CD133在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義＊

陜西省第二人民醫(yī)院胸外科 （西安710005） 王勇文 張 晉 馮 鋼

近年來腫瘤干細(xì)胞理論的提出，為腫瘤的研究提供了一個(gè)全新的方向。這類細(xì)胞具有自我更新及多向分化的潛能和特性，影響和促進(jìn)了腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，而其數(shù)量可能與腫瘤的分化程度及疾病預(yù)后具有一定的相關(guān)性。CD133作為腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物，已在多種惡性腫瘤組織中得到證實(shí)，但其與食管癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系國內(nèi)外卻少有報(bào)道。本研究通過免疫組化方法，檢測CD133在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，比較分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討CD133在食管鱗狀細(xì)胞癌中的臨床意義。

材料和方法

1 材料選擇 選擇食管鱗狀細(xì)胞癌石蠟切片40例（均來自西安交大醫(yī)學(xué)院第二醫(yī)院），患者術(shù)前未接受放化療治療，術(shù)后病理檢查為鱗狀細(xì)胞癌，男26例，女14例，年齡35～71歲，術(shù)后隨訪滿3年?；颊呔橥狻Ｍ每谷薈D133多克隆抗體（產(chǎn)品編號(hào)bs-0395R）購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司、兔抗人Ki67單克隆抗體購于丹麥Dako公司，生物素標(biāo)記羊抗兔二抗、DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 HE染色：石蠟切片常規(guī)HE染色。

2．2 石蠟切片的CD133、Ki67免疫組化染色：石蠟切片常規(guī)脫蠟水化，置于0．01mol／L檸檬酸鹽緩沖液中，微波修復(fù)抗原20min，3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化酶，山羊血清封閉后滴加抗CD133、Ki67抗體（1∶100）4℃過夜，第2天取出，滴加生物素標(biāo)記的二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。

2．3 結(jié)果判斷：DAB陽性染色為棕黃色，計(jì)數(shù)4個(gè)高倍視野下200個(gè)癌細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)量。由兩位病理醫(yī)生獨(dú)立觀察判斷。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 10．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行兩兩比較的χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié) 果

1 CD133蛋白與食管鱗狀細(xì)胞癌、癌旁組織的關(guān)系 CD133陽性顆粒主要定位在細(xì)胞膜，呈散在簇狀分布；Ki67陽性顆粒定位于細(xì)胞核，40例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中，CD133、Ki67陽性例數(shù)，見表1。

表1 CD133在食管鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織中的表達(dá)陽性例數(shù)（n）

2 CD133和臨床病理參數(shù) 結(jié)果顯示，不同年齡、性別患者間CD133陽性細(xì)胞表達(dá)比較有顯著性差異（P＜0．05）；不同腫瘤組織浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化程度患者間CD133陽性細(xì)胞表達(dá)率比較有顯著性差異（P＜0．05）。提示低分化食管鱗狀細(xì)胞癌中CD133的陽性表達(dá)高于高分化食管鱗狀細(xì)胞癌組織；腫瘤侵潤越深，CD133的表達(dá)也隨之升高；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的腫瘤病例其CD133的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例，見表2。

3 CD133陽性表達(dá)與Ki67表達(dá)比率的關(guān)系可見，食管癌腫瘤細(xì)胞中CD133陽性表達(dá)與Ki67陽性表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表3。

表2 CD133與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表3 CD133與ki67表達(dá)的相關(guān)性

4 CD133陽性的患者生存曲線 見圖7。

圖7 CD133陽性患者生存曲線

討 論

腫瘤干細(xì)胞（Cancer stem cells，CSC）是惡性腫瘤組織中能夠自我更新并產(chǎn)生異質(zhì)性的細(xì)胞，其具有的干細(xì)胞特性是腫瘤生長、轉(zhuǎn)移的根源。人類急性粒細(xì)胞白血病、肺癌［1］、結(jié)腸癌［2］等多種腫瘤組織中也相繼發(fā)現(xiàn)存在有CSC，其具有的自我更新、分化的潛能，在腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。研究證明，腫瘤干細(xì)胞對(duì)放化療不敏感，若能建立針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的治療手段，可能提高惡性腫瘤的遠(yuǎn)期治療效果。

CD133是在血液系統(tǒng)干細(xì)胞、前體細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的穿膜糖蛋白，后被認(rèn)為也是腫瘤組織的干細(xì)胞標(biāo)志物［3］。隨著對(duì)CD133的研究深入，已在多種惡性腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)CD133分子的存在。Singh等［4］在腦腫瘤組織進(jìn)行研究時(shí)，將100個(gè)CD133陽性細(xì)胞接種NOD／SCID小鼠即可形成腫瘤，且腫瘤表型與原發(fā)腫瘤相同，證明CD133＋細(xì)胞具有顯著增殖能力。在肝癌［5］、黑色素瘤［6］、及胰腺癌［7］的研究中發(fā)現(xiàn) CD133陽性細(xì)胞的存在與腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)相關(guān)；同時(shí)COX多因素分析提示，CD133的蛋白表達(dá)水平為影響患者生存率的獨(dú)立因素［9］。Ki67是近年來研究較多的一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，其與腫瘤的侵襲、浸潤、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移傾向及預(yù)后均有密切的相關(guān)性。

本研究采用免疫組化法對(duì)食管癌及癌旁組織中CD133及Ki67的表達(dá)進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中CD133的陽性表達(dá)例數(shù)（26例）明顯多于癌旁組織（2例），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）；Ki67在腫瘤組織中的表達(dá)也明顯高于癌旁組織（P＜0．05），并且二者在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的的表達(dá)情況不具有明顯差異（P＞0．05）。對(duì)不同分化程度的食管鱗狀細(xì)胞癌組織中CD133的表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示低分化食管鱗狀細(xì)胞癌組織中CD133陽性表達(dá)率高于高分化組織（P＜0．05），而腫瘤侵潤程度及樣本淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況也與CD133的表達(dá)呈正相關(guān)（P＝0．03，P＝0．025）。同時(shí)，生存曲線的結(jié)果也提示，CD133表達(dá)陽性的患者較陰性患者術(shù)后生存期短。

食管癌鱗狀細(xì)胞癌患者的長期生存率至今未得到明顯提高，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的不良因素。目前國內(nèi)外有關(guān)CD133與食管癌臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系的報(bào)道較少。本次研究結(jié)果提示，CD133陽性表達(dá)水平越高的食管癌組織，含有的腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞越多，這種細(xì)胞通過自我更新及分化，可能使腫瘤細(xì)胞更易出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，CD133可作為評(píng)價(jià)食管癌鱗狀細(xì)胞癌腫瘤生物學(xué)特性及判斷預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)，CD133陽性細(xì)胞可作為提高患者生存率的治療靶點(diǎn)。

［1］ Eramo A，Lotti F，Sette G，etal．Identification and expansion of the tumorigenic lung cancer stem cell population［J］．Cell Death Differ，2008，15：504–514．

［2］ O’Brien CA，Pollett A，Gallinger S，etal．A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice［J］．Nature，2007，445：106–110．

［3］ Mizrak D，Brittan M，Alison MR．CD133：molecule of the moment［J］．J Pathol，2008，214：3–9．

［4］ Singh SK，Clarke ID，Terasaki M，etal．Identification of a cancer stem cell in human brain tumors［J］．Cancer Res，2003，63：5821–5828．

［5］ Yin S，Li J，Hu C，etal．CD133positive hepatocellular carcinoma cells possess highcapacity for tumorigenicity［J］．Int J Cancer，2007，120：1444–1450．

［6］ Monzani E，F(xiàn)acchetti F，Galmozzi E，etal．Melanoma contains CD133 and ABCG2positive cells with enhanced tumourigenic potential［J］．Eur J Cancer，2007，43：935–946．

［7］ Maeda S，Shinchi H，Kurahara H，etal．CD133 expression is correlated with lymph node metastasis and vascular endothelial growth factor-C expression in pancreatic cancer［J］．Br J Cancer，2008，98：1389–1397．

［8］ Horst D，Kriegl L．CD133 expression is an independent prognostic marker for low survival in colorectal cancer［J］．Br J Cancer，2008，99：1285–1289．