彌漫大B細胞淋巴瘤患者MYC/BCL-2共表達情況及其臨床意義分析

李海麗，肖建波，王軼楠，王 鈞，劉金慧

·診治分析·

彌漫大B細胞淋巴瘤患者MYC/BCL-2共表達情況及其臨床意義分析

李海麗，肖建波，王軼楠，王 鈞，劉金慧

目的 分析彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)患者MYC/BCL-2共表達情況及其臨床意義。方法 選取2012年1月—2015年1月唐山市人民醫(yī)院收治的首診DLBCL患者30例，采用免疫組化法檢測患者MYC和BCL-2表達情況，并分析不同臨床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共表達情況。結果 MYC陽性表達率為70.0%，BCL-2陽性表達率為53.3%，MYC/BCL-2共陽性表達率為30.0%。不同性別、臨床分期、國際預后指數(shù)(IPI)評分及乳酸脫氫酶(LDH)水平DLBCL患者間MYC/BCL-2共陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；結外受侵、非生發(fā)中心型(non-GCB)、未完全緩解DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達率分別高于非結外受侵、生發(fā)中心型(GCB)、完全緩解患者(P<0.05)。結論 DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達率較高，且常見于non-GCB、結外受侵、預后不良的DLBCL患者。

淋巴瘤，大B細胞，彌漫性；基因，myc；基因，BCL-2；臨床特征

李海麗，肖建波，王軼楠，等.彌漫大B細胞淋巴瘤患者MYC/BCL-2共表達情況及其臨床意義分析[J].實用心腦肺血管病雜志，2015，23(11)：105-107.[www.syxnf.net]

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彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是一組異質性極強的疾病，其臨床預后差異較大，R-CHOP方案是目前DLBCL的標準治療方案[1-2]，但仍有約40%的患者短期內復發(fā)、死亡。近年研究發(fā)現(xiàn)，“雙重打擊”淋巴瘤(double-hit lymphoma，DHL)是DLBCL的一個獨特亞型，其伴有MYC和BCL-2染色體易位，且預后極差[3-5]。目前，臨床上基因分子水平檢測尚未被廣泛推廣，細胞遺傳學需要通過蛋白質形式表現(xiàn)。為此，本研究擬通過免疫組化法檢測DLBCL患者MYC和BCL-2共表達情況，并分析其臨床意義，旨在為DHL的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月—2015年1月唐山市人民醫(yī)院收治的首診DLBCL患者30例，均符合2008年世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的DLBCL診斷標準。其中男15例，女15例；年齡17～68歲，中位年齡49歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期17例；淋巴瘤國際預后指數(shù)(intemational pmgnostic index，IPI)評分：0～2分19例，3～5分11例；乳酸脫氫酶(LDH)正常(0～240 U/L)13例，LDH異常(>240 U/L)17例；結外受侵5例；細胞來源：生發(fā)中心型(GCB)17例，非生發(fā)中心型(non-GCB)13例；HIV均為陰性。血常規(guī)、肝腎功能、心電圖等檢查均正常。

1.2 治療方法 30例患者均采用R-CHOP方案化療4～6個周期，所有患者有可評價病灶，無化療禁忌證?；熀笸耆徑?2例，未完全緩解8例。完全緩解評價標準：(1)臨床和影像學腫瘤證據、治療前腫瘤相關癥狀完全消失，非霍奇金淋巴瘤(NHL)引起的異常生化指標(如LDH)恢復正常；(2)所有淋巴結及腫塊縮小至規(guī)定范圍(即治療前最大橫徑>1.5 cm者縮小至≤1.5 cm；治療前最大橫徑為1.1～1.5 cm者縮小至≤1.0 cm；或兩個最大垂直徑乘積縮小>75%)；(3)治療前CT掃描發(fā)現(xiàn)脾增大，治療后脾增大回縮且體檢不能捫及(由于準確評估肝、脾大小有困難，因此未規(guī)定其正常范圍)，治療前影像學監(jiān)測到的其他器官腫塊治療后應消失，治療前其他器官(如肝、腎)彌漫增大如考慮為淋巴瘤侵犯的，治療后縮?。?4)如治療前侵犯骨髓，需經重復同樣部位穿刺活檢證實病變已消失(要求取得足夠骨髓活檢樣本得出結論，如使用≥20 mm的活檢針芯)。

1.3 免疫組化法及陽性結果判定 所有患者取材良好，組織蠟塊標本經10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，常規(guī)脫蠟水化；0.3%過氧化氫(H2O2)阻斷內源性過氧化物酶，10%小牛血清封閉切片，滴加一抗，4 ℃過夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗(1∶200)，SP復合物(1∶200)，DAB顯色，蘇木素復染細胞核，脫水，透明，封片。分別設相應陽性、陰性、空白對照。MYC蛋白質染色在細胞核，BCL-2蛋白質染色在細胞質，棕黃色細小顆粒為陽性。在高倍鏡(×400)下對每個病變組織隨機選10個視野進行陽性細胞計數(shù)，根據染色強度及范圍，MYC陽性細胞數(shù)≥40%且BCL-2陽性細胞數(shù)≥70%為MYC/BCL-2共表達，所有病理標本切片用PBS液代替一抗作陰性對照。

1.4 觀察指標 觀察MYC、BCL-2在DLBCL患者中表達情況，并分析不同臨床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達情況。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 DLBCL患者MYC、BCL-2表達情況 MYC陽性表達率為70.0%(21/30)，BCL-2陽性表達率為53.3%(16/30)，MYC/BCL-2共陽性表達率為30.0%(9/30)。

2.2 不同臨床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共表達情況比較 不同性別、臨床分期、IPI評分及LDH水平DLBCL患者間MYC/BCL-2共陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結外受侵、non-GCB型、未完全緩解DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達率分別高于非結外受侵、GCB型、完全緩解患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

3 討論

MYC基因是位于8q24的原癌基因，其是一種轉錄因子，可參與許多重要細胞功能，且對細胞增殖、生長、分化、代謝及促進新生血管形成等發(fā)揮重要作用[6]。MYC基因重t(8;14)(q24;q32)是伯基特淋巴瘤發(fā)生的一個特點，但近年來有研究發(fā)現(xiàn)，利用熒光原位雜交技術(FISH)檢測到5%～15%的DLBCL患者MYC重排(MYC-R)，且與不良預后相關[7]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL發(fā)生的一個重要危險因素是MYC易位，特別是其與BCL-2易位相連接時臨床預后差、臨床過程呈侵襲性、中位生存期為0.2～1.5年[8]。DHL患者的臨床特征如下：中位年齡70歲左右、臨床分期為晚期、IPI評分中高危或高危、LDH水平增高、結外受侵(包括中樞神經系統(tǒng)受累)[8]。Mossafa等[9]研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL患者出現(xiàn)cMYC基因擴增，MYC基因上調和MYC蛋白質高表達具有很高的一致性，因此，可采用免疫組化法代替FISH檢測MYC基因表達情況。Johnson等[10]和Green等[11]研究均證實，免疫組化法檢測MYC(陽性>40%)和BCL-2(陽性>50%)與基因表達式編程(GEP)檢測方法的一致性高達90%以上，MYC和BCL-2蛋白同時過表達時稱為雙表達淋巴瘤(double expression lymphoma，DEL)，且其采用CHOP和R-CHOP方案治療的預后較差[10-12]。Green等[11]研究顯示，免疫組化法檢測MYC(陽性>40%)/ BCL-2(陽性>70%)共陽性表達患者經初始R-CHOP方案治療后完全緩解率低，3年生存期及無進展生存期均短于非共陽性表達患者。

表1 不同臨床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共表達情況比較(例)

Table 1 Comparison of coexpression of MYC/BCL-2 in DLBCL patients with different clinical features

臨床特征例數(shù)陽性陰性χ2值P值性別0.6000.439 男1569 女15411臨床分期(期)0.2710.602 Ⅰ～Ⅱ1358 Ⅲ～Ⅳ17512IPI評分(分)0.0720.789 0～219613 3～51147LDH1.0860.297 正常13310 異常17710結外受侵5.8800.015 否25619 是541細胞分型4.3440.037 GCB17314 non-GCB1376臨床療效4.1760.041 完全緩解22517 未完全緩解853

注：IPI=國際預后指數(shù)，LDH=乳酸脫氫酶，GCB=生發(fā)中心型，non-GCB=非生發(fā)中心型

本研究回顧性分析30例DLBCL患者的臨床資料，結果顯示30例患者中MYC/BCL-2共陽性表達率為30.0%，且其常見于non-GCB亞型患者，與其他文獻報道類似[13-14]。結外受侵DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達發(fā)生率高，占結外受侵80%，但本研究中結外受侵患者僅5例，需擴大樣本量進一步證實。有臨床研究顯示，結外受侵、non-GCB亞型是DLBCL患者預后不良的危險因素，進而推測MYC/BCL-2共陽性表達DLBCL患者預后可能較差。R-CHOP方案是目前DLBCL的標準治療方案，本研究結果顯示，經R-CHOP方案治療后完全緩解的DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達率低于未完全緩解者，與Johnson等[10]研究結果相一致。

綜上所述，DLBCL患者MYC/BCL-2共陽性表達率較高，且MYC/BCL-2共陽性表達常見于non-GCB、結外受侵、預后不良的DLBCL患者。

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(本文編輯：謝武英)

Coexpression and Clinical Significance of MYC/BCL-2 in Patients with Diffuse Large B Cell Lymphoma

LIHai-li，XIAOJian-bo，WANGYi-nan，etal.DepartmentofChemoradiotherapy，People′sHospitalofTangshan，Tangshan063001，China

Objective To investigate the coexpression and clinical significance of MYC/BCL-2 in patients with diffuse large B cell lymphoma.Methods A total of first-diagnosis patients with diffuse large B cell lymphoma were selected in the People′s Hospital of Tangshan from January 2012 to January 2015，immunohistochemical method was used to detect the expressions of MYC and BCL-2，and coexpression rate of MYC/BCL-2 was compared in patients with different clinical features.Results The positive expression rate of MYC was 70.0%，of BCL-2 was 53.3%，and the positive coexpression rate of MYC/BCL-2 was 30.0%.No statistically significant different differences of positive coexpression rate of MYC/BCL-2 was found in patients with different gender，clinical staging，IPI scores or LDH levels(P>0.05)；positive coexpression rate of MYC/BCL-2 of patients with lymphatic metastasis，non-germinal center B cell lymphoma and without complete remission was statistically significantly higher than that of patients without lymphatic metastasis，with germinal center B cell lymphoma and with complete remission，respectively(P<0.05).Conclusion The positive coexpression rate of MYC/BCL-2 is relatively high in patients with diffuse large B cell lymphoma，and it is commonly expressed in patients with lymphatic metastasis，non-germinal center B cell lymphoma and without complete remission.

Lymphoma，large B-cell，diffuse；Genes，myc；Genes，BCL-2；Clinical characteristics

063001河北省唐山市人民醫(yī)院放化科

R 733.4

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.11.031

2015-08-04；

2015-11-02)