仙靈骨葆對(duì)大鼠正畸保持階段成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的影響

陸廷茂 張軍梅

(1.貴州省人民醫(yī)院口腔科，貴州 貴陽 550002；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，貴州 貴陽 550004)

·實(shí)驗(yàn)研究·

仙靈骨葆對(duì)大鼠正畸保持階段成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的影響

陸廷茂1張軍梅2△

(1.貴州省人民醫(yī)院口腔科，貴州 貴陽 550002；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，貴州 貴陽 550004)

目的 觀察仙靈骨葆對(duì)成年大鼠正畸保持階段牙槽骨改建的影響。方法 20只3月齡雄性大鼠，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各10只。將上頜前牙作為支抗牙近中牽引上頜第一磨牙，持續(xù)加力21 d后安裝保持裝置。治療組每只以3 mL劑量的仙靈骨葆灌胃4周至處死大鼠取上頜弓標(biāo)本，對(duì)照組僅給予同等劑量雙蒸餾水。HE染色病理切片，分別觀察計(jì)數(shù)成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞。結(jié)果 保持結(jié)束時(shí)，仙靈骨葆組壓力側(cè)、張力側(cè)成骨細(xì)胞數(shù)量均高于對(duì)照組壓力側(cè)、張力側(cè)成骨細(xì)胞數(shù)量，P<0.05；壓力側(cè)、張力側(cè)破骨細(xì)胞數(shù)量均低于對(duì)照組壓力側(cè)、張力側(cè)破骨細(xì)胞數(shù)量，P<0.05；HE染色示，仙靈骨葆組壓力側(cè)及張力側(cè)見大量成骨細(xì)胞和少量破骨細(xì)胞，對(duì)照組壓力側(cè)及張力側(cè)見少量成骨細(xì)胞和大量破骨細(xì)胞。結(jié)論 仙靈骨葆可以抑制成年大鼠牙移動(dòng)保持階段破骨細(xì)胞生成，促進(jìn)成骨細(xì)胞的生成，提示仙靈骨葆可能對(duì)成年大鼠正畸保持階段新骨形成、使過渡性牙槽骨向正常牙槽骨轉(zhuǎn)化具有促進(jìn)作用。

正畸； 仙靈骨葆； 成骨細(xì)胞； 破骨細(xì)胞； 大鼠

穩(wěn)定是正畸治療的一個(gè)重要目標(biāo)，復(fù)發(fā)是正畸中棘手的問題。正畸保持階段牙周組織形成新的結(jié)構(gòu)及達(dá)到功能平衡，是一個(gè)慢長的過程。而牙槽骨改建未完成是正畸復(fù)發(fā)的主要原因。若在正畸治療的保持期應(yīng)用藥物促進(jìn)牙周組織修復(fù)與骨改進(jìn)，將會(huì)有利于矯治后的牙齒的穩(wěn)定，降低復(fù)發(fā)的可能。國內(nèi)外對(duì)于這類的報(bào)道并不多見，中藥在正畸保持階段的研究尚未見報(bào)道。仙林骨葆是由黔嶺淫羊藿、丹參、補(bǔ)骨酯、地黃等組成的一種純中藥制劑，具有溫腎壯陽，接骨續(xù)筋，強(qiáng)身健骨之功效，臨床上常被用于治療骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)，治療效果得到學(xué)術(shù)界的廣泛認(rèn)可。本課題通過建立成年大鼠牙移動(dòng)保持期模型，對(duì)保持期大鼠灌服仙靈骨葆懸液，觀察其對(duì)成年大鼠正畸保持階段成骨、破骨細(xì)胞表達(dá)的影響，探索仙靈骨葆對(duì)成年大鼠保持期牙周組織改建的影響作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物來源、儀器與試劑 Wistar大鼠(第四軍醫(yī)大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)、正畸用鎳鈦螺旋拉簧(北京圣瑪特科技有限公司)、0.25mm結(jié)扎絲(杭州奧索醫(yī)療器械有限公司)、正畸測力計(jì)(長沙天美醫(yī)療器械有限公司)、廣陸電子數(shù)顯卡尺(桂林廣陸數(shù)字測控股份有限公司)、MOF-392F型超低溫冰箱(日本SANYO)、LONYPAS HB51型光學(xué)顯微鏡(日本索尼)、仙靈骨葆膠囊 (貴州同濟(jì)堂制藥有限公司)。

1.2 動(dòng)物分組及正畸牙移動(dòng)模型的建立與維持[1]選擇3月齡雄性Wistar大鼠20只，體質(zhì)量200～220 g。將右側(cè)上頜第一磨牙為實(shí)驗(yàn)牙，鎳鈦拉簧放置在上頜切牙和同側(cè)的第一磨牙之間，初始力值為40 g。用慢速手機(jī)在大鼠上頜雙側(cè)切牙頸緣處磨出一條深約0.5 mm的固位溝。0.02 mm正畸不銹鋼結(jié)扎絲將螺旋拉簧結(jié)扎在上頜第一磨牙和上頜切牙之間。用測力計(jì)使螺旋拉簧產(chǎn)生40 g的拉力，灌藥組和對(duì)照組在加力21 d后，去除鎳鈦螺旋拉簧加力裝置。建立保持期模型：用0.02 mm不銹鋼結(jié)扎絲于上頜第一磨牙和切牙之間用鋼絲被動(dòng)結(jié)扎，光固化樹脂固定切牙處結(jié)扎點(diǎn)，不施加任何正畸力，僅維持第一磨牙的位置。將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、仙靈骨葆組，仙靈骨葆組以灌胃針灌胃250 mg/(kg·d)[2]4周，對(duì)照組給予等量雙蒸餾水灌胃4周。

1.3 HE染色及組織學(xué)觀察 在保持期第28天頸椎脫臼處死大鼠，取上頜右側(cè)第一磨牙及其牙槽骨制作HE切片，采用Biomias 2001圖像分析系統(tǒng)分析，對(duì)破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞數(shù)量計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)P<0.05示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞數(shù)比較 仙靈骨葆組壓力側(cè)、張力側(cè)成骨細(xì)胞數(shù)量均明顯高于對(duì)照組壓力側(cè)、張力側(cè)成骨細(xì)胞數(shù)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；仙靈骨葆組壓力側(cè)、張力側(cè)破骨細(xì)胞數(shù)量均顯著低于對(duì)照組壓力側(cè)、張力側(cè)破骨細(xì)胞數(shù)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 對(duì)照組與仙靈骨葆組成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞數(shù)比較

注：與對(duì)照組相比，★P<0.05。

2.2 HE染色結(jié)果 HE染色示，仙靈骨葆組壓力側(cè)及張力側(cè)見大量成骨細(xì)胞和少量破骨細(xì)胞，對(duì)照組壓力側(cè)及張力側(cè)見少量成骨細(xì)胞和大量破骨細(xì)胞。見圖1～4。

3 討 論

仙靈骨葆是由淫羊藿、丹參、補(bǔ)骨脂等組成的一種純中藥制劑。研究證實(shí)仙靈骨葆不僅促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)新骨生成；還可以明顯抑制破骨細(xì)胞的分化及骨吸收，減少炎性因子的分泌[3]，減輕由破骨細(xì)胞導(dǎo)致的骨量下降和骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變[4]；同時(shí)，仙靈骨葆具有提高成骨細(xì)胞分泌堿性磷酸酶(ALP)的活性，促進(jìn)成骨細(xì)胞成熟和鈣化的作用，能很好地恢復(fù)骨小梁的形態(tài)結(jié)構(gòu)并提升骨密度和生物力學(xué)的性能，對(duì)OP的治療效果得到學(xué)術(shù)界的廣泛認(rèn)可[5]。臨床研究[6]發(fā)現(xiàn)仙靈骨葆膠囊具有促進(jìn)骨折患者骨痂生長的功效，仙靈骨葆治療組患者骨折愈合時(shí)間明顯短于對(duì)照組，且隨著時(shí)間的延長，治療組患者骨痂生長情況明顯優(yōu)于對(duì)照組，亦有研究[7]結(jié)果顯示，仙靈骨葆可以縮短骨質(zhì)疏松大鼠骨折愈合時(shí)間。牙移動(dòng)的生物學(xué)原理是基于矯治力打破骨轉(zhuǎn)化平衡，一定程度上認(rèn)為是骨組織損傷與改建過程，與骨損、骨折修復(fù)的重建機(jī)理變化是相同的。有研究證實(shí)患者服用仙靈骨葆膠囊可使整體骨量、骨礦物質(zhì)含量增加，成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的功能得以恢復(fù)且調(diào)節(jié)正常，骨生成能力提高；并能使骨鈣和骨有機(jī)質(zhì)的構(gòu)成比向正常水平接近，從而更好地調(diào)節(jié)機(jī)體的代謝紊亂，刺激骨痂形成．最終使整體骨量和骨的質(zhì)量得到恢復(fù)，促進(jìn)骨折愈合[8]。仙靈骨葆的主要成分淫羊藿在口腔領(lǐng)域的研究顯示，給予實(shí)驗(yàn)大鼠淫羊藿注射液，可明顯預(yù)防拔牙后的剩余牙槽嵴吸收。體外實(shí)驗(yàn)研究淫羊藿能有效抑制破骨細(xì)胞在下頜骨片上形成的吸收陷窩的數(shù)量和面積，可以抑制頜骨骨吸收[9]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，成年大鼠正畸保持階段灌服仙靈骨葆組相比較對(duì)照組成骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多，破骨細(xì)胞顯著減少。而骨代謝的平衡是靠這兩類細(xì)胞功能間的動(dòng)態(tài)平衡維持[10]，當(dāng)成骨細(xì)胞數(shù)量和活性增加時(shí)，牙槽骨的改建為骨的生成為主，而破骨細(xì)胞的減少表明骨吸收可能減少。本實(shí)驗(yàn)提示仙靈骨葆有可能促進(jìn)牙移動(dòng)后保持階段新骨形成，減少牙槽骨骨量丟失，有可能縮短過渡性新骨恢復(fù)到正常骨結(jié)構(gòu)的時(shí)間。這對(duì)臨床上縮短佩戴保持器的時(shí)間，維持臨床上成人正畸牙移動(dòng)到新位置的長期穩(wěn)定，具有重要的理論意義。

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2016-02-25)

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