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    藻藍(lán)蛋白分離純化技術(shù)及其影響因素分析*

    2014-12-16 08:04:44趙靜祁巖王月華馮敘橋
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2014年10期
    關(guān)鍵詞:鹽析雙水純度

    趙靜,祁巖,王月華,馮敘橋

    1(渤海大學(xué)食品科學(xué)研究院,遼寧省食品安全重點實驗室,遼寧錦州,121013)

    2(美國加州大學(xué)戴維斯分校環(huán)境毒理系,美國加州戴維斯市,95616)

    3(美國伊利諾伊理工大學(xué)食品安全與健康學(xué)院,美國伊利諾伊州芝加哥市,60616)

    4(沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,遼寧 沈陽,110866)

    藻膽蛋白是藻類特有的捕光色素蛋白,主要可以分為藻紅蛋白、藻藍(lán)蛋白、別藻藍(lán)蛋白和藻紅藍(lán)蛋白。藻藍(lán)蛋白(phycocyanin,PC)是一種深藍(lán)色粉末,它既是蛋白質(zhì)又是良好的天然食用色素,多見于螺旋藻[1]、魚腥藻[2]、地木耳[3]中,其中螺旋藻細(xì)胞中的蛋白質(zhì)含量豐富,PC占總蛋白質(zhì)的7%左右[4]。

    PC具有抗癌、抗氧化、治療腦缺血損傷、提高機(jī)體免疫力等多種生理功能,有關(guān)PC的研究已經(jīng)成為天然海洋藥物的研究熱點[5]。PC的提取分離技術(shù)也成為時下人們所關(guān)注的問題之一。本文對近年來涌現(xiàn)出的PC提取和分離技術(shù)以及影響其分離純化的因素加以整合,并進(jìn)行了論述。

    1 PC的分離純化技術(shù)

    傳統(tǒng)的PC分離提純技術(shù)一般通過超聲、反復(fù)凍融、酶解和高壓均質(zhì)等方法使細(xì)胞裂解獲得PC粗提液,之后將(NH4)2SO4沉淀法與多種色譜層析法結(jié)合使用[6],從而達(dá)到分離純化的目的。此類方法存在步驟繁瑣、蛋白質(zhì)損失量較大、難以規(guī)?;茝V,且高于50%的生產(chǎn)成本用在純化的過程中[7]等缺點。為解決PC純度問題,近幾十年來出現(xiàn)了一系列分離純化PC的技術(shù),其主要目標(biāo)是為了改善PC的品質(zhì),它們的分離提純工藝大致相同,但卻在分離提純時間、成本、回收率、純度等方面各有所長。目前,PC常用的分離純化技術(shù)有鹽析、雙水相萃取、反膠團(tuán)萃取、柱層析等幾種,下面分別對每種方法的特點進(jìn)行介紹。

    1.1 多步鹽析

    鹽析(salting out)是現(xiàn)今蛋白質(zhì)分離純化中較常用的方法,主要通過向蛋白質(zhì)溶液中加入濃的無機(jī)鹽溶液[如(NH4)2SO4或Na2SO4溶液],進(jìn)而使蛋白質(zhì)凝聚而析出。鹽析是一個可逆的過程,不會影響蛋白質(zhì)本身特有的性質(zhì)。隨著蛋白質(zhì)分離技術(shù)的不斷發(fā)展,研究人員對鹽析方法有了新的改良,使之成為更適用于PC提純的方法。

    王巍杰等[8]以鈍頂螺旋藻為材料,對多步鹽析分離純化進(jìn)行了研究。他們采用反復(fù)凍融的方法將藻體細(xì)胞破碎,并將獲得的PC粗體液依次進(jìn)行兩步鹽析、四步鹽析、六步鹽析和多步鹽析,進(jìn)而分析鹽析次數(shù)對PC回收率和純度的影響。兩步鹽析即將PC粗體液分別置于 15%、20%、25%、30%的 4個(NH4)2SO4飽和梯度組中,4℃靜置12 h后離心,取上清液,各組飽和度分別追加至45%、50%、55%、60%,在 4℃溫度下靜置 12 h,離心,沉淀用 PBS(0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液,pH=7,含 0.002 mol/L EDTA,簡稱PBS)溶解后測其吸光度,計算兩步鹽析后PC回收率和純度。四步鹽析即將二步鹽析得到的粗體液分別置于 5%、10%、15% 的 3個(NH4)2SO4飽和梯度組中,4℃下靜置12 h,離心,取上清,各組飽和度分別追加至33%、35%、37%,4℃靜置12 h,離心,沉淀用PBS溶解后測其吸光度,計算四步鹽析后PC的回收率和純度。六步鹽析即將四步鹽析得到的粗體液分別置于20%、23%、25%、27% 的4個(NH4)2SO4飽和梯度組中,4℃靜置12 h,離心,取上清液,各組飽和度分別追加至30%、35%、40%、45%,4℃靜置12 h,離心,沉淀用PBS溶解后測其吸光度,計算六步鹽析后PC的回收率和純度。多次鹽析即將六步鹽析得到的上清液,加入(NH4)2SO4使其飽和度達(dá)到23%,4℃靜置12 h,離心,上清液飽和度追加至35%,4℃靜置12 h,離心,沉淀用PBS溶解后測其吸光度,如此反復(fù)多次。通過對比二步鹽析、四步鹽析、六步鹽析以及多次鹽析(NH4)2SO4飽和度對PC純度和回收率的影響,可分析得知多次分段鹽析的回收率雖然僅有9.66%,但PC 純度高達(dá)3.92。

    一般的鹽析方法主要是先用(NH4)2SO4等鹽類使PC析出,而后再利用層析等方法分離提純蛋白質(zhì),步驟繁瑣,而多步鹽析法通過多次的分離而達(dá)到提純目的,更加簡易方便。

    1.2 雙水相萃取法

    雙水相萃取技術(shù)(aqueous two-phase extraction,ATPE),又稱水溶液兩相分配技術(shù)(partion of two aqueous phase extraction)[9],其原理主要是:在一定濃度下,2種水溶性不同的聚合物或者一種聚合物和無機(jī)鹽的混合溶液體系會自然分成互不相容的兩相,形成雙水相體系,被分離物質(zhì)進(jìn)入雙水相體系后,在表面性質(zhì)、電荷間作用和各種作用力(疏水鍵、氫鍵和離子鍵)等因素的影響下,兩相間的分配系數(shù)不同,導(dǎo)致上下相的濃度不同而達(dá)到分離的目的[10]。雙水相萃取是一種新型的生物分離技術(shù)[11],可用于PC的分離提純。

    劉楊等[12]采用反復(fù)凍融的方法將鈍頂螺旋藻藻體破碎后,將獲得的PC粗提液加入一定量的聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)和無機(jī)鹽中,充分振蕩使成相物質(zhì)溶解,完成了PC在雙水相系統(tǒng)中的分配過程。此雙水相系統(tǒng)靜置一定時間,當(dāng)兩相達(dá)到相分離后,分別抽取上下相的溶液,在波長280、620、650 nm下測吸光度,計算PC的質(zhì)量濃度和純度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),試驗中雙水相萃取分離得到的PC純度為2.1,比采用鹽析沉淀與層析分離相結(jié)合方法分離出的PC純度低 3.4,但其操作簡便[13]。

    對比鹽析的過程,雙水相萃取法不僅節(jié)省了分離提純的時間,簡化了操作步驟,而且處理條件較為溫和,可較好地保持蛋白質(zhì)的活性[14-15]。然而,相比只考慮鹽溶液的鹽析過程來說,雙水相萃取提純PC需要考慮聚合物的濃度、種類、平均分子質(zhì)量等因素,對于環(huán)境的要求較為苛刻。

    1.3 鹽析結(jié)合雙水相萃取提取純化法

    鹽析結(jié)合雙水相萃取法(salting out combined two-aqueous phase extraction)是劉清新等[16]研究出的一種采用鹽析和雙水相萃取相結(jié)合的新型方法。此方法先用飽和度為35% ~75%的(NH4)2SO4溶液沉淀PC,再用飽和度為10% ~30%的(NH4)2SO4除去螺旋藻雜蛋白,而后在雙水相系統(tǒng)中采用8%PEG 4000、16%檸檬酸鈉和4%KCl分離純化鹽析后的PC。即先進(jìn)行(NH4)2SO4的反復(fù)梯度鹽析,而后將反復(fù)鹽析后的PC溶液置于雙水相系統(tǒng)中,達(dá)到分離提純的目的。結(jié)果證明,經(jīng)鹽析結(jié)合雙水相萃取提取純化后的PC純度可達(dá)4.0。

    此方法結(jié)合了2種分離提純PC的方法,雖然步驟較為繁雜,耗時較長,同時要兼顧影響2種方法的因子,但它大大提高了蛋白質(zhì)的純度,同時也為運(yùn)用多種方法分離蛋白質(zhì)提供了一個先例。

    1.4 反膠團(tuán)萃取法

    反膠團(tuán)萃取(reversed micellar extraction)是近年來一種新型的蛋白質(zhì)分離提純方法,它是利用表面活性劑在有機(jī)相中形成的反膠團(tuán)(reversed micelles)形成分散的親水微環(huán)境,從而使生物分子在有機(jī)相(萃取相)內(nèi)存在于反膠團(tuán)親水微環(huán)境中,解決了蛋白質(zhì)類生物活性物質(zhì)難溶解于有機(jī)相中或在有機(jī)相中發(fā)生不可逆變性的問題。由于此方法選擇性高、萃取過程簡單[17],可有效保護(hù)蛋白質(zhì)大分子,因此成為提取PC的新型方法之一。

    甘林火等[3]將地木耳細(xì)胞分離獲PC粗提液,同時將配制好的陽離子十六烷基三甲基溴化銨(cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)反膠團(tuán)溶液與粗提液充分混合、靜置分層,將油水兩相分離(油相為反膠團(tuán)萃取液),抽取上相(油相)溶液并測定其PC含量,向油相中加入不同pH值的無機(jī)鹽KBr溶液,使兩相充分混合,PC達(dá)到分配平衡。再次靜置分層,將油水兩相分離,水相為反膠團(tuán)反萃取液,抽取下相(水相)溶液并測定其PC含量。最終得到了最佳分離條件為0.05 mol/L CTAB/正己醇-正辛烷(體積比1∶4)的反膠團(tuán)體系用于萃取pH=7.0的地木耳細(xì)胞破碎液,PC萃取率可達(dá)98.1%,分配系數(shù)達(dá)到50.7;采用 pH=4.0、3 mol/L KBr反萃液反萃取 PC,反萃率可達(dá)98.5%,其純度可達(dá)16.8。

    劉楊等[18]將加入磷酸緩沖液的螺旋藻粉采用反復(fù)凍融技術(shù)破碎藻體細(xì)胞,獲得藻膽蛋白粗提液,并與CTAB反膠團(tuán)溶液混合后離心,反復(fù)提取水相溶液,在568、620和650 nm下測吸光度,計算PC的含量。此外,劉楊等還分析了鹽離子種類和濃度等對萃取效果的影響。

    利用反膠團(tuán)萃取法提純PC可以有效地防止其變性,蛋白質(zhì)的純度也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過4.0,純度大幅度提高,此類方法可適用于對蛋白質(zhì)純度要求較高的醫(yī)療行業(yè)。

    1.5 殼聚糖親和沉淀-活性炭吸附-DEAE Sephadex A-25柱層析法

    針對傳統(tǒng)PC純化能耗高、損失大、耗時長等缺點,廖曉霞[6]等探究出了殼聚糖親和沉淀-活性炭吸附-DEAE Sephadex A-25柱層析(chitosan affinity precipitation-activated carbon adsorption-DEAE Sephadex A-25 column chromatography)三步法分離純化PC方法(圖1)。通過分析殼聚糖親和沉淀條件,活性炭吸附,DEAE Sephadex A-25凝膠層析洗脫曲線以及PC的光譜特性,得出向PC粗提液中加入0.29%殼聚糖,調(diào)節(jié)pH值至6.9,攪拌5 min后,離心棄沉淀,向上清液中加入80 g/L活性炭吸附5 min,離心、超濾濃縮上清液,采用DEAE Sephadex A-25柱層析法,用10 mmol/L 磷酸鉀緩沖液(pH 6.8)+0.1 ~0.3 mol/L NaCl梯度洗脫得純度達(dá)到4.3的PC。

    此方法所需材料成本低、考慮因素較少、條件溫和、不易使蛋白質(zhì)變性,可適用于工業(yè)化大生產(chǎn),然而相比反膠團(tuán)萃取法提純蛋白質(zhì),其蛋白質(zhì)純度較低。

    圖1 殼聚糖親和沉淀-活性炭吸附-DEAE Sephadex A-25柱層析法提純PC工藝流程Fig.1 Process of phycocyanin purification by chitosan affinity precipitation-activated carbon adsorption-DEAE Sephadex A-25column chromatography

    1.6 離子交換色譜與疏水間相互作用色譜結(jié)合法

    離子交換色譜與疏水間相互作用色譜結(jié)合法(combined ion exchange chromatography and hydrophobic interaction chromatography)是將提取后的PC先后經(jīng)過離子交換色譜法、疏水間相互作用色譜法來進(jìn)一步純化PC。Santiago-Santos等[19]將從稻田中分離的絲狀藍(lán)藻,經(jīng)一定條件培養(yǎng)后離心分離,沉淀懸浮于10 mL 0.1 mol/L、pH=7 磷酸鹽緩沖液中(含有 13.6 mmol/L的EDTA和2 mg單位濕重為2 mg/g溶解酶),懸浮液靜置24.5 h使細(xì)胞破碎,經(jīng)再次離心后獲PC粗提物。粗提物用50 mmol/L pH=7.5 Tris-HCl緩沖液(經(jīng)過PD10柱)平衡,使其可以在相同的條件下進(jìn)行離子交換。進(jìn)行離子交換色譜時,首先將樣品裝入經(jīng)50 mmol/L、pH=7.5的Tris-HCl緩沖液平衡后的Q-Sepharose 4快速流動柱中,用14 mL相同的緩沖液洗脫,吸附的蛋白質(zhì)被10 mL具有線性梯度(0 ~0.6 mol/L)的 NaCl緩沖液(50 mmol/L、pH=7.5的Tris-HCl)洗脫,收集 A620/280檢測后大于1.5的組分與1.3 mol/L的(NH4)2SO4混合,隨后將其裝入用pH=7.5 Tris-HCl緩沖液平衡后的且含有 1.3 mol/L的(NH4)2SO4甲基宏觀準(zhǔn)備柱,用30 mmol/L平衡緩沖液洗脫,蛋白質(zhì)用25 mL含有線性梯度(0 ~1.3 mol/L)的(NH4)2SO4洗脫,收集 A620/280檢測后大于3.5的組分。

    此方法在預(yù)處理過程中未采用反復(fù)凍融法,而是通過生化手段使細(xì)胞破碎,通過增加細(xì)胞的破碎程度來提高回收率。然而,此方法在預(yù)處理方面所需時間較長,純化步驟也較為繁瑣,不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。

    上述主要介紹了近年來研究的6種PC的分離純化方法,這些方法各有優(yōu)勢,也各有不足之處(表1)。在考慮實際應(yīng)用時,需要根據(jù)實際情況,例如是否可以工業(yè)化生產(chǎn)、純化率、回收率等,選用適當(dāng)?shù)姆蛛x提純方法。

    表1 PC分離純化技術(shù)方法對比Table 1 Comparison on advantages and disadvantages of phycocyanin separation and purification technologies

    2 影響PC分離提純的因素

    當(dāng)選用適當(dāng)?shù)腜C分離提取方法時,為達(dá)到盡可能大的回收率、純化率,節(jié)省時間,需要考慮各種影響因子(表2),對每個因子的適用條件加以分析,使其達(dá)到最優(yōu)化的程度,進(jìn)而達(dá)到更好的提純效果。

    2.1 鹽析次數(shù)

    此因素主要影響與鹽析過程有關(guān)的方法,例如多步鹽析法[8]和鹽析結(jié)合雙水相萃取法[16]。王巍杰等[8]在提取PC時進(jìn)行了多次分段鹽析,分析了鹽析次數(shù)對PC回收率和純度的影響。在4次鹽析實驗結(jié)果中得出,隨著鹽析次數(shù)的增多,PC的回收率降低,但PC的純度呈現(xiàn)出先升后降的趨勢,純度在第3次的鹽析操作中(23%除雜,35%沉淀PC)最高,為3.92,表明增加鹽析次數(shù)可在一定程度上提高蛋白質(zhì)的純度,然而過多次數(shù)的鹽析則會適得其反,因此需要經(jīng)多次試驗找出最適的鹽析次數(shù),使PC純度的達(dá)到峰值。

    2.2 聚合物平均分子質(zhì)量

    此因素主要影響與雙水相萃取過程有關(guān)的方法,例如雙水相萃取法[12]和鹽酸結(jié)合雙水相萃取法[16]。PEG的平均分子質(zhì)量極大程度地影響著雙水相體系的平衡。劉楊等[12]選用了平均分子質(zhì)量分別為600、1 000、2 000、4 000、6 000,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 10% 的PEG,觀察溶液的分層情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在PEG分子質(zhì)量為4 000時,溶液開始出現(xiàn)分層現(xiàn)象。因此,在相同的聚合物和無機(jī)鹽濃度下,PEG平均分子質(zhì)量低的溶液不能形成雙水相體系,PEG分子質(zhì)量越大,越容易形成雙水相體系,但PEG分子質(zhì)量過大,不會對PC純度有明顯的提高作用。

    2.3 表面活性劑的濃度

    此因素主要影響反膠團(tuán)萃取法的提純效率。劉楊等[18]采用濃度分別為 0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mol/L的CATB陽離子表面活性劑,從PC的萃取現(xiàn)象、萃取率、分配系數(shù)、分離因數(shù)方面分析表面活性劑濃度對反膠團(tuán)萃取PC的影響。通過實驗可知,隨著CATB濃度的增加,油水液面變得逐漸清晰,PC的萃取率和分配系數(shù)都在逐漸增加,CATB濃度在0.04 mol/L最好,然而分離因數(shù)的變化卻不顯著。而且,當(dāng)CTAB濃度增加到一定程度(高于0.05 mol/L)時,有機(jī)相黏度增大的程度會影響油水兩相的分層速度,因此在利用反膠團(tuán)萃取法萃取PC時,0.04 mol/L為較適合的陽離子活性劑濃度。

    2.4 活性炭加入量

    該因素主要針對殼聚糖親和沉淀-活性炭吸附-DEAE Sephadex A-25柱層析法對PC的提純效果。廖曉霞等[6]的研究表明,活性炭可用來純化PC。實驗表明,用活性炭處理PC粗提液5 min,即可達(dá)到純化PC的目的,但處理時間的過度延長,不但不能進(jìn)一步提高PC的純度,反而較大程度地影響了PC的得率。為進(jìn)一步研究出活性炭加入量對藍(lán)藻蛋白提純效果的影響,他們采用濃度分別為20、40、60、80、100 g/L的活性炭,分析PC的得率和純度。結(jié)果表明,隨著活性炭濃度的增加,PC的得率逐漸降低,純度則呈現(xiàn)一個峰值。因此,在考慮了PC的得率和純度因素后,活性炭的最適濃度選擇為出現(xiàn)純度峰值時所對應(yīng)的活性炭濃度(80 g/L)。

    表2 PC分離提取方法及其主要影響因素Table 2 Main influencing factors of phycocyanin separation and purification technologies

    3 現(xiàn)有問題與建議

    盡管人們對于PC有了一定的關(guān)注,研究人員也研制出了多種提純方法來滿足人們對于PC的需要,但目前我國對PC分離提取方法的研究還不夠完善,主要表現(xiàn)在以下幾點:

    (1)現(xiàn)有PC分離提純技術(shù)在產(chǎn)品安全方面有待完善。近年來,由于工業(yè)廢水造成的環(huán)境重金屬污染,例如鉻污染以及水體富營養(yǎng)化造成的有毒藻類污染、微囊藻毒素污染,使藻類原料面臨著重金屬和藍(lán)藻毒素污染的風(fēng)險[27-30],對PC的質(zhì)量造成威脅。然而,在PC的分離提純中,鮮有去除重金屬、藻類毒素的考量和相關(guān)檢驗等工序,這給PC的使用安全性,特別是醫(yī)療保健和化妝品等行業(yè),無法提供完全的保障。因此,在將來的PC分離純化技術(shù)研究中,要這種解決重金屬和藍(lán)藻毒素污染去除的問題。

    (2)提取PC時所用的化學(xué)試劑得不到較好處理,造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染。例如,在PC的提純過程中研究人員可能用到(NH4)2SO4試劑,如處理不當(dāng)排入水中,會造成氨氮污染。2009年《中國環(huán)境統(tǒng)計年報》顯示,我國廢水中的氨氮排放總量已達(dá)122.6萬t,相當(dāng)于受納水體環(huán)境容量的4倍左右。其中化工等以高濃度氨氮廢水為主的8個行業(yè)的氨氮排放量占全國工業(yè)氨氮排放總量的85.9%。水中氨氮在一定條件下可轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽,如果長期飲用,水中的亞硝酸鹽將和蛋白質(zhì)結(jié)合成亞硝胺,亞硝胺是一種強(qiáng)致癌物質(zhì),嚴(yán)重影響人體健康[31]。因此,要特別注意提取技術(shù)的應(yīng)用,不能造成環(huán)境水體污染。

    (3)現(xiàn)有PC分離純化技術(shù)的產(chǎn)品品質(zhì)不理想。例如,現(xiàn)在常用的多步鹽析法,雖節(jié)省操作成本,但回收率卻較低;雙水相萃取法雖然萃取條件溫和,但不易與聚合物分離。由此可見,每一種方法都有其優(yōu)勢,同時存在不足之處,進(jìn)而影響提純PC的品質(zhì)。

    針對上述3個方面問題,建議從下述3個途徑加以解決:

    (1)研究人員應(yīng)該注重改善水體中氮、磷的營養(yǎng)結(jié)構(gòu),抑制有毒藻類的生長方法的研究[31],研究對諸如重金屬和藍(lán)藻毒素等易摻入PC中的有害物質(zhì)的特殊有效的檢測方法,例如高效液相色譜檢測或酶聯(lián)免疫吸附檢測[33],以進(jìn)一步提高PC的純度,保證PC質(zhì)量安全性。同時,要讓人們正確認(rèn)識PC的成本與價格的關(guān)系,對價格低廉的PC,人們應(yīng)注意其純度和添加物。

    (2)加大對相關(guān)化學(xué)藥品的回收處理力度,加強(qiáng)對回收化學(xué)藥品有效處理方法的研究,嚴(yán)禁私自將化學(xué)試劑傾倒入河流湖泊,對于工業(yè)用或化學(xué)用藥品要預(yù)先做好方案規(guī)劃,進(jìn)行多部門的綜合監(jiān)督和多學(xué)科參與的研究,避免環(huán)境污染和資源浪費(fèi)[34]。

    (3)研究開發(fā)新技術(shù),鼓勵研究人員對蛋白質(zhì)提純方法的創(chuàng)新??蓪⒉煌牡鞍踪|(zhì)技術(shù)提純方法組合,彌補(bǔ)相互缺陷,達(dá)到更大地提高蛋白質(zhì)純度的目的。例如王巍杰等[8]采用多步鹽析法獲得的PC的純度為3.92,而劉清新等[16]采用鹽析結(jié)合雙水相萃取法純度可達(dá)4.0。

    4 展望

    PC有著多重作用,它可以作為天然色素,應(yīng)用于食用工業(yè)和化妝品行業(yè)中;可以作為醫(yī)藥保健用品,起到抗氧化、消炎等功效;也可以因其熒光特性而作為生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等學(xué)科的研究試劑,應(yīng)用前景十分廣闊。此外,我國幅員遼闊,淡水藻類資源豐富,PC生產(chǎn)有著充足的原料來源。然而,僅僅有豐富的資源還不夠,一方面,市場內(nèi)高純度的PC已被國外壟斷,其售價極高,例如食品級的PC(純度高于0.7)售價達(dá)到0.13 US$/mg,分析級的PC(純度高于4.0)售價達(dá)到15 US$/mg;另一方面,我國對于PC的研究開發(fā)大都處于實驗室水平,其成熟的工藝技術(shù)還需要一段時間的研究探索[35-37]。因此,還需要加大分離提純方法的研究力度,從提純技術(shù)方法組合、儀器設(shè)備使用、環(huán)境保護(hù)、PC質(zhì)量安全和PC質(zhì)量保證[38]等方面盡快研究出既可以提高純度、加大回收率、節(jié)省時間,又可以節(jié)約成本、適合于工廠化生產(chǎn)的最優(yōu)化方法。

    [1] 尹興娟,唐愛國,劉繼憲,等.藻藍(lán)素的提取及其光學(xué)性質(zhì)的研究[J].應(yīng)用化工,2010,39(4):484-490.

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