結(jié)核性胸腔積液中干擾素γ、干擾素α及可溶性程序性死亡配體1的表達(dá)及臨床意義

智日增 劉華生 張哲恩

浙江省舟山醫(yī)院感染科，浙江舟山316004

結(jié)核性胸腔積液中干擾素γ、干擾素α及可溶性程序性死亡配體1的表達(dá)及臨床意義

智日增 劉華生 張哲恩

浙江省舟山醫(yī)院感染科，浙江舟山316004

目的探討結(jié)核性胸腔積液（TPE）中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的表達(dá)及意義。方法選擇2011年1月～2014年 6月間30例TPE、30例惡性胸腔積液患者為研究對象；檢測受試者胸腔積液中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1水平。結(jié)果結(jié)核性胸腔積液組IFN-γ、sPD-L1水平高于惡性胸腔積液組和對照組（P＜0.01），結(jié)核性胸腔積液組IFN-α水平低于惡性胸腔積液組和對照組（P＜0.01）；IFN-α阻斷后TPE中IFN-α的水平明顯低于IFN-α阻斷前，IFN-γ、sPD-L1的水平明顯高于IFN-α阻斷前（P＜0.01）。結(jié)論IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表達(dá)與結(jié)核性胸膜炎的發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)。

結(jié)核性胸腔積液；干擾素γ；干擾素α；可溶性程序性死亡配體1

結(jié)核病是全球高死亡率和高感染率的一種感染性疾病[1]，近年來發(fā)展中國家結(jié)核病的發(fā)病人數(shù)呈上升趨勢[2]。胸腔積液分為滲出液和漏出液，滲出性胸腔積液以結(jié)核性胸腔積液（tuberculosis pleural effusion，TPE）較常見[3-5]，TPE是肺外結(jié)核的另一種表現(xiàn)形式，僅次于淋巴結(jié)結(jié)核[6]，可嚴(yán)重影響患者健康及日常生活，因此對TPE進(jìn)行盡早診治具有重要意義[7-9]。研究顯示[8，9]，干擾素γ（IFN-γ）、干擾素α（IFN-α）及可溶性程序性死亡配體1（sPD-L1）在感染性疾病中可呈異常表達(dá)。本研究通過檢測TPE中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的水平，旨在探討TPE中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年1月～2014年6月期間我院收治的30例TPE患者為研究對象（結(jié)核性胸腔積液組），年齡25～75歲，平均（45±3）歲，男18例，女12例，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（21.79±3.18）kg/m2，平均病程（4±1）年，經(jīng)我院病理科病理確診為TPE，符合TPE的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；選擇同期被我院收治的惡性胸腔積液患者30例為惡性胸腔積液組，年齡36～75歲，平均（49±5）歲，男16例，女14例，BMI為（22.56±3.26）kg/m2，平均病程（5±1）年，經(jīng)我院病理科病理確診，符合惡性胸腔積液的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；另選擇同期我院收治的非結(jié)核性、非惡性胸腔積液患者30例為對照組，年齡25～75歲，平均（47±5）歲，男20例，女10例，BMI為（23.17± 3.52）kg/m2，平均病程（4±1）年，經(jīng)我院病理科病理確診。各組在年齡、性別、BMI、病程方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得倫理委員會審批通過，受試者均知情并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集入院24 h內(nèi)胸穿抽取受試者積液50 mL，肝素抗凝，2000 r/min離心10 min，于-80℃保存待測；常規(guī)分離獲取TPE中單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），調(diào)整細(xì)胞至1×106個(gè)/mL，加終濃度為100 μg/mL的植物血球凝集素，37℃孵箱（5%CO2）中培養(yǎng)；PBMCs采用終濃度為10 μg/mL的小鼠抗人IFN-α單克隆抗體（IFN-α阻斷劑）處理6 h后，收集上清，于-20℃保存待測。

1.2.2 標(biāo)本檢測采用雙抗體夾心ELISA法檢測所有受試者胸腔積液中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1含量，試劑盒購自于上海華大科技有限公司；上述檢測均嚴(yán)格按照說明書操作[1]。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)受試者胸腔積液中IFN-γ、IFN-α及sPDL1水平，并對TPE中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的表達(dá)與年齡、病程、BMI進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，采用Pearson檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比較

采用ELISA法檢測三組IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，檢測結(jié)果顯示，結(jié)核性胸腔積液組IFN-γ、sPD-L1水平高于惡性胸腔積液組和對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01），結(jié)核性胸腔積液組IFN-α水平低于惡性胸腔積液組和對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），惡性胸腔積液組IFN-γ、sPD-L1水平高于對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），惡性胸腔積液組IFN-α水平低于對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

2.2 結(jié)核性胸腔積液組中各指標(biāo)的表達(dá)與年齡、病程、BMI的相關(guān)性

對結(jié)核性胸腔積液組中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表達(dá)與年齡、病程、BMI等因素進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，結(jié)核性胸腔積液組中IFN-γ、sPD-L1的表達(dá)之間呈正相關(guān)（P＜0.05），IFN-γ、sPD-L1的表達(dá)與IFN-α的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，見表2。

表1 三組IFN-γ、IFN-α、sPD-L1比較

表1 三組IFN-γ、IFN-α、sPD-L1比較

組別nIFN-γIFN-αsPD-L1結(jié)核性胸腔積液組惡性胸腔積液組對照組F值P值30 30 30 1261.27±32.59 338.56±28.15 18.92±5.78 58.7261 0.0000 121.91±20.87 176.48±21.69 251.69±25.78 27.2619 0.0000 4205.29±121.72 1698.71±109.62 998.26±97.58 70.0982 0.0000

表2 結(jié)核性胸腔積液組中各指標(biāo)的表達(dá)與年齡、病程、BMI的相關(guān)性

2.3 IFN-α阻斷前、后TPE培養(yǎng)細(xì)胞上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比較

IFN-α阻斷前、后結(jié)核性胸腔積液組中PBMCs上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的水平存在顯著差異（P＜0.01）；IFN-α阻斷后結(jié)核性胸腔積液組中IFN-α的水平明顯低于IFN-α阻斷前，IFN-γ、sPD-L1的水平明顯高于IFN-α阻斷前，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表3。

表3 IFN-α阻斷前、后TPE PBMCs上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比較

表3 IFN-α阻斷前、后TPE PBMCs上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比較

注：與IFN-α阻斷前比較，*P＜0.01

阻斷前后nIFN-γIFN-αsPD-L1 IFN-α阻斷前IFN-α阻斷后30 30 t值P值1261.27±32.59 1812.56±36.72*30.9258 0.0000 121.91±20.87 105.67±16.71*9.6782 0.0000 4205.29±121.72 4879.58±137.21*22.8127 0.0000

3 討論

TPE確診的依據(jù)是在患者的痰液中、胸膜活檢標(biāo)本以及積液中檢測出結(jié)核分枝桿菌，同時(shí)結(jié)合其他檢測方法亦有助于TPE的診斷[10]。目前臨床檢測TPE的方法較多，但各種診斷方法均存在一定的不足，因此探尋一種理想的診斷方法對TPE的診治具有重要意義[11-15]。目前有關(guān)IFN-α、sPD-L1在中國結(jié)核性胸膜炎人群中表達(dá)情況的相關(guān)研究較少，因此本研究重點(diǎn)探討IFN-α、sPD-L1在結(jié)核性胸膜炎患者TPE中的表達(dá)及其臨床意義。

TPE能夠以原發(fā)病變和繼發(fā)病變兩種形式存在，其主要的發(fā)病機(jī)制是肺組織靠近胸膜下的干酪樣壞死組織潰破而進(jìn)入胸膜腔間隙內(nèi)導(dǎo)致胸腔積液發(fā)生，進(jìn)入胸膜腔的分枝桿菌抗原引起主要是由CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)[16]。由其產(chǎn)生的各種細(xì)胞因子便會充當(dāng)炎性介質(zhì)，在循環(huán)中的各種細(xì)胞因子（主要是淋巴細(xì)胞），到發(fā)生病變且向組織間隙侵潤，而胸腔內(nèi)的積液多含淋巴細(xì)胞成分，從而形成胸腔內(nèi)富含淋巴細(xì)胞的滲出液[17]。本研究中TPE中IFN-γ出現(xiàn)高表達(dá)，其表達(dá)水平高于惡性胸腔積液和對照組，與既往文獻(xiàn)[18]報(bào)道一致。TPE中IFN-γ水平出現(xiàn)異常升高，推測與下述機(jī)制有關(guān)：Th1型細(xì)胞介質(zhì)可將巨噬細(xì)胞激活，進(jìn)而啟動結(jié)核分枝桿菌的殺滅過程，其途徑之一是Th1型細(xì)胞免疫可分泌IFN-γ，對結(jié)核分枝桿菌的生長起到抑制作用[18]。研究[19]發(fā)現(xiàn)，TPE中IFN-α的表達(dá)對IFN-γ的分泌起抑制作用，IFN-α可阻斷IFN-γ的表達(dá)和分泌。本研究亦進(jìn)一步證實(shí)了這一觀點(diǎn)。本研究顯示，TPE中IFN-α呈低表達(dá)，其表達(dá)水平低于惡性胸腔積液和對照組。而相關(guān)性分析結(jié)果亦顯示，TPE中IFN-α的表達(dá)與IFN-γ的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與既往研究[19]報(bào)道一致。

本研究亦重點(diǎn)探討了TPE中sPD-L1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，TPE中sPD-L1的表達(dá)水平高于惡性胸腔積液和對照組，與文獻(xiàn)[19，20]報(bào)道一致。TPE中sPDL1出現(xiàn)高表達(dá)，表明sPD-L1的分泌可能參與了結(jié)核性胸膜炎的發(fā)病及進(jìn)展，其可能機(jī)制為：IFN-γ可在干擾素調(diào)節(jié)因子1的介導(dǎo)下誘導(dǎo)細(xì)胞sPD-L1的表達(dá)，而sPD-L1的表達(dá)與T細(xì)胞表面PD-1受體結(jié)合可對T細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行負(fù)性調(diào)控[19，20]。而本研究中相關(guān)性分析結(jié)果亦顯示，IFN-γ的表達(dá)與sPD-L1的表達(dá)呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了IFN-γ對sPD-L1表達(dá)的調(diào)控作用，IFN-γ和sPD-L1共同參與了結(jié)核性胸膜炎的免疫調(diào)控過程，IFN-γ參與免疫應(yīng)答的途徑之一是上調(diào)sPD-L1的表達(dá)進(jìn)而起到免疫調(diào)控的作用[19，20]。有文獻(xiàn)[20]報(bào)道，肺癌患者體內(nèi)sPD-L1水平可出現(xiàn)異常升高，且sPD-L1的表達(dá)與肺癌的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。本研究亦顯示，惡性胸腔積液中sPD-L1的表達(dá)強(qiáng)度高于對照組，與既往研究[20]結(jié)果一致。提示sPD-L1的表達(dá)可能亦參與了惡性腫瘤的免疫調(diào)控過程。

本研究采用IFN-α阻斷劑對IFN-α的表達(dá)進(jìn)行阻斷，并檢測了IFN-α阻斷前及阻斷后TPE培養(yǎng)細(xì)胞上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表達(dá)水平，檢測結(jié)果顯示，IFN-α阻斷后TPE中IFN-α的水平明顯低于IFN-α阻斷前，IFN-γ、sPD-L1水平明顯高于IFN-α阻斷前，即IFN-α的表達(dá)明顯受到抑制，而IFN-γ、sPD-L1的表達(dá)則上調(diào)。本研究結(jié)果表明，可對結(jié)核性胸膜炎患者體內(nèi)IFN-α進(jìn)行靶向調(diào)控，可以調(diào)控患者體內(nèi)的免疫調(diào)控方向，抑制結(jié)核性胸膜炎患者的負(fù)性免疫應(yīng)答，進(jìn)而提高患者免疫應(yīng)答水平。

本研究不足之處在于未對TPE中IL-4等Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，因此尚無法了解Th2型細(xì)胞因子在結(jié)核性胸膜炎發(fā)病及進(jìn)展中的作用以及IFN-α、sPD-L1的表達(dá)對Th2型細(xì)胞因子的調(diào)控影響，因此本研究組后期打算對結(jié)核性胸膜炎患者體內(nèi)免疫調(diào)控機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，TPE中IFN-γ、sPD-L1呈高表達(dá)，IFN-α呈低表達(dá)，IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表達(dá)與結(jié)核性胸膜炎的發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)。

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Expression and its clinical significance of interferon γ,interferon α and soluble apoptosis ligand 1 in tuberculous pleural effusion

ZHI RizengLIU HuashengZHANG Zheen
Department of Infection,Zhoushan Hospital in Zhejiang Province,Zhoushan316004,China

ObjectiveTo study expression and its clinical significance of interferon γ,interferon α and soluble apoptosis ligand 1 in tuberculous pleural effusion.MethodsFrom January 2011 to June 2014,30 cases of patients with TPE and 30 cases malignant pleural effusion were selected as the research objects.Pleural effusion IFN-γ,interferon α and sPD-L1 level were tested.Results IFN-γ,the sPD-L1 level in TPE group were higher than that of malignant pleural effusion group and the control group(P＜0.01),the interferon α level in TPE was lower than that of malignant pleural effusion group and the control group(P＜0.01),malignant pleural effusion group’s IFN-gamma,the sPD-L1 levels were higher than that in the control group(P＜0.01),and in malignant pleural effusion group interferon α level was lower than that in the control group(P＜0.01);Interferon α level in TPE after being blocked was obviously lower than that before interferon α blocking,and the level of IFN-γ,the sPD-L1 were obviously higher than that of interferon α before the block(P＜0.01).Conclusion IFN-γ,interferon α,sPD-L1 expression are closely related with the incidence of tuberculous pleurisy and development.

Tuberculous pleural effusion;Interferon γ;Interferon α;Soluble apoptosis ligand 1

R521；R73

A

1673-9701（2015）18-0007-03

2015-03-18）