常用免疫抑制劑治療對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者淋巴細胞亞群的影響*

蘇利沙，張根豪，鄧少麗，張俊華，劉紅春

1)鄭州大學第一附屬醫(yī)院檢驗科 鄭州450052 2)第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院檢驗科 重慶400042

#通訊作者，女，1963年1月生，博士，教授，主任技師，研究方向:自身免疫性疾病實驗診斷，E-mail:xingyunerliu@163.com

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種典型的自身免疫性疾病，病因復雜多樣，以產(chǎn)生大量自身抗體尤其是抗核抗體為特征，進而形成免疫復合物沉積在機體各部位，可累及皮膚、神經(jīng)、血液、呼吸等多系統(tǒng)器官。目前臨床上主要根據(jù)SLE 患者病情及并發(fā)癥情況使用糖皮質(zhì)激素和其他免疫抑制劑(如環(huán)磷酰胺和嗎替麥考酚酯等)進行治療。及時系統(tǒng)地對患者外周血淋巴細胞進行檢測，可輔助全面了解患者免疫功能及病情狀況，進而更好地指導臨床用藥。該研究利用流式細胞術，比較分析常用免疫抑制劑治療對SLE 患者淋巴細胞亞群影響情況，進一步揭示免疫抑制劑治療SLE的基本藥理作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2012年6月至2013年7月在鄭州大學第一附屬醫(yī)院住院的SLE 患者83例，其中男10例，女73例，年齡12～66(34.4±2.4)歲。所有患者均符合1982年美國風濕病協(xié)會修訂的SLE 分類標準［1］。根據(jù)患者是否接受免疫抑制劑治療將其分為未治療組和治療組，其中未治療組24例，藥物治療組59例，藥物治療組所有病例均接受不少于2 個月糖皮質(zhì)激素聯(lián)合環(huán)磷酰胺或嗎替麥考酚酯治療。2組患者疾病活動性依照SLE 疾病活動評分標準［2］進行評分，積分＞4 為活動期，積分≤4 為靜止期。治療組中靜止期17例，活動期42例;未治療組中靜止期7例，活動期17例。對照組為鄭州大學第一附屬醫(yī)院門診健康體檢者，30例，其中男5例，女25例，年齡13～66(38.5±2.0)歲。

1.2 試劑和儀器 鼠抗人CD45-PerCP/CD3-FITC/CD4-APC/CD8-PE CD45-PerCP/CD3-FITC/CD16CD 56-PE/CD19-APC、FACS 溶血素均購自美國BD 公司;FACScalibur 流式細胞儀為美國BD 公司產(chǎn)品。

1.3 淋巴細胞亞群檢測方法 清晨以EDTA-K2抗凝管抽取各組受試者空腹靜脈血2 mL 備用。采用四色免洗法檢測外周血淋巴細胞亞群。取試管2支，編號A 和B，取10 μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗體加入A 管中，取10 μL CD3/CD16CD56/CD45/CD19 標記的抗體加入B 管中;在2 支試管中分別加入50 μL 充分混勻的抗凝全血，漩渦混勻，避光放置15 min;然后取出試管各加入500 μL FACS 溶血素，充分混勻，避光放置15 min;充分混勻樣品，用MutiSET 系統(tǒng)進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0 分析數(shù)據(jù)。不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)(P25～P75)表示。未治療組與治療組、SLE組與對照組CD3+T 細胞、CD3+CD4+Th 細胞、CD3+CD4+Th 細胞、CD3+CD8Ts 細胞水平的比較采用兩獨立樣本的t 檢驗;SLE組與對照組、未治療組與治療組間CD3+CD8+Th 細胞與CD3+CD8+Ts 細胞比值(Th/Ts 比值)、CD3－CD19+B 細胞、CD3－CD16+CD56+NK 細胞水平的比較采用Wilcoxon 秩和檢驗。檢驗水準α =0.05。

2 結果

2.1 SLE 患者淋巴細胞亞群水平變化情況 同對照組比較，SLE組CD3+CD8+Ts 細胞增加，CD3+CD4+Th 細胞減少，Th/Ts 比值降低，CD3－CD16+CD56+NK 細胞減少，CD3－CD19+B 細胞增加。見表1。

表1 SLE 患者淋巴細胞亞群水平變化

2.2 聯(lián)合應用糖皮質(zhì)激素和環(huán)磷酰胺或嗎替麥考酚酯對SLE 患者外周血淋巴細胞亞群水平的影響同未治療組相比，治療組SLE 患者CD3+CD4+Th 細胞增加，Th/Ts 比值升高，CD3－CD19+B 細胞降低。見表2。

表2 常用免疫抑制劑對SLE 患者外周血淋巴細胞亞群水平的影響

3 討論

SLE 是一種累及多器官的系統(tǒng)性自身免疫病，遺傳、環(huán)境、雌激素等多重因素參與了該病的發(fā)生發(fā)展，其中T 細胞和B 細胞在SLE 的發(fā)病中起關鍵作用。研究［3］顯示SLE 患者外周血淋巴細胞亞群水平存在明顯異常，且可能同患者是否并發(fā)狼瘡腎炎等相關。該研究結果顯示，同健康對照比較，SLE 患者外周血CD3+CD8+Ts 細胞增加，CD3+CD4+Th 細胞減少，Th/Ts 比值降低，CD3－CD16+CD56+NK 細胞減少，而CD3－CD19+B 細胞增加，說明T 細胞各亞群、NK 細胞和B 細胞失衡參與了SLE 的發(fā)生。

作為常用免疫抑制劑，糖皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺及嗎替麥考酚酯常用于治療SLE 患者，雖然取得不錯的治療效果，但其具體的藥理作用尚未完全闡明，且存在著降低免疫力、易引起感染等不良反應［4］。該研究結果表明經(jīng)過常用免疫抑制劑治療，SLE 患者CD3+CD4+Th 細胞增加，Th/Ts 比值升高，CD3－CD19+B 細胞降低;提示常用免疫抑制劑通過增加Th 細胞來調(diào)整SLE 患者T 細胞亞群分布及總體功能狀態(tài)，同時也通過降低患者外周血B 細胞水平來達到治療SLE 的藥理作用。

T 細胞依據(jù)其表面標志物(CD4 和CD8)及生物學功能可分為Th 細胞和Ts 細胞兩大類:Th 細胞包括Th1 細胞、Th2 細胞、Th17 細胞、Treg 細胞和Tfh細胞等，其各細胞亞群失衡促進了SLE 的發(fā)生及發(fā)展［5-6］。協(xié)同刺激分子SLAM mRNA 在SLE 患者T細胞表達增加，且同疾病活動度呈正比，其對細胞因子的分泌及Th1/Th2 細胞的分化有重要作用［］。Ts 細胞可通過細胞接觸抑制、分泌抗炎癥因子(如IL-10 和CCL-4)和直接殺傷細胞等途徑發(fā)揮免疫抑制作用［8］。該研究結果表明免疫抑制劑治療后SLE患者Th 細胞比例明顯增加，Th/Ts 比值明顯升高，這同以往研究［9-10］結果一致。此外，T 淋巴細胞亞群變化情況還可能與藥物治療的有效性及疾病復發(fā)情況等有關［11］。

B 細胞作為自身抗體產(chǎn)生細胞，在SLE 的發(fā)病機制中起主要作用，此外，B 細胞作為抗原遞呈細胞誘導自身活化T 細胞并通過自分泌和旁分泌方式分泌一系列促炎性細胞因子［12］。研究［13］表明B 細胞可作為治療SLE 的靶點。近來用于治療SLE 的新藥貝利單抗(一種抗Blys 單克隆抗體)即通過阻斷B 細胞亞群進一步發(fā)育成B 細胞及長期生存進而減少自身抗體產(chǎn)生來達到良好的治療作用。Eickenberg 等［14］研究發(fā)現(xiàn)嗎替麥考酚酯可以緩解SLE 患者B 細胞增殖和漿細胞形成，該研究也證實了這一點，即免疫抑制劑治療患者較未治療者外周血B 細胞明顯減少，常用免疫抑制劑可通過減少B細胞來減少自身抗體產(chǎn)生進而治療SLE。

綜上所述，淋巴細胞在SLE 的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，SLE 患者淋巴細胞亞群比例較健康者發(fā)生明顯改變，且T 細胞及其各亞群、B 細胞水平隨免疫抑制劑治療發(fā)生變化。檢測SLE 患者外周血淋巴細胞亞群有利于更全面了解患者整體免疫狀態(tài)及疾病活動情況，進而更好地指導臨床治療。

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