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    人參果的組織培養(yǎng)與快繁技術

    2014-12-28 07:54:18
    中國林副特產 2014年1期
    關鍵詞:人參果莖段小苗

    焦 宏

    (遼寧省森林經營研究所,遼寧 丹東 118002)

    人參果又名艷果,茄科多年生草本植物,原產哥倫比亞和智利安第斯山溫帶地區(qū)。近年引入我國,以其良好的生長習性和所結果實受到人們的歡迎,是一種觀賞兼食用的植物。在15~30℃一年四季均可開花結果。從坐果到成熟75天左右。漿果心形、桃形、橢圓形,果皮呈金黃色具有紫色條紋,在高溫天氣可散發(fā)出芳香。果實甜爽多汁、清香、味美,具有高蛋白、低糖、低脂肪的特點,有防癌和軟化血管的功能。最吸引人之處是每100g鮮果中含鈣高達910mg,是西紅柿的164倍,還含硒、鉬、鈷等人體所需的多種微量元素,堪稱難得的保健食品。通常以播種和莖段扦插繁殖,但引入之初,數(shù)量有限,用組織培養(yǎng)法可以大大加快繁殖速度,為該品種的推廣提供了一條有效途徑。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    取自遼寧丹東古城子苗圃,以人參果帶芽莖段、葉片作為外植體。實驗于2011年在組培中心實驗室進行。

    1.2 方法

    1.2.1 試驗基本程序

    試材處理→接種→增殖培養(yǎng)→生根培養(yǎng)

    試材處理:切取3cm帶頂芽或側芽的莖段→流水沖洗60min→75%酒精浸15s→0.1%升汞(HgCl2)溶液消毒7min→無菌水沖洗4~5次→用濾紙吸去水分→將葉切成0.5cm×0.5cm小方塊;莖段切成0.5cm帶側芽的小段。

    1.2.2 培養(yǎng)基制作

    表1 培養(yǎng)基配方

    以 MS為基本培養(yǎng)基,激素選擇:6-BA,IBA,NAA,KT。按激素含量不同誘導培養(yǎng)基設9種處理,生根培養(yǎng)基3種處理,如表1。

    表1培養(yǎng)基中蔗糖含量為30g/L(生根為20g/L),瓊脂8.5g/L,pH5.8~6.0,在1.1大氣壓下滅菌20min。

    1.2.3 培養(yǎng)條件

    培養(yǎng)溫度20~25℃,光照每天14h,光照強度2000lx。

    2 結果與分析

    2.1 外植體誘導培養(yǎng)

    葉片:接種7天后外植體,在7~9號培養(yǎng)基中組織變厚;培養(yǎng)15天后,在8號培養(yǎng)基中的愈傷組織開始出現(xiàn)許多白色小突起;20天后突起逐漸增大;40天后,在8號培養(yǎng)基中的愈傷組織已直接分化出苗,形成芽叢。

    莖段:培養(yǎng)10天后觀察,在1~7號培養(yǎng)基中莖段基部開始膨大,出現(xiàn)愈傷組織;20天后,在4、7號培養(yǎng)基里的愈傷組織緊密,顏色深綠;在2、5號培養(yǎng)基里的愈傷組織緊密,顏色淡綠;在3、6號培養(yǎng)基里的愈傷組織松散,顏色發(fā)白。把愈傷組織緊密、顏色深綠、淡綠的,再重新轉入2、4、5、7號培養(yǎng)基中繼續(xù)誘導培養(yǎng)。

    培養(yǎng)50天后觀察帶側芽莖段的生長情況,在5號培養(yǎng)基里的愈傷組織已分化出苗,苗多而且壯,同時仍有愈傷組織繼續(xù)出現(xiàn),在2號培養(yǎng)基的苗特別多、弱,且少部分呈水浸狀;在4號培養(yǎng)基的苗少、壯。其它培養(yǎng)基有的沒有反應,有的愈傷組織出現(xiàn),但松散、不利于苗的分化,有的直接分化出幾株苗太少或太弱,不理想。

    綜上所述,以葉作外植體,用8號培養(yǎng)基進行誘導培養(yǎng)較為理想,一般在2個周期(40~50天)即能形成叢生芽,以莖段作外植體,在1~7號培養(yǎng)基一般20天能誘導出愈傷組織,但相對來講在2、5、7號培養(yǎng)基比較理想,50天即能誘導出叢生芽。

    2.2 增殖培養(yǎng)

    將較長的試管苗切成1cm左右莖段,其余切割成0.5cm×0.5cm左右小塊,轉入繼代培養(yǎng)基里進行增殖培養(yǎng),觀察試管苗在繼代培養(yǎng)基中的表現(xiàn)情況,試管苗在5號培養(yǎng)基中,分化苗多且粗壯,其余苗長勢較弱。最后需轉入7號培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng),待生根。增殖培養(yǎng)周期的長短,要根據(jù)試管苗生長快慢來決定,生長快則繼代周期短,反之繼代周期長??傊^察試管苗生長速度下降時,即可繼代。間隔時間太長,試管苗老化,葉變黃部分脫落;時間太短,浪費人力、物力。一般間隔期為20~25天,繁殖系數(shù)一般為3~5倍。

    2.3 試管苗生根

    在無菌狀態(tài)下,選擇粗壯、健康的2~3cm高小苗轉入不同的生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng),其余小苗繼續(xù)進行繼代增殖培養(yǎng)。結果見表2。

    表2 試管苗在不同培養(yǎng)基生根情況

    從表2中可以看出,11號培養(yǎng)基生根時所需天數(shù)最少,根系生長情況最好,根的條數(shù)最多,所以11號培養(yǎng)基為最適生根培養(yǎng)基。

    2.4 試管苗移栽

    試管苗移栽是組織培養(yǎng)快繁的重要環(huán)節(jié),是由異養(yǎng)轉為自養(yǎng)的過程。當根長到1.5~2.0cm時,打開瓶蓋,取出小苗,洗凈培養(yǎng)基,用多菌靈500~800倍溶液浸泡30min左右,然后栽入用0.1%高錳酸鉀消過毒的煉苗床上,煉苗床基質作4個處理,分別為:沙土(1∶1)、沙:蛭石(1∶1)、純沙、純蛭石。1天澆1次水,1周噴1次百菌清和營養(yǎng)液,蓋塑料拱棚,保溫保濕,7天后逐漸增加通風,并逐漸減少澆水,1個月后移栽到營養(yǎng)缽或直接移栽大田。試驗結果表明:以純沙為基質最好,成活率達95%以上。

    3 結論

    3.1 莖段培養(yǎng)在5號培養(yǎng)基MS+BA2+KT2上表現(xiàn)最好,前期可誘導出愈傷組織,仍用原培養(yǎng)基繼代1次即可出苗,繁殖系數(shù)3倍以上。

    3.2 葉在8號培養(yǎng)基MS+BA4+KT2+NAA0.1上連續(xù)培養(yǎng)40天即可分化出不定芽,繼代培養(yǎng)時在5號培養(yǎng)基MS+BA2+KT2(同莖段)上表現(xiàn)最好。但較莖段分化出的苗弱,因此需轉入7號培養(yǎng)基MS+BA1+KT1+NAA0.1上壯苗。

    3.3 生根培養(yǎng)以11號培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.1為好,生根率達98%以上,并且每株可達5~10條根。

    3.4 移栽基質以純沙為最好,成活率達95%以上,并且成本最低,資源豐富。

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