任峻青 鄭洪
(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科,貴州 遵義563003)
近年來發(fā)現(xiàn)孕激素膜受體1(PGRMC1)是一種新型膜激素受體,廣泛存在于細(xì)胞膜、微粒體及突觸膜上。PGRMC1是作為一種接頭蛋白并參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,與腫瘤細(xì)胞增殖,侵襲密切相關(guān)。PGRMC1在乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌和肺癌等多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織系中高表達(dá),表明PGRMC1促進(jìn)腫瘤的生存和發(fā)展 。目前關(guān)于PGRMC1在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中作用少有報(bào)道,因此,本文探討PGRMC1表達(dá)水平和卵巢癌分期、分級的相關(guān)性,為卵巢癌的治療提供新的治療靶點(diǎn)。現(xiàn)報(bào)告如下。
1.1 臨床資料 采集遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2011-2013年卵巢漿液性囊腺癌石蠟標(biāo)本40例,10%甲醛固定,石蠟包埋。年齡28~69歲,平均46.7歲,全部患者術(shù)前未化療,術(shù)后予以化療,具有完整的臨床病理資料。年齡 <50歲18例,≥50歲22例;腫瘤大小<5cm 11例,≥5cm 29例;病理分級:Ⅰ~Ⅱ期13例,Ⅲ期27例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的10例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的30例。另選擇正常輸卵管傘端上皮10例(來自尸檢,病理證實(shí)輸卵管上皮組織無異常者,年齡28~46歲,平均38.9歲)為對照組,漿液性囊腺瘤10例(年齡23~45歲,平均31.5歲),交界性腫瘤10例(年齡32~62歲,平均47.5歲)。
1.2 試劑 兔抗人PGRMC1一抗購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,抗體工作濃度1∶200,EnVision試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。
1.3 PGRMC1的免疫組化定位 每例石蠟標(biāo)本脫蠟,水化;用3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。在pH 9.0的EDTA緩沖液中微波修復(fù)抗原后,加入已稀釋的一抗PGRMC1(1∶200)4℃孵育過夜;加入生物素標(biāo)記的二抗,滴加DAB顯色劑顯色,蘇木素復(fù)染核,脫水、透明、封片。以PBS緩沖液代替一抗作空白對照,正常腎臟組織為陽性對照。
1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞質(zhì)染成淡黃色至棕黃色為陽性標(biāo)志,將陽性細(xì)胞數(shù)和顯色強(qiáng)度分為3級:弱陽性(+),陽性細(xì)胞數(shù)<10%,顯色強(qiáng)度為淡黃色或僅個(gè)別細(xì)胞為黃至棕黃色;強(qiáng)陽性(+++),陽性細(xì)胞數(shù)>60%,多數(shù)細(xì)胞為黃至棕黃色;中度陽性(++)陽性細(xì)胞數(shù)及強(qiáng)度介于前兩者之間。
1.5 圖像分析 每張切片應(yīng)用美國 MediaCybemetics公司生產(chǎn)的Image-ProPlus圖像分析軟件(IPP6.0)進(jìn)行圖像分析平均光密度值(MOD)。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,PGRMC1陽性表達(dá)率和卵巢癌臨床病理學(xué)計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。
2.1 PGRMC1在卵巢癌中的陽性表達(dá)率 對照組10例,PGRMC1陽性表達(dá)率20%;良性組10例,PGRMC1陽性表達(dá)率30%,F(xiàn)=12.370,P=0.006;交界性組10例,PGRMC1陽性表達(dá)率50%;惡性組40例,PGRMC1陽性表達(dá)率72.5%。各組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陽性部位主要以癌細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色。見圖1。
2.2 PGRMC1在實(shí)驗(yàn)各組的陽性表達(dá)量 對照組10例,MOD(0.0 180±0.00 789);良性組10例,MOD(0.0 210±0.00 738),F(xiàn)=14.648,P=0.000;交界性組10例,MOD(0.0 320±0.0 103);惡性組40例,MOD(0.0 470±0.01 870)。良性組與對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);交界性組與良性組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);惡性組分別與對照組、良性組、交界性組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
圖1 PGRMC1在各組中的表達(dá)(×400)
2.3 PGRMC1的表達(dá)與卵巢癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 PGRMC1的表達(dá)與卵巢癌腫瘤大?。≒=0.02)、病理分級(P=0.011)密切相關(guān),與年齡(P=0.498)和臨床分期(P=0.4)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(P=0.838)無關(guān)。見表1。
表1 PGRMC1在卵巢癌中的表達(dá)及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系 (n=40)
PGRMC1在多種腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中高表 達(dá)[1-2]。 本 研 究 表 明,卵 巢 良 性 腫 瘤 組 織 中PGRMC1的表達(dá)水平相對于正常對照組來說增高不明顯(P>0.05),且交界性組相對于良性組增高不明顯(P>0.05),惡性組與正常組、良性組、交界組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著惡性程度的增加,PGRMC1的陽性表達(dá)量顯著增多,與上述結(jié)果基本一致。可以推測PGRMC1在卵巢癌中過度表達(dá)。
Peluso等[3]研究顯示PGRMC1/Hpr6.6跨膜區(qū)的C末端參與孕激素抗正常顆粒細(xì)胞凋亡的調(diào)控,而PGRMC1與纖溶酶原激活物抑制劑RNA結(jié)合蛋白1(PAIRBP1)結(jié)合位點(diǎn)也在其C末端的70~130aa的位置,敲除PGRMC1表達(dá)后,可使3-H孕激素入胞率下降60%,孕激素抗卵巢癌細(xì)胞凋亡效應(yīng)喪失。體內(nèi)外PGRMC1均與卵巢癌細(xì)胞對順鉑的敏感度密切相關(guān),敲除PGRMC1基因后,瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)生長緩慢,荷瘤裸鼠瘤體明顯小于對照組[4]。因此,結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中卵巢漿液性囊腺癌組織中PGRMC1表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系表明,在卵巢癌臨床病理特征分組中PGRMC1在各組中表達(dá),組與組間比較有腫瘤大小、病理分級差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)??赏茰yPGRMC1在一定程度上減弱或阻止凋亡及阻斷凋亡通路引起細(xì)胞凋亡,腫瘤直徑越大、分化越差的卵巢癌PGRMC1表達(dá)較高,提示卵巢癌的發(fā)生與PGRMC1密不可分,PGRMC1可能是指示腫瘤進(jìn)展的潛在標(biāo)志物和治療腫瘤的潛在靶標(biāo)分子。因此需進(jìn)一步深入研究PGRMC1與卵巢癌發(fā)生的關(guān)系有助于尋找新的腫瘤標(biāo)志物,將為卵巢癌的早期診斷提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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