藍(lán)莓莖段組培快繁技術(shù)研究

沙玉芬，王建萍，李公存，顧 亮，蘇佳明

(山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東煙臺(tái) 265500)

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藍(lán)莓莖段組培快繁技術(shù)研究

沙玉芬，王建萍，李公存，顧 亮，蘇佳明*

(山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東煙臺(tái) 265500)

[目的]研究藍(lán)莓莖段組培快繁技術(shù)。 [方法]以北高叢藍(lán)莓品種‘杜克’為試材，春季一年生新梢莖段為材料進(jìn)行組培快繁。[結(jié)果]進(jìn)瓶最佳滅菌時(shí)間為8～10 min，成活率達(dá)75%～88%；最佳增殖培養(yǎng)基為改良WPM+ZT 1.0 mg/L，增殖系數(shù)為12.8，生長(zhǎng)健壯，平均株高4.8 cm；最佳生根培養(yǎng)基為1/2WPM+IBA1.0 mg/L，生根率達(dá)100%，平均根長(zhǎng)2.1 cm；最佳移栽基質(zhì)是草炭土+蛭石，成活率達(dá)92.6%。[結(jié)論]該研究對(duì)藍(lán)莓快速繁育和推廣種植具有一定的意義。

藍(lán)莓；組織培養(yǎng)；莖段

藍(lán)莓(Blueberry)，又名越橘，屬于杜鵑花科烏飯屬多年生落葉或常綠果樹(shù)，呈灌木狀生長(zhǎng)[1]，果實(shí)深藍(lán)色，皮薄，風(fēng)味酸甜可口，具有防止人體細(xì)胞衰老、增強(qiáng)心臟功能、明目及抗癌等獨(dú)特的保健功效[2-3]，被國(guó)際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一[4]。藍(lán)莓的常規(guī)繁育速度較慢，繁殖規(guī)模受插條數(shù)量的限制，在短期內(nèi)不能滿足生產(chǎn)需要，而且常規(guī)手段繁育的苗木在生長(zhǎng)勢(shì)、果實(shí)品質(zhì)等方面與組培苗相比有很多不足之處[5-6]。筆者對(duì)藍(lán)莓的組培快繁進(jìn)行研究，對(duì)藍(lán)莓快速繁育和推廣種植具有一定的意義[7]。

1 材料與方法

1.1 材料及處理以大連大學(xué)引進(jìn)的美國(guó)北高叢藍(lán)莓品種‘杜克’為試材，于4月份取當(dāng)年生無(wú)病蟲(chóng)害生長(zhǎng)健壯的枝條，葉片摘除后，將枝條放入加水的容器中，0～4 ℃下冷藏2～3 d，每天換水。接種前，用洗潔精將枝條洗刷干凈，剪成3～4 cm的莖段，流水沖洗20 min。

1.2 外植體滅菌在超凈工作臺(tái)上將剪好的莖段用75%乙醇浸泡30 s，無(wú)菌水沖洗1次，然后用0.1%的升汞溶液浸泡8～10 min(根據(jù)枝條老嫩程度)，用無(wú)菌水沖洗4～6次，剪去兩端與藥液接觸部分，最后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3 增殖培養(yǎng)外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)20 d后，將帶有兩三片葉子的莖段剪下接種到增殖培養(yǎng)基中。

1.4 生根培養(yǎng)外植體在增殖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)20～30 d，達(dá)到一定數(shù)量后，剪取高2 cm以上的植株接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用液體培養(yǎng)基，不加瓊脂，加入濾紙球固定植株。

1.5 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件藍(lán)莓誘導(dǎo)及增殖的基本培養(yǎng)基均采用改良WPM基本培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基采用1/2WPM，pH 5.2左右，培養(yǎng)條件為溫度(25±2) ℃，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx，光照時(shí)間14 h/d。

1.6 試管苗移栽在生根培養(yǎng)基中生長(zhǎng)30 d左右，試管苗長(zhǎng)出數(shù)條1 cm以上的新根時(shí)，開(kāi)始煉苗，在自然光下不揭瓶蓋煉苗7 d左右，揭開(kāi)瓶蓋，煉苗3 d，每天用小型噴霧器噴水3次以上，保證葉面不失水，3 d以后用清水洗凈苗根部附著的培養(yǎng)基，移栽入營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，放入小拱棚，保證溫度在25 ℃左右，濕度90%以上。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同滅菌時(shí)間對(duì)藍(lán)莓誘導(dǎo)分化的影響由表1可知，春季進(jìn)瓶時(shí)滅菌時(shí)間在8～10 min比較合適，成活率在75%以上；滅菌5min時(shí)全部污染；而滅菌10 min以上時(shí)成活率極低，外植體多數(shù)或全部被殺死；另外，如果枝條很嫩，滅菌10 min時(shí)成活率也不高。

表1 不同滅菌時(shí)間藍(lán)莓誘導(dǎo)分化情況

滅菌時(shí)間∥min接種數(shù)成活數(shù)成活率∥%5400084035881040307512401025154000

2.2 不同激素配比對(duì)藍(lán)莓增殖生長(zhǎng)的影響由表2可知，‘杜克’在2號(hào)培養(yǎng)基上增殖系數(shù)雖然不是最高，為12.8，但生長(zhǎng)情況最好，健壯無(wú)玻璃化，平均株高最高為4.8 cm；在3號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況也較好，增殖系數(shù)為9.7，平均株高3.6 cm；在5號(hào)和8號(hào)培養(yǎng)基上增殖系數(shù)均很高，分別為13.5和14.3，平均株高分別為3.3 cm和4.0 cm，生長(zhǎng)雖然健壯但均出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象；在4號(hào)和7號(hào)培養(yǎng)基上均較瘦弱，增殖系數(shù)不高，株高很低，且均出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象；在1號(hào)培養(yǎng)基上，雖然沒(méi)有玻璃化現(xiàn)象，但生長(zhǎng)瘦弱，增殖系數(shù)不高，為4.3，平均株高也較低，為2.2 cm。

表2 不同激素配比對(duì)藍(lán)莓試管苗增殖的影響

編號(hào)激素濃度∥mg/LZTTDZ增殖系數(shù)生長(zhǎng)情況平均株高cm10．5-4．3瘦弱，無(wú)玻璃化2．221．0-12．8健壯，無(wú)玻璃化4．831．5-9．7健壯，無(wú)玻璃化3．640．50．055．6瘦弱，輕微玻璃化1．951．00．0513．5健壯，輕微玻璃化3．361．50．059．5較健壯，輕微玻璃化2．970．50．14．8瘦弱，明顯玻璃化1．781．00．114．3健壯，明顯玻璃化4．091．50．111．5較健壯，明顯玻璃化3．1

注：培養(yǎng)天數(shù)為40 d。

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)藍(lán)莓生根的影響由表3可知，在3號(hào)培養(yǎng)基上生根率最高，為100%，且平均根長(zhǎng)最長(zhǎng)，為2.1 cm；在4號(hào)培養(yǎng)基上生根率也較高，為90%，平均根長(zhǎng)為1.9 cm；在2號(hào)和5號(hào)培養(yǎng)基上生根率較低，分別為77%和85%，平均根長(zhǎng)較短，均為1.7 cm；在1號(hào)培養(yǎng)基上生根率最低，僅有57%，且根長(zhǎng)也最短，僅有1.1 cm。

表3 不同培養(yǎng)基藍(lán)莓試管苗生根情況

編號(hào)IBA∥mg/L生根率∥%平均根長(zhǎng)∥cm10．5571．120．8771．731．01002．141．2901．951．5851．7

注：接種數(shù)為100，培養(yǎng)天數(shù)為30 d。

2.4 試管苗的移栽由表4可知，當(dāng)基質(zhì)為草炭土+蛭石時(shí)成活率最高，為92.6%；基質(zhì)為草炭土+珍珠巖時(shí)成活率也較高，為85.3%；基質(zhì)為草炭土+細(xì)河沙時(shí)成活率較低，為74%；基質(zhì)只有草炭土?xí)r成活率最低，僅有52.6%，這可能是由于基質(zhì)透氣性差的緣故。

2.5 不同培養(yǎng)基硬度和pH對(duì)藍(lán)莓試管苗生長(zhǎng)的影響采用3種不同硬度的培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化時(shí)，莖段直立插入培養(yǎng)基中，采用軟硬適中的培養(yǎng)基便于芽的誘導(dǎo)分化；增殖培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基稍軟，瓶子傾斜時(shí)培養(yǎng)基會(huì)慢慢下滑，試管苗躺在培養(yǎng)基上，便于吸收營(yíng)養(yǎng)，每個(gè)芽點(diǎn)都能分化出叢生苗；生根采用的是液體培養(yǎng)基，更利于營(yíng)養(yǎng)傳送，用濾紙球固定，不用擔(dān)心苗的直立，移栽洗苗方便取出，不會(huì)弄斷根系。該試驗(yàn)將pH控制在5.2，叢生芽的分化情況良好。

表4 藍(lán)莓試管苗移栽情況

移栽基質(zhì)移栽苗數(shù)∥株成活數(shù)∥株成活率∥%草炭土+珍珠巖15012885．3草炭土+蛭石15013992．6草炭土+細(xì)河沙15011174．0草炭土1507952．6

3 結(jié)論與討論

木本植物組織培養(yǎng)的困難之一是建立無(wú)菌體系，消毒的一個(gè)基本原則是既要?dú)⑺乐参锊牧媳砻娴奈⑸?，同時(shí)盡可能不殺死植物材料。該試驗(yàn)表明，對(duì)于‘杜克’而言，75%乙醇30 s+0.1%升汞浸泡8～10 min滅菌效果最好，這與孫曉梅等[7]的75%乙醇30 s+0.1%升汞浸泡8 min效果最好一致；對(duì)于藍(lán)莓微體繁育而言，玉米素(ZT)是促進(jìn)其生長(zhǎng)分化的主要因素，田新華等[8]認(rèn)為藍(lán)莓的最適增殖培養(yǎng)基是改良WPM+6-BA 1.0 mg/L+ZT 1.0 mg/L，該試驗(yàn)以改良WPM+ZT+TDZ為組合，結(jié)果表明‘杜克’最佳增殖培養(yǎng)基為WPM+ZT 1.0 mg/L，加入TDZ后組培苗易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，這可能是由于組培苗吸收TDZ后導(dǎo)致體內(nèi)激素比例失調(diào)的原因；張鳳生等[1]認(rèn)為藍(lán)莓的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MW+NAA 0.5 mg/L，生根率可達(dá)97%，該試驗(yàn)認(rèn)為1/2WPM+IBA 1.0 mg/L也能很好地誘導(dǎo)生根，生根率達(dá)100%，且根系健壯，移栽易成活；移栽時(shí)采用草炭土+蛭石成活率最高，可見(jiàn)移栽時(shí)必須保證基質(zhì)的透氣性，否則容易爛根，成活率低。

[1] 張鳳生,鹿娜，姜淼，等.藍(lán)莓組織培養(yǎng)與快速繁育[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(3):3-5.

[2] 劉太林.藍(lán)莓組織培養(yǎng)研究進(jìn)展綜述[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),2012，18(5):37-41.

[3] 王新苗,張淑華,索云成,等.矮叢藍(lán)莓莖段組織的培養(yǎng)[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2013,41(1):23-27.

[4] 苑兆和.世界藍(lán)莓生產(chǎn)歷史與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 落葉果樹(shù),2003(1):49-52.

[5] 容祖,郝瑞.漿果學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1996:59-89.

[6] CHANDLER C K,DRAPER A D.Effect on zeatin and 2ip on shoot proliferation of three highbush blueberry clones in vitro[J].Hortscience,1986,21:1065-1066.

[7] 孫曉梅，王新苗，楊宏光，等.矮叢藍(lán)莓‘北極星’啟動(dòng)培養(yǎng)研究[J].北方園藝,2010(1):23-26.

[8] 田新華，邢亞娟，張妍妍.藍(lán)莓組織培養(yǎng)及外部因子對(duì)其生長(zhǎng)的影響[J].黑龍江生態(tài)工程職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009,1(1):19-21.

Research on Rapid Propagation of Stem Segment of the Blueberry

SHA Yu-fen,WANG Jian-ping, LI Gong-cun, SU Jia-ming*et al

(Fruit Tree Branch Department，Yantai Academy of Agricultural Science，Yantai，Shandong 265500)

[Objective] The aim was to study rapid propagation of the stem segment of blueberry. [Method]Using stem segment of newshoots as material in autuam，the tissue culture of Northernhighbush Blueberry ‘Bluecrop’ was studied.[Result]Results indicated that the best sterilization time was 8-10 min，the survival rate reached 75%-88%.The best proliferation medium was improved WPM+ZT1.0 mg/L，the proliferation rate reached 12.8，and the average height was 4.8 cm.The best rooting medium was 1/2WPM+IBA1.0 mg/L，the rooting rate reached 100%，the average length was 2.1 cm.The best transplanting medium was peatsoil mixed with vermiculite，the survival rate reached 92.6%.[Conclusion] The study had certain significance for fast breeding and planting of the blueberry.

Blueberry；Tissue culture；Stem segment

煙臺(tái)市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2014HZ105)。

沙玉芬(1977-)，女，山東煙臺(tái)人，農(nóng)藝師，從事果樹(shù)的組織培養(yǎng)及脫毒技術(shù)研究。*通訊作者，高級(jí)農(nóng)藝師，從事果樹(shù)生物技術(shù)及育種研究。

2015-02-15

S 663.2

A

0517-6611(2015)10-027-02