鹽酸普萘洛爾造模周期對(duì)豚鼠銀屑病模型的影響

伍長(zhǎng)娟，沈 娟

（1.皖南醫(yī)學(xué)院，安徽蕪湖 241002;2.合肥市第一人民醫(yī)院）

銀屑病是一種常見的慢性炎癥性疾病，以角質(zhì)形成細(xì)胞過度增生伴角化不全、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、新生血管形成為其組織病理學(xué)的三項(xiàng)突出改變。銀屑病的病因迄今尚不清楚，目前認(rèn)為主要是多基因遺傳背景下T細(xì)胞失常的免疫性疾病，表皮過度增殖與分化異常和炎癥等疾病現(xiàn)象涉及細(xì)胞和分子水 平的異常調(diào)控[1-2]。缺乏理想的動(dòng)物模型是銀屑病研究面臨的主要問題。β-受體阻斷劑普萘洛爾外用能使豚鼠細(xì)胞cAMP水平下降，導(dǎo)致表皮角化失常和皮層增厚等類似銀屑病的組織病理學(xué)改變，常被用于銀屑病的藥效評(píng)價(jià)[3-7]。但是，關(guān)于鹽酸普萘洛爾造模時(shí)間長(zhǎng)短所引起的豚鼠耳部皮損情況，目前尚無綜合性的報(bào)導(dǎo)。本研究主要考察了鹽酸普萘洛爾造模14d、21d和28d豚鼠耳部的皮損情況，以期為豚鼠銀屑病模型的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品:鹽酸普萘洛爾，湖北拓楚慷元醫(yī)藥化工有限公司，5%鹽酸普萘洛爾乳劑用液狀石蠟、阿拉伯膠和羧甲基纖維素鈉、蒸餾水配制;氯化鈉注射液(批號(hào):2A12092704），青州堯王制藥有限公司;甲醛溶液(批號(hào):20131118），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，含8%-14%的甲醇以防聚合，貯于陰涼干燥處，遠(yuǎn)離火種、熱源。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:24只雄性豚鼠，體重200g±10g，由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)于無毒塑料盒中，普通豚鼠飼料及青菜喂養(yǎng)，自由進(jìn)水，保持室內(nèi)溫度18-22℃，相對(duì)濕度40%-70%，自然光照。飼養(yǎng)7天適應(yīng)環(huán)境后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 24只豚鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組、造模14d組、造模21d組、造模28d組，每組6只。各造模組豚鼠均用棉棒蘸取5%鹽酸普萘洛爾乳劑（約200μl）均勻涂抹于雙耳背面皮膚，早晚各一次，分別涂抹14d、21d和28d。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材 分別于最后一次涂抹后1h處死各組豚鼠，取雙耳給藥部位皮膚，10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片。每只豚鼠耳部標(biāo)本各制作3張切片。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般狀況:包括豚鼠毛發(fā)、神態(tài)、進(jìn)食、大小便等。

1.4.2 HE染色:大鼠耳部標(biāo)本連續(xù)切片，行常規(guī)HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并攝片。每張切片選取10個(gè)高倍視野（×200），用顯微測(cè)量尺測(cè)量表皮厚度，取平均值。

2 結(jié)果

2.1 豚鼠一般狀況 正常對(duì)照組豚鼠精神較好，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)密有光澤，緊貼身體，飲食飲水、大小便正常，雙耳毛發(fā)正常無脫落，局部皮膚無紅腫。造模14d組，豚鼠精神較差，反應(yīng)比較遲鈍，飲食飲水減少，體重減輕。造模21d組，豚鼠反應(yīng)遲鈍加重，皮毛光澤度較暗，易于脫落，耳部涂抹普萘洛爾乳劑處毛發(fā)全部脫落，局部皮膚紅腫，觸之表皮溫度高。造模28d組，豚鼠上述癥狀加重，大部分耳部結(jié)痂，覆有少量白色痂，部分豚鼠耳廓出現(xiàn)糜爛或滲出。

2.2 豚鼠耳部表皮厚度 3個(gè)造模組豚鼠耳部表皮厚度均明顯厚于正常對(duì)照組（P＜0.01）;隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，豚鼠耳部表皮厚度逐漸增加，3個(gè)造模組間兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見附表:

附表 各組豚鼠耳部表皮厚度(±s)

附表 各組豚鼠耳部表皮厚度(±s)

與正常對(duì)照組比較:aP＜0.01;與造模14d組比較:bP＜0.01;與造模21d組比較:cP＜0.01

組別 n 表皮厚度(μm)正常對(duì)照組 6 50.90±1.83造模14d組 6 150.43±2.56a造模21d組 6 178.72±6.66ab造模28d組 6 233.01±4.39abc

2.3 豚鼠耳部皮膚形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化 ①正常對(duì)照組(圖1）:豚鼠耳背皮膚角質(zhì)層較薄，顆粒層約1-3層，棘層約3-5層，基底層為單層柱狀細(xì)胞，真皮、表皮交界較平，真皮內(nèi)散在少數(shù)單核細(xì)胞浸潤(rùn)。②造模14d組(圖2）:耳背皮膚角質(zhì)層略增厚，毛細(xì)血管擴(kuò)張，棘層略肥厚。③造模21d組(圖3）:耳背皮膚角質(zhì)層增厚，真皮乳頭呈杵狀突起上伸，表皮突出，棘層肥厚。④造模28d組(圖4）:皮膚角質(zhì)層增厚，棘細(xì)胞層增厚，真皮乳頭略突起上伸，毛細(xì)血管擴(kuò)張，表皮突出，部分角化不全。

圖1 正常對(duì)照組

圖2 造模14d組

圖3 造模21d組

圖4 造模28d組

3 討論

銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，以青壯年患者為主，病程較長(zhǎng)，易復(fù)發(fā)，甚至終生不愈，給患者的身體和心理帶來極大的痛苦，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。銀屑病在西方國(guó)家的發(fā)病率約為1.5%-2%，據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)資料，我國(guó)銀屑病發(fā)病率為0.123%，并有逐年上升趨勢(shì)，估計(jì)總患病人數(shù)接近500萬人[8]。目前，治療銀屑病的方法很多，但效果并不令人滿意，患者服用藥物的依從性也較差，近期療效尚可，但不能防止復(fù)發(fā)，并且各種療法都有一定的不良反應(yīng)。因此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者都希望能夠研制出低毒、高效的抗銀屑病藥物。

研制抗銀屑病藥物最為關(guān)鍵的是復(fù)制銀屑病動(dòng)物模型，現(xiàn)有的動(dòng)物模型都是基于銀屑病的病理表現(xiàn)復(fù)制的。目前，較理想的銀屑病動(dòng)物模型主要有:自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)型動(dòng)物模型、皮損移植模型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型等，自發(fā)性、皮損移植性、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型在造模時(shí)間、實(shí)驗(yàn)要求、復(fù)制銀屑病病理生理特點(diǎn)等方面，或多或少具有一定的局限性[9]。鹽酸普萘洛爾誘發(fā)的豚鼠耳廓皮膚病變，重復(fù)性好，在某些方面具有與銀屑病患者表皮增殖狀況相似的特征，較為常用。使用鹽酸普萘洛爾涂抹皮膚的方法誘導(dǎo)類似銀屑病的組織學(xué)改變，是利用普萘洛爾可阻斷角質(zhì)形成細(xì)胞β-腎上腺素受體而降低細(xì)胞內(nèi)cAMP水平這一特有的藥理作用,導(dǎo)致動(dòng)物表皮細(xì)胞出現(xiàn)角化過度、角化不全和棘層肥厚等類似銀屑病的組織病理學(xué)改變。

本研究觀察了5%鹽酸普萘洛爾乳劑造模14d、21d和28d豚鼠耳部表皮厚度變化和病理學(xué)變化，結(jié)果顯示，隨著5%鹽酸普萘洛爾乳劑造模時(shí)間的延長(zhǎng)，豚鼠耳部表皮厚度逐漸增加、病理變化逐漸加重，即造模效果為造模28d＞造模21d＞造模14d。在進(jìn)行抗銀屑病藥物的研究中，應(yīng)注意根據(jù)藥物的特點(diǎn)選擇合適的造模周期。

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