基于 《中國藥典》和 《歐洲藥典》的當歸藥材質量標準對比研究

袁宇鵬， 楊玉華， 王蓮萍， 孫 裕

（蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅蘭州730000）

基于 《中國藥典》和 《歐洲藥典》的當歸藥材質量標準對比研究

袁宇鵬， 楊玉華， 王蓮萍， 孫 裕

（蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅蘭州730000）

目的優(yōu)選當歸歐盟注冊的標準方法。方法對比 《中國藥典》2010年版一部和 《歐洲藥典》7.5增補版中當歸質控的實驗方法，對不相同的質控指標進行對比實驗。結果兩部藥典方法均能有效控制當歸質量，但部分方法有所差異。通過實驗，我們認為歐洲藥典針對當歸的薄層色譜和阿魏酸定量測定方法更優(yōu)，而 《中國藥典》針對當歸的水分測定方法更優(yōu)。結論根據(jù)兩部藥典方法的對比，結合兩部藥典的長處，制定我們自己的注冊標準。

當歸；《中國藥典》；《歐洲藥典》；標準研究

中藥是中華民族優(yōu)秀的文化瑰寶，但由于中藥產品存在著處方藥味多，成分復雜、質量控制較為困難、缺少系統(tǒng)的藥效、安全性和臨床試驗數(shù)據(jù)等問題，一直未能按“藥品” 身份進入歐洲市場［1-2］。

為了進一步規(guī)范歐洲的草藥產品，2004年 《歐盟傳統(tǒng)藥品法》頒布，要求中成藥在歐盟成員國進行傳統(tǒng)藥品注冊［3-5］。這一舉措有利于開辟中成藥的新市場，擴大出口，增進世界、尤其是歐洲對中成藥的了解，促進中藥的國際化。中成藥原藥材的質量控制是歐盟傳統(tǒng)草藥注冊所要求的重要內容［6-7］。而 《歐洲藥典》和 《中國藥典》對中藥材質量控制存在一定的差異，所以建立具有中藥特色、歐盟認可的質量控制模式，是推動中藥歐盟注冊實質性步驟。本實驗以當歸藥材為范例，對 《中國藥典》和 《歐洲藥典》的藥材質量標準對比研究，為濃縮當歸丸的歐盟傳統(tǒng)草藥注冊提供依據(jù)［8-10］。

1 材料與試劑

1.1 儀器 XS205型十萬分之一電子天平，AL204型萬分之一電子天平 （梅特勒-托利多精密儀器有限公司）；SK250HP超聲波清洗器 （上海科導超聲儀器有限公司）；ZF-I型三用紫外分析儀 （上海顧村電光儀器廠）；DGG-9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱 （上海森信實驗儀器有限公司）；SHIMADZU Prominence高效液相色譜儀（包括低壓二元梯度泵LC-20AB，柱溫箱CTO-20A，二極管陣列檢測器SPD-M20A，LC Solution工作站）；UPH-I-10T純化水系統(tǒng)（成都超純科技有限公司），HH·S21-Ni型電熱恒溫水浴鍋 （北京華恒萬億儀器有限公司）。

1.2 材料 GF254硅膠板 （青島海洋化工廠）；乙醚，乙醇，正己烷，乙酸乙酯，庚烷，冰醋酸，甲苯，甲醇 （分析純，天津市光復精細化工研究所）；乙腈 （色譜純，天津市光復精細化工研究所）；磷酸 （色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；實驗用水均為超純水（UPH-I-10T純化水系統(tǒng)制?。．敋w對照藥材 （120927-201014），藁苯內酯對照品 （111737-201204），歐前胡素對照品 （110826-201214），蛇床子素對照品 （110822-200407），阿魏酸對照品 （110773-201012）均購自中國食品藥品檢定研究院。當歸藥材選自蘭州佛慈制藥股份有限公司藥源基地2012年所產當歸，經甘肅省中醫(yī)學院中草藥專家及本公司質量檢驗部技術人員鑒定為正品當歸（Angelica sinensis）。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別 《歐洲藥典》和 《中國藥典》在當歸藥材中薄層色譜鑒別存在一定的區(qū)別，薄層板、展開劑以及操作步驟存在很大差異，詳細對比見表1，圖1，圖2。

表1 《中國藥典》和《歐洲藥典》中當歸藥材薄層色譜鑒別對比分析

圖1 365 nm下標準圖譜

圖2 254 nm下標準圖譜

2.1.1 按照 《中國藥典》的薄層色譜鑒別 按照 《中國藥典》2010年版中當歸藥材鑒別進行試驗。當歸供試品在與對照藥材色譜相應的位置上，顯出明顯的熒光斑點。具體結果見圖3。

圖3 當歸藥材與對照藥材TLC圖譜

2.1.2 按照 《歐洲藥典》的薄層色譜鑒別 按照 《歐洲藥典》7.5增補版進行試驗。在365 nm下檢測，供試品當歸在藁本內酯對照品對應位置呈現(xiàn)明顯的藍灰色熒光斑點，蛇床子素對照品位置熒光斑點顏色較淡。在254 nm下檢測，供試品當歸在藁本內酯對照品對應位置呈現(xiàn)較深顏色的斑點，蛇床子素對照品位置能看到顏色較淺的斑點。結果見圖4和圖5。

2.2 水分測定 《歐洲藥典》和 《中國藥典》在當歸藥材中水分測定存在一定區(qū)別，詳細對比見表2。

圖4 對照品及當歸藥材在365 nm下TLC圖譜

圖5 對照品及當歸藥材在254 nm下TLC圖譜

表2 中國藥典和歐洲藥典中當歸藥材水分測定對比分析

2.2.1 試驗步驟

2.2.1.1 按照 《中國藥典》的水分測定 按照 《中國藥典》2010版一部附錄ⅨH第二法進行測定。

2.2.1.2 按照 《歐洲藥典》的水分測定 按照 《歐洲藥典》“2.2.32”項干燥失重檢查法檢測同批當歸水分。

2.2.2 試驗結果 經計算按 《中國藥典》方法測得3批當歸水分分別為10.4%、9.6%和9.8%；而用 《歐洲藥典》方法測得結果分別為10.6%、9.9%和10.3%。這主要是因為當歸中含有揮發(fā)油，烘干法在烘干水分的同時也會損失一部分揮發(fā)油，造成結果偏高。

2.3 成分測定 《歐洲藥典》和 《中國藥典》對當歸藥

表3 當歸藥材中阿魏酸的測定方法對比分析

2.3.1 對照品溶液配置

2.3.1.1 對照品溶液 （A）的配置 精密稱定阿魏酸對照品7.04 mg，至50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含140.8μg的溶液；在精確移取上述液體25mL至100 mL棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，制成每1 mL含35.2 μg的溶液，即得。

2.3.1.2 對照品溶液 （B）的配置 取配置好對照品溶液（A）約2 mL，放入透明進樣瓶中，在波長為254 nm的紫外燈下照射60 min，即得。

2.3.2 供試品溶液的配置 取當歸粉末約0.2 g（過3號篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞，稱定質量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質量。用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 按照 《歐洲藥典》的方法對當歸中阿魏酸進行測定

2.3.3.1 系統(tǒng)適用性 實驗室選用Phenomenex Synergi 4u Hydro-RP 80A色譜柱，參數(shù)為150 mm×2.00 mm，填料粒徑4μm。直接使用歐洲藥典方法，對對照品溶液 （B）進行檢測，檢測系統(tǒng)適用性，結果見圖6，相對應峰表見表4。

圖6 對照品溶液 （B）色譜圖-原比例

表4 圖6中峰信息

由圖6可知，本實驗室HPLC系統(tǒng)若直接使用 《歐洲藥典》方法，阿魏酸保留時間較標準保留時間提前約3 min。故對色譜條件稍作修改，將乙腈-0.085%磷酸溶液的比例由原來的17∶83改為15∶85，結果如圖7，相對應峰表見表5。

圖7 改動后對照品溶液 （B）色譜圖

表5 圖7中峰信息

由圖7可知改變流動相比例后，本實驗室HPLC系統(tǒng)可以滿足歐洲藥典的系統(tǒng)適用性要求。

2.3.3.2 《歐洲藥典》方法實驗結果 在 《歐洲藥典》色譜條件下分別對3批當歸藥材進行檢測，得3批當歸的阿魏酸含有量分別是0.077 5%、0.093 2%和0.095 8%。

2.3.4 《中國藥典》方法實驗結果 實驗室選用Phenomenex Luna 5u C18100A色譜柱，參數(shù)為150 mm×4.60 mm，填料粒徑5μm。體積流量選擇為0.8 mL/min。在此色譜條件下分別對3批當歸藥材進行檢測，理論塔板數(shù)均大于5 000，滿足系統(tǒng)適用性要求。結果得3批當歸的阿魏酸含有量分別是0.077 6%、0.093 4%和0.095 7%。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別 經實驗證明兩部藥典方法均能有效地鑒別當歸。《中國藥典》方法是以當歸藥材為對照；《歐洲藥典》是以3個已知的化學標記成分為參照物。通過對比分析認為 《歐洲藥典》標準更加嚴格，使用更多的對照品，并在兩個波長下掃描。對當歸藥材的品質要求更高，而且給出了較直觀的標準圖譜，方便實驗人員對薄層鑒別圖譜進行判斷。

3.2 水分對比結果 按照 《中國藥典》方法測得3批當歸水分分別為10.4%、9.6%、9.8%，按照 《歐洲藥典》“2.2.32”項干燥失重檢查法測得當歸水分為10.6%，9.9%，10.3%。主要是因為當歸中含有部分揮發(fā)油成分，以烘干法測水分時揮發(fā)油成分也會減少，從而使測得的水分偏高，而使用甲苯法可避免這個問題，得到比較準確的水分數(shù)據(jù)。比較實驗方法，使用甲苯法測水分的 《中國藥典》更為合理、科學，但比較指標評價標準，《歐洲藥典》對當歸水分的要求較 《中國藥典》明顯更為嚴格。

3.3 阿魏酸定量測定方法對比分析研究結果 從兩種實驗方法檢測結果證明，雖然兩部藥典方法在色譜條件上有些不同，且在色譜峰的保留時間、峰面積及峰型上都有不同，但兩種方法得到的阿魏酸含有量一致。由此可得出結論，《中國藥典》和 《歐洲藥典》的方法均可準確的測定當歸中阿魏酸的量。個人認為 《歐洲藥典》的方法更優(yōu)，相比于 《中國藥典》，《歐洲藥典》對阿魏酸定量測定方法要求更為具體，明確規(guī)定了使用的色譜柱的柱長，內徑，填料粒徑及體積流量，從而減少了色譜柱差異造成的不一致性。在系統(tǒng)適用性方面，《歐洲藥典》方法規(guī)定了順式阿魏酸和反式阿魏酸的分離度，并且大致規(guī)定了順式阿魏酸和反式阿魏酸的出峰時間。因為反式阿魏酸暴露在紫外燈下，就會有一部分反式阿魏酸轉化成順式阿魏酸，如果這兩個峰分離度不足，就會對實驗結果造成影響；而按照 《歐洲藥典》規(guī)定的出峰時間，恰好能夠達到合適的分離度，而又可以盡可能的縮短保留時間。如此規(guī)定，可以很大程度上減少不同實驗室不同儀器的不一致性。

4 總結

根據(jù)以上實驗，可以看出雖然兩部藥典在對當歸的一些質控指標及檢測方法上有差異，但都能有效地對當歸的質量進行監(jiān)控。在具體的方法和評價指標上，兩部藥典各有長短。 《中國藥典》在水分測定方面使用的甲苯法較《歐洲藥典》的烘干法更精確，且多了浸出物和揮發(fā)油的質量控制指標；而 《歐洲藥典》對當歸質量的要求更高，對方法的描述也更為具體。結合兩部藥典的長處，制定自己的注冊標準。在兩部藥典描述相同的部分，未作修改繼續(xù)使用；在兩部藥典描述不同的部分，選擇更加合理，更加嚴格的標準。在薄層色譜方面，兩部藥典的方法均使用，更大程度地對當歸藥材進行準確鑒別；水分測定方面，使用了 《中國藥典》的甲苯法測水分的方法，但評價指標使用了更為嚴格的 《歐洲藥典》的指標，這需要我們注冊的當歸藥材有更高的質量；阿魏酸定量測定方面，使用《歐洲藥典》方法，以更加嚴謹?shù)囊蟠_保實驗良好的重現(xiàn)性。

［1］Uptake of the traditional use registration scheme and implementation of the provisions of Directive 2004/24/EC in EU Member［R］.EU：European Medicines Agency，2013.

［2］蘇剛強，李伯剛.歐盟草藥藥品注冊指南［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：20-22.

［3］張中朋.傳統(tǒng)中藥歐盟注冊路徑探析［J］.中國現(xiàn)代中藥，2011，13（8）：53-54.

［4］倪昊翔，孫源源.2004/24/EC指令下中藥出口歐盟面臨的注冊困境及對策［J］.中國中藥雜志，2013，38（9）：1447-1449.

［5］張建武，邱 瓊.突破中藥歐盟注冊障礙的關鍵因素分析［J］.中國中藥雜志，2014，39（15）：2972-2977.

［6］Directive 2001/83/EC of the European parliament and of the council of 6 November 2001 on the community code relating to medicinal products for human use［S］.EU：European Parliament and Council，2001.

［7］Directive 2004/24/EC of the European parliament and of the council［S］.EU：European Parliament and Council，2004.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：124.

［9］European Pharmacopoeia 7.0（Volume 1）［S］.N?rdlingen（Germany）：Druckerei C.H.Beck，2011：51.

［10］European Pharmacopoeia 7.5（supplement）［S］.N?rdlingen（Germany）：Druckerei C.H.Beck，2012：4549-4550.

R921.2

：B

：1001-1528（2015）05-1139-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.050

2014-01-08

國家科技支撐計劃課題（2011BAI05B02）

袁宇鵬 （1988—），男，助理工程師。Tel：13109389193