TCT聯(lián)合DNA定量分析在宮頸病變篩查中的臨床應(yīng)用

李 敏，張春梅△，周仕嫻，向德兵，孫貴銀，李 華，張朝軍

(重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院1.病理科;2.腫瘤科；3.婦產(chǎn)科；4.眼科 402260)

TCT聯(lián)合DNA定量分析在宮頸病變篩查中的臨床應(yīng)用

李 敏1，張春梅1△，周仕嫻1，向德兵2，孫貴銀2，李 華3，張朝軍4

(重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院1.病理科;2.腫瘤科；3.婦產(chǎn)科；4.眼科 402260)

目的 探討液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)聯(lián)合DNA定量分析在宮頸病變篩查中的應(yīng)用價值。方法回顧性分析TCT(n=2 883)、DNA定量分析(n=1 742)及TCT聯(lián)合DNA定量分析(n=333)3種方法對診斷宮頸病變的臨床意義。結(jié)果TCT、DNA定量分析和聯(lián)合檢查的陽性符合率分別為43.86%、68.04%、81.16%，對宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ及以上病變的診斷，TCT與DNA定量分析陽性符合率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，聯(lián)合檢查與DNA定量分析、TCT相比，陽性符合率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。TCT檢查發(fā)現(xiàn)宮頸病變的敏感性、特異性為69.44%、92.42%；DNA定量分析發(fā)現(xiàn)宮頸病變的敏感性、特異性為85.71%、87.89%；聯(lián)合檢查發(fā)現(xiàn)宮頸病變的敏感性、特異性為96.55%、95.89%。結(jié)論DNA定量分析和TCT在宮頸病變篩查中均有較高的臨床診斷價值，聯(lián)合檢查更能有效地提高宮頸病變的檢出率。

宮頸疾??；液基細(xì)胞學(xué)；DNA定量分析；組織病理學(xué)

宮頸癌是全球婦女惡性腫瘤中發(fā)病率僅次于乳腺癌的一種嚴(yán)重危害婦女健康的疾病[1]，其發(fā)病率以每年2%～3%的速度增長，且趨于年輕化[2]。宮頸病變與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)，因此，早期發(fā)現(xiàn)宮頸病變是防治宮頸癌的關(guān)鍵[3]。本文旨在通過液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)、DNA定量分析與組織病理學(xué)結(jié)果的比較，探討TCT、DNA定量分析及二者聯(lián)合使用在宮頸癌及癌前病變篩查中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取的患者來源于2012年1月至2014年2月在本院婦科檢查的病例。2 883例患者行TCT檢查，年齡20～65歲，平均45歲；1 742例患者行DNA定量分析，年齡20～65歲，平均43歲；333例患者行TCT聯(lián)合DNA定量分析，年齡20～65歲，平均44.5歲。以上患者均有2年以上性生活史，未使用避孕藥及其他類固醇類藥物，并詳細(xì)詢問其病史、月經(jīng)史、性生活史及家族史等。

1.2 方法

1.2.1 TCT標(biāo)本采集 取材前要求患者為非月經(jīng)期(建議在月經(jīng)干凈后3～5 d)、24 h內(nèi)禁止性生活及陰道沖洗等，經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的婦科醫(yī)生在窺陰器直視下暴露宮頸，使用特制的頸管刷在宮頸外口及宮頸管旋轉(zhuǎn)5周收集宮頸管內(nèi)及宮頸鱗柱交界區(qū)的脫落細(xì)胞，取樣后將宮頸刷垂直浸泡于裝有標(biāo)本保存液的小瓶內(nèi)，與宮頸TCT或DNA定量細(xì)胞學(xué)檢查申請單一并送病理科。

1.2.2 宮頸液基細(xì)胞學(xué)診斷 TCT經(jīng)液基薄層細(xì)胞制片系統(tǒng)處理(廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司，HQTCT-Thin plus I)，制成薄層細(xì)胞涂片，95%的乙醇固定，巴氏染色后鏡檢讀片。根據(jù)Bethesda診斷標(biāo)準(zhǔn)分組[4]，(1)未見上皮內(nèi)病變或癌變(NILM)；(2)非典型鱗狀細(xì)胞：包括不能明確意義的非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)和非典型鱗狀細(xì)胞不能排除上皮內(nèi)高度病變(ASC-H)；(3)低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)；(4)高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)；(5)鱗狀上皮癌(SCC)；(6)非典型腺細(xì)胞(AGC)；(7)腺癌細(xì)胞(AC)。液基細(xì)胞學(xué)檢查陽性是指ASC-US及其以上病變。

1.2.3 DNA定量分析 DNA經(jīng)液基薄層細(xì)胞制片系統(tǒng)處理[試劑和耗材由麥克奧迪(廈門)醫(yī)療診斷系統(tǒng)有限公司提供]，制成薄層細(xì)胞涂片，95%的乙醇固定，F(xiàn)eulgen染色，通過Motic BA600全自動高分辨率細(xì)胞DNA圖像定量分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描。判定標(biāo)準(zhǔn)：(1)陰性(未見DNA異倍體細(xì)胞)；(2)可見少量細(xì)胞增生(5%～10%的細(xì)胞增生)；(3)可見少量DNA異倍體細(xì)胞(可見1～2個異倍體細(xì)胞，DI≥2.5)；(4)可見細(xì)胞異常增生(≥10%的細(xì)胞增生)；(5)可見DNA異倍體細(xì)胞(≥3個異倍體細(xì)胞，DI≥2.5)；(6)可見異倍體細(xì)胞峰。其中結(jié)果(1)代表陰性，(2)、(3)代表可疑或少量病變，(4)～(6)代表陽性。所有DNA定量分析結(jié)果均經(jīng)麥克奧迪提供的遠(yuǎn)程病理診斷平臺請專家(婦科病理專家)對結(jié)果進(jìn)行復(fù)核。DNA定量分析檢查陽性是指可疑或陽性病例。

1.2.4 宮頸DNA定量分析聯(lián)合TCT 標(biāo)本用液基細(xì)胞制片系統(tǒng)處理，每例同時制成2張薄層細(xì)胞片，巴氏染色行TCT，F(xiàn)eulgen染色行DNA定量分析。本文檢查陽性是指液基細(xì)胞學(xué)結(jié)果提示ASC-US及其以上病變和DNA定量分析提示可疑或陽性。

1.2.5 組織病理學(xué)檢查 TCT結(jié)果為ASC-US及其以上病變，或DNA定量分析檢查結(jié)果為可疑或陽性的病例均建議轉(zhuǎn)至婦科門診，在陰道鏡下觀察宮頸的一般情況及宮頸上皮對冰醋酸和碘的反應(yīng)，選擇可疑病變部位取材，如無明顯異常者，在鱗柱交界區(qū)3、6、9、12點取組織活檢。組織病理學(xué)診斷結(jié)果分為炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)、鱗形細(xì)胞癌(包括微小浸潤癌)。CINⅠ及以上病變定義為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，以組織病理學(xué)診斷為標(biāo)準(zhǔn)，用陽性符合率、敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值作為評價指標(biāo)，評價TCT、DNA定量分析對宮頸病變的診斷價值。采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCT與組織病理學(xué)結(jié)果的比較 2 883例TCT結(jié)果為NILM 2 778例，異常105例(3.64%)，其中ASC-US 82例(2.84%)，ASC-H 12例(0.42%)，LSIL 5例(0.17%)，HSIL 6例(0.21%)，SCC 0例。其中458例行病理活檢，以組織病理學(xué)診斷結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，在TCT診斷為陽性的57例中，病理活檢診斷為陽性者25例，陽性符合率為43.86%。TCT的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為69.44%(25/36)、92.42%(390/422)、43.86%(25/57)和97.26%(390/401)。TCT與組織病理學(xué)結(jié)果，見表1。

2.2 宮頸DNA定量分析與組織病理學(xué)結(jié)果的比較 1 742例DNA定量分析結(jié)果為陰性病例1 549例，異常193例(11.08%)，其中可疑病例98例(5.63%)，陽性病例95例(5.45%)。其中333例行病理活檢，以組織病理學(xué)診斷結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),97例DNA陽性病例中，診斷為陽性者66例，陽性符合率為68.04%。DNA定量分析的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為85.71%(66/77)、87.89%(225/256)、68.04%(66/97)和95.34%(225/236)。宮頸DNA定量分析與組織病理學(xué)結(jié)果，見表2。

2.3 DNA定量分析聯(lián)合TCT結(jié)果 DNA定量分析聯(lián)合TCT病例333例，其中陽性病例65例，病理結(jié)果診斷陽性者56例，陽性符合率81.16%。聯(lián)合檢查的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為96.55%(56/58)、95.89%(210/219)、86.15%(56/75)和99.06%(210/212)。TCT聯(lián)合DNA定量分析結(jié)果，見表3。

表1 TCT與組織病理學(xué)結(jié)果比較(n)

表2 宮頸DNA定量分析與組織病理學(xué)結(jié)果比較(n)

2.4χ2檢驗 對CINⅠ及以上病變的診斷，TCT與DNA定量分析陽性符合率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.685，P=0.003)，兩種方法聯(lián)合與DNA定量分析及TCT相比，陽性符合率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.867，P=0.009；χ2=24.347，P=0.000)。DNA定量分析的敏感性高于TCT(χ2=4.142，P=0.042)，但特異性低于TCT，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.873，P=0.049)；聯(lián)合檢查的敏感性均高于DNA定量分析及TCT，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.465，P=0.035；χ2=13.696，P=0.000)；聯(lián)合檢查的特異性高于DNA定量分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.795，P=0.002)，但與TCT的特異性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.905，P=0.088)。

表3 DNA定量分析聯(lián)合TCT結(jié)果(n)

3 討 論

宮頸癌的發(fā)生是由癌前病變演變?yōu)榘┑倪B續(xù)病理過程，由宮頸不典型增生最終發(fā)展為浸潤癌大約需要10年以上的時間[5]。早期癌前病變和早期宮頸癌常無自覺癥狀，宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是篩查癌前病變及宮頸癌的主要方法。近40年由于宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的普遍應(yīng)用，使宮頸癌和癌前病變得以早期發(fā)現(xiàn)和治療，宮頸癌的發(fā)病率和病死率已有明顯下降[6]。但傳統(tǒng)的篩查方法受到樣本收集及涂片質(zhì)量的影響，有一定的誤診率和漏診率[7]。隨著國家對宮頸癌篩查的宣傳和重視，宮頸細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)也隨之得到不斷的提高與發(fā)展，TBS和TCT技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床，極大地克服了傳統(tǒng)巴氏涂片檢查中的不足，明顯提高了標(biāo)本的滿意度與陽性檢出率[8]，具有很大的優(yōu)勢[9]，成為宮頸和陰道細(xì)胞學(xué)檢查的常規(guī)檢查手段。TBS和TCT技術(shù)的問世是制片技術(shù)的重大革新，但不能改變傳統(tǒng)閱片方式，其正確率與人眼疲勞及閱片人的經(jīng)驗水平及責(zé)任心相關(guān)[10]。尋求更高效、實用、簡單、安全的篩查方法是臨床醫(yī)生面臨的問題。

用DNA定量分析進(jìn)行宮頸癌前病變及宮頸癌的診斷在國外已有大量報道[11-12]。DNA細(xì)胞定量分析技術(shù)正是克服了人為因素在制片和閱片技術(shù)方面的不足，采用先進(jìn)的液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)，以保證制片質(zhì)量，再用DNA特異性染色，通過計算機自動掃描、閱片的方法，克服了人眼疲勞及閱片人的經(jīng)驗水平及責(zé)任心不足等人為因素，進(jìn)一步保證了閱片質(zhì)量，為宮頸病變篩查提供了更為客觀的診斷數(shù)據(jù)。Karimi-Zarchi等[13]比較了傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)、液基細(xì)胞學(xué)及陰道鏡在宮頸病變篩查中的應(yīng)用，結(jié)果顯示傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)敏感性、特異性為51%、66.6%，液基細(xì)胞學(xué)為55.3%、77.7%，陰道鏡為70.9%、44.4%，陰道鏡敏感性最高，液基細(xì)胞學(xué)特異性最高。而對于DNA、TCT以及二者聯(lián)合之間的比較國外報道得則比較少。在本研究中DNA定量分析與病理診斷陽性符合率為68.04%，高于TCT的43.86%，并且DNA定量分析(85.71%)的敏感性高于TCT(69.44%)，說明DNA定量分析方法較TCT在宮頸病變及宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)方面有更大的優(yōu)勢，使患者能得到及時的診斷和治療，但DNA定量分析的特異性較TCT低，有可能造成部分患者過診斷，與文獻(xiàn)[14-16]的研究結(jié)果一致。因此，把TCT和DNA定量分析結(jié)合起來，可以同時提高宮頸病變早期診斷的敏感性和特異性。

宮頸DNA定量分析聯(lián)合TCT檢查已在歐美等發(fā)達(dá)國家廣泛應(yīng)用于臨床診斷。本文結(jié)果顯示DNA定量分析聯(lián)合TCT檢查對宮頸病變的檢出率更高，其診斷結(jié)果與病理診斷陽性符合率為81.16%，高于TCT(43.86%)及DNA定量分析(68.04%)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；兩種方法聯(lián)合檢測的敏感性高達(dá)96.55%，明顯高于TCT(69.44%)及DNA定量分析(85.71%)(P<0.05)；并且兩種方法聯(lián)合檢測的特異性高達(dá)95.89%，高于DNA定量分析(87.89%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，但與TCT相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明兩種方法聯(lián)合使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，且能減少漏診或誤診率，能明顯降低宮頸癌的發(fā)生率，減少過度治療和醫(yī)療糾紛，為宮頸癌的預(yù)防和治療提供可靠的依據(jù)。

綜上所述，有效、準(zhǔn)確的早期宮頸病變的篩查，有助于早期診治，阻止其向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變。TCT及DNA定量分析對宮頸病變的篩查均有較高的臨床診斷價值，兩種方法聯(lián)合應(yīng)用更能有效地提高宮頸病變的檢出率，并能為臨床尋找切實、有效、可行的診療方案提供更為客觀可靠的依據(jù)。

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Clinical application of liquid-based cytology combined with DNA quantitative analysis in cervical lesions screening*

LiMin1,ZhangChunmei1△,ZhouShixian1,XiangDebing2,SunGuiyin2,LiHua3,ZhangChaojun4

(1.DepartmentofPathology;2.DepartmentofOncology;3.DepartmentofGynaecologyandObstetrics；4.DepartmentofOphthalmology,JiangjinDistrictCentralHospital,Jiangjin,Chongqing402260,China)

Objective To investigate the application value of the liquid-based cytology test (TCT) and the DNA quantitative analysis in cervical lesions screening.Methods 2 883 cases of TCT,1 742 cases of DNA quantitative analysis and 333 cases of TCT combined with the DNA quantitative analysis were performed the retrospective analysis for investigating their clinical significance in diagnosing the cervical lesions.Results The positive coincidence rates of TCT,DNA quantitative analysis and their combined detection were 43.86%,68.04% and 81.16% respectively.There was statistically significant difference in the positive coincidence rates for diagnosing CIN Ⅰand above between TCT and the DNA quantitative analysis (P<0.01);the positive coincidence rates of the combined detection had statistical difference compared with TCT and the DNA quantitative analysis (P<0.01).The sensitivity and the specificity of TCT for discovering the cervical lesions were 69.44% and 92.42% respectively;which of the DNA quantitative analysis were 85.71% and 87.89% respectively;while which of combined detection were 96.55% and 95.89% respectively.Conclusion The DNA quantitative analysis and TCT have the higher clinical diagnostic value in the cervical lesion screening.Their combined detection can more effectively increase the detection rate of cervical lesions.

uterine cervical diseases;liquid-based cytology;DNA quantitative analysis;histopathology

·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.15.010

衛(wèi)生部醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展研究中心項目(W2011GJ25)；重慶市江津區(qū)科委項目(Y12012022)。

李敏(1977-)，本科，主治醫(yī)師，主要從事病理診斷方面的研究。

△通訊作者，E-mail:dzchunmei@163.com。

R711.74

A

1671-8348(2015)15-2045-03

2014-10-15

2015-02-26)