不同產地何首烏藥材的質量分析

李帥鋒鄭傳柱張 麗蘭才武賀定翔丁安偉

（1.南京中醫(yī)藥大學江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇南京210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州凱里556000）

不同產地何首烏藥材的質量分析

李帥鋒1鄭傳柱1張 麗1蘭才武2賀定翔2丁安偉1

（1.南京中醫(yī)藥大學江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇南京210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州凱里556000）

目的：研究不同產地何首烏藥材質量，為何首烏藥材適宜產地的確立提供科學依據。方法：以何首烏主要含有的二苯乙烯苷和蒽醌類成分為指標，通過HCLP法進行含量測定并對測定結果運用matlab進行相關性及聚類分析，研究產地差異對何首烏藥材質量的影響。結果：不同產地對何首烏各有效成分的含量影響較大，相關性分析表明不同產地何首烏藥材中二苯乙烯苷與結合蒽醌類成分呈顯著正相關性。聚類分析表明云南、貴州產何首烏質量較優(yōu)。結論：不同產地何首烏有效成分的含量差異較大，故有必要建立不同地域藥材質量標準，以確保何首烏臨床合理、安全的用藥。

何首烏 產地 高效液相色譜 二苯乙烯 蒽醌

何首烏（Polygoni Multiflori Radix，PMR）始載于《開寶本草》，為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的干燥塊根[1]，何首烏分布范圍較廣，主產于黃河以南、長江南北，如貴州、云南、廣東、四川、湖南、河南等省[2]，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便之功效，用于瘡癰、瘰癘、風疹瘙癢、久瘧體虛、腸燥便秘等癥[3]。研究表明，何首烏中二苯乙烯苷具有保護神經、改善記憶、保肝、抗氧化等作用[4-6]。何首烏中蒽醌類成分（主要包括大黃素、大黃素甲醚等）多具有抗菌、消炎、瀉下、抗氧化等生物活性[7-8]，目前認為此兩者是何首烏解毒、消癰、潤腸通便的主要物質基礎，且結合蒽醌瀉下作用強于游離蒽醌[9]。作為目前何首烏質量控制的主要成分，2010年版《中國藥典》中對上述兩類成分均有含量測定要求。雖然有文獻研究不同產地何首烏藥材質量的差異，但是存在樣品來源少，指標性成分少等問題[10-11]。因此，本研究在廣泛收集樣品的基礎上，對18批不同產地何首烏進行質量評價，并運用matlab對測定結果進行相關性、聚類分析，以期為何首烏產地的優(yōu)選提供依據。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀 （配 Waters 2998檢測器，Empower色譜工作站）；FA1104N電子天平 （上海精密科學儀器有限公司）；分析天平（SARTORIUS AG；BP211D；d=0.01mg）；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；乙腈（色譜純，購自德國 Merck公司）；其他試劑均為分析純 （國藥集團化學試劑有限公司）。

二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚對照品購自成都瑞芬思生物科技有限公司（批號:F-022-130512、D-029-130401、D-004-130315，純度均大于98%）。何首烏樣品由貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司提供，產地見表1，經南京中醫(yī)藥大學段金廒教授鑒定為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥塊根。潤濕切厚片，置于恒溫干燥箱中50℃，16h烘干，粉碎，過四號篩，備用。

表1 何首烏樣品來源

2 方法與結果

2.1 二苯乙烯苷含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1mL含0.186mg的溶液，即得。

2.1.2 樣品測定 取不同產地的何首烏樣品粉末，按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定二苯乙烯苷項下的方法制備供試品溶液[3]，每個樣品平行2份，并按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定二苯乙烯苷項下的色譜條件進行測定，每份平行測定2次，計算各樣品中二苯乙烯苷的含量[3]，色譜圖見圖1，結果見表2。

2.2 結合蒽醌含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 取大黃素、大黃素甲醚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含54.2μg、18.8μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品測定 取不同產地的何首烏樣品粉末，按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定結合蒽醌項下的方法制備供試品溶液，每個樣品平行2份，并按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定方法結合蒽醌項下的色譜條件進行測定，每份平行測定2次，計算各樣品中結合蒽醌的含量（結合蒽醌含量=總蒽醌-游離蒽醌）[3]，色譜圖見圖2，結果見表2。

2.3 相關性及主要成分分析 采用Matlab R2014a對18批不同產地何首烏樣品中二苯乙烯苷，結合蒽醌、游離蒽醌進行兩兩相關性分析。結果見表3，提示何首烏中二苯乙烯苷和結合蒽醌呈顯著正相關。

為了比較不同產地何首烏之間的差異，以何首烏中二苯乙烯苷和結合蒽醌類成分含量為指標，采用Matlab R2014a歐式距離對18份樣品進行聚類分析。結果見圖3。

圖1 二苯乙烯苷對照品（A）和何首烏樣品（B）HPLC圖

圖2 對照品（A）和何首烏樣品（B）HPLC圖（1-大黃素，2-大黃素甲醚）

表2 不同產地何首烏樣品測定結果

表3 何首烏中主要化學成分相關性分析

圖3 不同產地何首烏二苯乙烯苷結合蒽醌類聚類分析圖

3 討論

本實驗表明，不同產地的何首烏樣品中二苯乙烯苷的含量差異較大，但均達到藥典要求，其中貴州、云南永勝縣樣品中含量較高；不同產地何首烏樣品中結合蒽醌含量同樣差異較大，其中湖南、廣西、湖北三地樣品含量低于藥典要求。

由表2可以看出，樣品3、4、5、6、8、9、10、15即貴州余慶、從江、榕江、都勻市和湖南省通道縣、湖南省江華縣、廣西壯族自治區(qū)河池市、四川省阿壩州生產的何首烏中游離蒽醌含量大于結合蒽醌含量；同時由相關性分析可以得出不同產地的樣品中結合蒽醌類成分與二苯乙烯苷含量具有顯著正相關性，由于游離蒽醌具有抗菌、消炎、抗氧化等生物活性[7-8]，故僅僅選取二苯乙烯苷和結合蒽醌呈顯著正相關的一類成分不足以來評價何首烏質量，可考慮把何首烏藥材中游離蒽醌含量作為評價何首烏質量的一個標準。

由圖3不同產地何首烏中二苯乙烯苷蒽醌類聚類分析結果可以看出，何首烏可以分為三類:云南省永勝縣、貴州省甕安縣、貴州省普安縣出產的為一類；貴州省凱里市、貴州省威寧縣、貴州省余慶縣、四川省北川縣、四川省阿壩州出產者為第二類；其余產地出產者為第三類。

綜上，產地對何首烏藥材的質量影響較大，不同產地的何首烏有效成分含量存在較大差異，綜合其中兩類成分的含量以及聚類分析結果可以看出云南、貴州兩地的何首烏質量較優(yōu)，符合何首烏野生資源的道地區(qū)域分布[12]。由于產地對何首烏藥材的質量影響較大，故有必要建立不同地域的何首烏的質量標準，以確保合理、安全用藥。

[1] 岳清萍.何首烏與白首烏的鑒別.江蘇中醫(yī)藥，2004，25（6）：51

[2] 陳亞，江濱，曾元兒，等.基于地理信息系統(tǒng)的何首烏地理分布及分布區(qū)的生境特征研究.中國藥房，2011，22（39）：3726

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：164

[4] 鄭麗君，周芝文，楊杰.二苯乙烯苷對腦缺血再灌注大鼠TrkA及Bcl-2表達的影響.國際神經病學神經外科學雜志，2013，40（5-6）：412

[5] 張?zhí)m，邢穎，趙玲，等.不同時程APP轉基因小鼠學習記憶改變及參烏膠囊、二苯乙烯苷的干預作用.中國行為醫(yī)學科學，2006，15（3）：193

[6] 龍石銀，張彩平，喬新惠，等.二苯乙烯苷對氧化誘導內皮細胞凋亡及Caspase-3和PARP表達的影響.生物化學與生物物理進展，2011，38（11）：1052

[7] 劉振麗，宋志前，王超，等.何首烏炮制過程中結合型蒽醌含量與瀉下作用變化的相關性分析.現代化中藥制劑發(fā)展與中藥藥理學研究交流會論文集，2009：192

[8] 賈振寶.決明子中蒽醌化合物組成和功能的研究.無錫：江南大學，2006

[9] 羅瑞芝，賈偉，趙利斌，等.何首烏研究進展.中草藥，2005，36（7）：1097

[10] 蔡麗芬，鐘國躍，張倩，等.不同產地與市場生何首烏和制何首烏的質量評價研究.中藥新藥與臨床藥理，2011，22（2）：204

[11] 侯明月，李瑋，王建科，等.不同產地加工方法對何首烏中二苯乙烯苷含量的影響.山地農業(yè)生物學報，2014，33（6）：90

[12] 陳亞.何首烏質量評價及產地適宜區(qū)劃研究.廣州：廣州中醫(yī)藥大學，2013

R282.71

A

1672-397X（2015）08-0069-03

李帥鋒（1988—），男，碩士研究生，研究方向：中藥炮制與質量控制。

丁安偉，碩士，教授，博士研究生導師。awding105@163.com

2015-04-07

編輯：吳 寧

國家“十二五”科技支撐計劃項目（2011BAI13B04）；貴州省中藥現代化專項（黔科合中藥字[2013]5059號）；江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心重點項目（ZDXM-1-3）