紫薇花的抗氧化活性研究

孔祥密，崔雪靖，常美芳，康文藝

河南大學(xué)中藥研究所，開封 475004

紫薇(Lagerstroemia indica L.)為千屈菜科紫薇屬落葉灌木或小喬木，廣泛分布于我國華南、華中、華東、華北和西南諸?。?］。紫薇的葉、花、根、果實(shí)、枝和皮均有藥用價(jià)值［2］。其根、皮、葉可入藥，具有清熱解毒、活血止血的功效［3］。紫薇屬化學(xué)成分主要有鞣質(zhì)類、鞣花酸類、萜類、生物堿類、黃酮類、木脂素類、香豆素及蒽醌等［4］。目前，對紫薇的研究多集中于栽培管理、生理、藥用方面［5，6］，陳林等［7］采用DPPH 和FRAP 方法對大葉紫薇葉的提取物進(jìn)行了抗氧化性能的研究，發(fā)現(xiàn)大葉紫薇葉甲醇提取物在豬肉中具有明顯的抗脂質(zhì)氧化和防腐保鮮的作用。

為了進(jìn)一步豐富紫薇的抗氧化活性研究，筆者采用清除二苯代苦味?；?DPPH)自由基和［2，2＇-連氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨鹽］(ABTS)自由基方法及鐵離子還原/抗氧化力測定(FRAP)法對同月份采摘的紅花紫薇和銀薇的抗氧化活性進(jìn)行了綜合考察，為進(jìn)一步開發(fā)和利用紫薇提供了理論基礎(chǔ)。

1 儀器、材料和試劑

1.1 主要儀器

Multiskan MK3 酶標(biāo)儀(美國Thermo Electron 公司);UV-2000 型紫外可見分光光度計(jì)(上海尤尼可儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化公司);電子天平(美國Mettler-Toledo 儀器有限公司);CS -H1 型混合器(北京博勵(lì)陽科技公司)。

1.2 材料

銀薇和紅花紫薇于2012 年7 月采自河南大學(xué)藥用植物園，經(jīng)河南大學(xué)中藥研究所生藥教研室李昌勤教授鑒定為千屈菜科紫薇屬植物紫薇(Lagerstroemia indica L.)和銀薇(Lagerstroemia indica Linn.f.alba(Nichols.)Rehd)，標(biāo)本存于河南大學(xué)中藥研究所。

1.3 試劑

DPPH(日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社);［2，2＇-連氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨鹽］(ABTS，美國Fluka 公司);Fe3+-三吡啶三啞嗪(tripyridyl-triazine，TPTZ;比利時(shí)Acrosorganics 公司);6-羥基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸(Trolox，美國Aldrich 公司);二丁基羥基甲苯(BHT，比利時(shí)Acros organics 公司);其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 活性成分的提取

自然干燥的紫薇花粉碎，70%乙醇浸泡，加熱回流2 次，每次1 h，合并、過濾、濃縮得紫薇花70%乙醇總浸膏，提取物分散于水中，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進(jìn)行萃取得各部位浸膏。

2.2 抗氧化活性的篩選

2.2.1 DPPH 方法

按照文獻(xiàn)［8］，在515 nm 處測定樣品及陽性對照的吸光度。每份樣品平行操作3 次，取平均值。計(jì)算清除率及半數(shù)抑制率IC50值。

上式中，Acontrol為DPPH 本身在測定波長的吸收度，Asample為樣品對DPPH 作用后的吸收度數(shù)值(除去樣品自身吸收)。

2.2.2 ABTS 方法

按照文獻(xiàn)［9］，在734 nm 處測定樣品及陽性對照的吸光度。每份樣品平行操作3 次，取平均值。計(jì)算清除率及半數(shù)抑制率IC50值。按照以下公式計(jì)算清除率:

式中Acontrol為ABTS 自由基本身在測定波長的吸收度，Asample為樣品對ABTS 自由基作用后的吸收度數(shù)值(除去樣品自身吸收)。

2.2.3 FRAP 法

按照文獻(xiàn)［10］的方法配制TPTZ 工作液，在593 nm 處測定樣品及陽性對照的吸光度，結(jié)果以Trolox當(dāng)量表示。當(dāng)C(Trolox)=25～400 mol/L 時(shí)，有良好的線性關(guān)系(r=0.9996)。

3 結(jié)果與分析

3.1 對DPPH 自由基的清除作用

表1 紫薇花不同提取物的抗氧化活性Table 1 Antioxidant activity of different extracts of L.indica Flower

圖1 紫薇花各部位抗氧化質(zhì)量濃度對ABTS 自由基的影響Fig.1 Scavenging activities of different concentrations of L.indica flowers on ABTS free radical

3.2 對ABTS 自由基的清除作用

表1 顯示，銀薇乙酸乙酯部位清除ABTS 自由基的能力(IC50=1.8 μg/mL)最強(qiáng)，強(qiáng)于陽性對照BHT(IC50=2.3 μg/mL)。紫薇花不同提取部位對ABTS 自由基的清除能力大小順序?yàn)?銀薇乙酸乙酯部位＞BHT ＞銀薇70%乙醇總浸膏＞紅花紫薇乙酸乙酯部位＞紅花紫薇70%乙醇總浸膏＞銀薇正丁醇部位＞紅花紫薇正丁醇部位＞紅花紫薇石油醚部位＞銀薇石油醚部位。

圖1 顯示，在實(shí)驗(yàn)的濃度范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度在5.59 μg/mL 時(shí)，紫薇紅花石油醚部位、正丁醇部位、70%乙醇總浸膏和銀薇正丁醇部位對ABTS 自由基的清除率都較低分別為15.93%、21.21%、65.42%和54.69%。隨著其質(zhì)量濃度的增加，清除率也增大。當(dāng)質(zhì)量濃度為47.62 μg/mL 時(shí)，紅花紫薇石油醚部位、正丁醇部位、70%乙醇總浸膏和銀薇正丁醇部位對ABTS 自由基的清除率分別增加到93.95%、98.5%、99.03%和98.58%。說明紫薇花提取物清除ABTS 自由基的能力與其質(zhì)量濃度呈正量效關(guān)系，即隨著提取物用量的增加，對ABTS 自由基的清除率也增大。當(dāng)質(zhì)量濃度＞47.62 μg/mL 時(shí)，提取物對ABTS 自由基的清除率幾乎不變，說明抗氧化作用已接近飽和，再增加提取物的用量，清除率變化不大。

3.3 還原Fe3+的能力

表1 顯示，在紫薇花提取物中，銀薇乙酸乙酯部位和70%乙醇總浸膏還原Fe3+的能力最強(qiáng)(TEAC分別為2664.7 和2414.95 μmol/g)，強(qiáng)于陽性對照BHT(TEAC 為1532.7 μmol/g)。紫薇花提取物及陽性對照還原Fe3+能力的順序?yàn)?銀薇乙酸乙酯部位＞銀薇70%乙醇總浸膏＞BHT ＞紅花紫薇乙酸乙酯部位＞紅花紫薇70%乙醇總浸膏＞紅花紫薇正丁醇部位＞銀薇正丁醇部位＞紅花紫薇石油醚部位＞銀薇石油醚部位。

4 結(jié)論

本文采用DPPH、ABTS 和FRAP 3 種方法評價(jià)同月份紅花紫薇和銀薇的抗氧化活性，結(jié)果表明，銀薇總抗氧化活性好于紅花紫薇，其中，銀薇乙酸乙酯部位的抗氧化活性最強(qiáng)(IC50分別為7.4 和1.8 μg/mL，TEAC 為2664.7 μmol/g)，遠(yuǎn)強(qiáng)于陽性對照BHT。紫薇花的乙酸乙酯部位抗氧化活性好于其它部位，可以作為天然抗氧化劑進(jìn)行深入研究開發(fā)。

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