移有重要意義。文獻(xiàn)［12～15］表明，作為血管標(biāo)記物，MVD檢測可以作為惡性腫瘤臨床分期、浸潤程度、療效判斷的客觀指標(biāo)。本文結(jié)果顯示，MVD與胃腺癌細(xì)胞分化程度、臨床分期、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。胃腺癌組織中聯(lián)合檢測RhoC、CD105蛋白可能有助于提高胃腺癌的陽性檢出率。

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