貴州省煙蚜抗藥性監(jiān)測

劉童童，韋興啟，周在軍，張西仲，唐興貴，楊 洪*

(1.貴州省山地農(nóng)業(yè)病蟲害重點實驗室，貴州大學(xué)昆蟲研究所，貴陽 550025;2.黔南州煙草公司長順縣分公司，貴州長順 551300)

煙蚜Myzus persicae(Sulzer)又名桃蚜，屬半翅目Hemiptera 蚜科Aphidiade 瘤蚜屬Myzus 是世界性害蟲，會直接和間接對多種植物造成傷害(Blackman and Eastop，2000)，也是我國烤煙大田生產(chǎn)期的主要害蟲之一，煙蚜除吸取煙株汁液引起植株營養(yǎng)不良及生長畸形造成直接危害外，還可傳播煙草黃瓜花葉病毒(CMV)、馬鈴薯Y 病毒(PVY)等多種煙草病毒病，對煙草造成更為嚴(yán)重的間接危害(魏崇榮，1983;杜進平和王蘭珍，1991;秦?zé)ň蘸屯豕鸱遥?996)。雖然一直以來都提倡環(huán)境兼容性的治理方法(Carver，1987;Edelson et al.，2002;Karagounis et al.，2006)，但是世界范圍內(nèi)的煙蚜防治依然以化學(xué)防治為主，殺蟲劑的大量使用，不僅增加了防治成本，污染了生態(tài)環(huán)境，而且造成煙葉殺蟲劑殘留，嚴(yán)重影響了煙葉的品質(zhì)。現(xiàn)已有多例煙蚜對殺蟲劑產(chǎn)生了抗性的報道(張桂林，1982;John et al.，2007;Lakshmipathi et al.，2010)，煙蚜抗藥性的產(chǎn)生導(dǎo)致化學(xué)防治效果顯著降低。通過交互抗性的測定可以明確抗性水平及其分布，明確重點保護的藥劑類別及品種，對整個治理方案的治理效果提供評估(Ozaki，1983)。本文檢測了貴州6個主要煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平，并進行了交互抗性的測定，以期為生產(chǎn)上合理使用殺蟲劑防治煙蚜和煙蚜的抗性治理提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)方法

敏感品系煙蚜種群采自長順縣馬路鄉(xiāng)煙葉生產(chǎn)基地，實驗室內(nèi)不接觸任何藥劑的情況下已連續(xù)飼養(yǎng)5年。監(jiān)測種群:于2013年7月采自于貴州省德江川巖、長順改堯、麻江濫壩、湄潭抄樂、清鎮(zhèn)流長和興仁四聯(lián)共6個煙區(qū)的煙蚜種群。飼養(yǎng)條件:溫度:(25±1)℃、相對濕度:60%-70%、光周期14 L∶10 D。

1.2 供試殺蟲劑

40%滅多威可濕性粉劑(泰山現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司)，5%啶蟲脒乳油(河北野田農(nóng)用化學(xué)有限公司)，25 g/L 溴氰菊酯乳油(拜耳作物科學(xué)有限公司)，70%吡蟲啉水分散粒劑(華北制藥集團愛諾有限公司)，2%阿維菌素乳油(河北野田農(nóng)用化學(xué)有限公司)，40%樂果乳油(重慶農(nóng)藥化工集團有限公司)共計6種殺蟲劑。

1.3 毒力測定

采用聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)推薦的浸漬法進行毒力測定(R.Busvie.FAO，1980)。根據(jù)預(yù)實驗的結(jié)果將6種殺蟲劑從高到低稀釋成5個濃度梯度，另設(shè)蒸餾水為對照，將帶有煙蚜的煙葉浸入準(zhǔn)備好的藥液中10 s，取出后用吸水紙將葉片上的藥液吸去，并用毛筆將大小均勻(4 齡期若蚜和無翅成蚜)的煙蚜挑到準(zhǔn)備好的葉片上，放入直徑為15 cm 的培養(yǎng)皿中并用紗布和橡皮筋封好后罩上外皿，防止煙蚜逃逸，每個濃度設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)處理煙蚜30 頭，24 h 后檢查死亡率，調(diào)查時用毛筆觸動蚜蟲，不動視為死亡。實驗結(jié)果采用Microsoft Excel2007 和SPSS16.0 軟件進行統(tǒng)計分析，擬合毒力回歸方程(y=a+bx)，并計算相關(guān)系數(shù)(r)、致死中濃度(LC50)及其95%的置信區(qū)間等值。

結(jié)合我國對棉蚜等害蟲的抗性程度分級標(biāo)準(zhǔn):抗性指數(shù)小于3 仍處于敏感階段，3-5 為敏感性降低階段，5-10 為低抗，10-40 為中抗，40-160 為高抗，大于160 為極高抗(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，1991)。對各地?zé)熝练N群進行抗性分級。

1.4 交互抗性

對各煙蚜種群進行編號:麻江濫壩煙蚜種群(1 號)、清鎮(zhèn)流長煙蚜種群(2 號)、湄潭抄樂煙蚜種群(3 號)、德江川巖煙蚜種群(4 號)、長順改堯煙蚜種群(5 號)、興仁四聯(lián)煙蚜種群(6號)、相對敏感煙蚜種群(7 號)。根據(jù)煙蚜相對敏感種群的毒力測定結(jié)果，6種殺蟲劑均選擇能殺死相對敏感種群95%的劑量，運用與1.3 相同的方法對各煙蚜種群進行毒力測定，24 h 后檢查試蟲存活率。將不同藥劑處理各煙蚜種群的存活率按編號順序，繪制存活率順序變化曲線圖，再計算不同藥劑處理各煙蚜種群存活率順序變化的相關(guān)性，以是否相關(guān)確定交互抗性的有無，最后計算有交互抗性的殺蟲劑處理煙蚜種群的平均存活率與敏感種群平均存活率之差，根據(jù)下式計算交互率(韓召軍等，1990):

式中:(BR-BS)＞(AR-AS)

AR和BR分別為A、B 兩種藥劑處理抗性種群的平均存活率;

AS和BS分別為A、B 兩種藥劑處理敏感種群的平均存活率;

rAB為A、B 兩種藥劑處理各煙蚜種群存活率順序變化的相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 煙蚜相對敏感品系毒力測定

通過6種殺蟲劑對煙蚜相對敏感品系的毒力測定，得到了6種殺蟲劑的毒力方程和致死中濃度(見表1)。滅多威、啶蟲脒、溴氰菊酯、吡蟲啉、阿維菌素、樂果6種殺蟲劑對相對敏感品系煙蚜的致死中濃度分別為:93.974 mg/L、5.606 mg/L、3.072 mg/L、9.635 mg/L、2.387 mg/L、62.861 mg/L。

表1 6種殺蟲劑對煙蚜相對敏感品系的毒力測定Table 2 Toxicity determination of six insecticides on susceptible Myzus persicae

2.2 貴州6個煙區(qū)煙蚜種群的抗性水平

檢測了貴州6個煙區(qū)煙蚜種群對6種常用殺蟲劑的抗性水平，根據(jù)表1 中煙蚜相對敏感品系對6種殺蟲劑的致死中濃度LC50值，計算出各煙區(qū)煙蚜種群對各種殺蟲劑的抗性指數(shù)，并根據(jù)檢測結(jié)果，6個煙區(qū)煙蚜種群的抗性指數(shù)和抗性程度情況如下。

2.2.1 德江煙區(qū)

測試結(jié)果表明，該煙區(qū)煙蚜種群對滅多威及樂果表現(xiàn)為低抗，對溴氰菊酯及吡蟲啉表現(xiàn)為抗性降低的情況，對啶蟲脒及阿維菌素表現(xiàn)敏感(表2)。

表2 德江煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平Table 2 Resistance of Myzus persicae to six insecticides in Dejiang

2.2.2 長順煙區(qū)

測試結(jié)果表明，該煙區(qū)煙蚜種群對阿維菌素表現(xiàn)為低抗，對樂果表現(xiàn)為抗性降低的情況，對滅多威、啶蟲脒、溴氰菊酯及吡蟲啉表現(xiàn)為敏感(表3)。

2.2.3 麻江煙區(qū)

測試結(jié)果表明，該煙區(qū)煙蚜種群對樂果表現(xiàn)為抗性降低的情況，對滅多威、啶蟲脒、溴氰菊酯、吡蟲啉及阿維菌素表現(xiàn)為敏感(表4)。

2.2.4 湄潭煙區(qū)

測試結(jié)果表明，該煙區(qū)煙蚜種群對滅多威、樂果表現(xiàn)為低抗，對啶蟲脒表現(xiàn)為抗性降低的情況，對溴氰菊酯、吡蟲啉及阿維菌素表現(xiàn)為敏感(表5)。

表3 長順煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平Table 3 Resistance of Myzus persicae to six insecticides in Changshun

表4 麻江煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平Table 4 Resistance of Myzus persicae to six insecticides in Majiang

表5 湄潭煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平Table 5 Resistance of Myzus persicae to six insecticides in Meitan

2.2.5 清鎮(zhèn)煙區(qū)

測試結(jié)果表明，該煙區(qū)煙蚜種群對樂果表現(xiàn)為低抗，對滅多威、啶蟲脒、溴氰菊酯、吡蟲啉及阿維菌素表現(xiàn)為敏感(表6)。

2.2.6 興仁煙區(qū)

測試結(jié)果表明，該煙區(qū)煙蚜種群對溴氰菊酯、樂果表現(xiàn)為抗性降低的情況，對滅多威、啶蟲脒、吡蟲啉及阿維菌素表現(xiàn)為敏感(表7)。

表6 清鎮(zhèn)煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平Table 6 Resistance of Myzus persicae to six insecticides in Qingzhen

表7 興仁煙區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑的抗性水平Table 7 Resistance of Myzus persicae to six insecticides in Xingren

2.3 貴州6 煙區(qū)煙蚜種群對殺蟲劑的交互抗性

6種殺蟲劑處理7個煙蚜種群的存活率順序變化曲線如圖1 所示，從圖中的存活率變化曲線可以看出:經(jīng)吡蟲啉與阿維菌素處理的7個煙蚜種群存活率相差較小，且存活率都較低，說明各煙蚜種群對吡蟲啉與阿維菌素的抗性水平較低;各煙蚜種群用啶蟲脒和樂果處理后，兩者的存活率曲線變化情況比較接近，且2-4 號煙蚜種群的存活率普遍高于其它煙蚜種群;滅多威處理后，3、4 號煙蚜種群存活率明顯高于其它種群;溴氰菊酯處理后4、6 號煙蚜種群存活率最高，其次為3、5號種群，1、2、7 號三個種群的存活率相差不大。

為了在一定概率的保證下確定它們之間的交互抗性，統(tǒng)計不同藥劑處理后各煙蚜種群存活率順序變化與殺蟲劑相互間的相關(guān)性(見表8)?？梢钥闯鰷缍嗤c啶蟲脒、滅多威與吡蟲啉、滅多威與樂果、吡蟲啉與樂果相關(guān)性顯著，啶蟲脒與樂果相關(guān)性極顯著，它們間有交互抗性，而其他殺蟲劑處理各煙蚜種群的存活率無顯著相關(guān)性，故它們間沒有交互抗性。

計算6種殺蟲劑處理各煙蚜種群的平均存活率，統(tǒng)計抗性種群和敏感種群各自的平均存活率，以及抗性種群與敏感種群平均存活率的差值(見表9)。然后根據(jù)公式計算出具有交互抗性的五組藥劑間的交互率(見表10)，可以發(fā)現(xiàn)啶蟲脒與樂果的交互率最高，達到77.46%，滅多威與吡蟲啉的交互率最低，為30.11%。這與不同殺蟲劑處理各煙蚜種群的存活率相關(guān)系數(shù)的結(jié)果相符，并且體現(xiàn)了圖1 中煙蚜種群存活率的變化情況。

圖1 6種殺蟲劑處理7個煙蚜種群的存活率變化曲線Fig.1 Survival rate of seven Myzus persicae treated by six insecticides

表8 不同殺蟲劑處理的各煙蚜種群的存活率相關(guān)系數(shù)Table 8 Correlation coefficient of survival rate of Myzus persicae treated by different insecticides

表9 不同殺蟲劑處理的各煙蚜種群的平均存活率Table 9 Survival rate of Myzus persicae treated by different insecticides

表10 不同殺蟲劑間的交互率Table 10 Cross-resistance ratio among different insecticides on Myzus persicae

3 結(jié)論與討論

要進行煙蚜抗藥性測定，監(jiān)測貴州煙蚜抗性水平，敏感毒力基線的確立至關(guān)重要。然而，在實驗過程中要找到絕對敏感品系煙蚜是不現(xiàn)實的，所以只能尋找相對敏感品系。國內(nèi)研究煙蚜的敏感種群時，一般都選擇河北廊坊桃蚜或甘肅宕昌桃蚜作為敏感種群(高希武等，1992;胡冠芳等，2004)。但是不同地域煙蚜的抗性是有差別的，在實際研究當(dāng)中應(yīng)當(dāng)自行選育本地敏感品種(劉筱兵和劉長明，2008)，因此本研究不以河北廊坊桃蚜或甘肅宕昌桃蚜作為敏感種群，而是利用本實驗室飼養(yǎng)的貴州省長順縣馬路鄉(xiāng)煙葉基地的煙蚜種群(韋興啟等，2013)，并在實驗室連續(xù)飼養(yǎng)了5年作為研究抗藥性的敏感種群。宋春滿等(2006)篩選的煙蚜敏感品系對滅多威、溴氰菊酯的LC50分別為80.3 mg/L、1.1 mg/L，與本實驗所得的93.974 mg/L、3.072 mg/L 差別不大。韋興啟等(2013)測定煙蚜敏感品系對滅多威、吡蟲啉、樂果、阿維菌素的 LC50分別為82.39 mg/L、16.14 mg/L、39.45 mg/L、5.89 mg/L，與本實驗所得結(jié)果差別不大。因此，本實驗所選擇的煙蚜敏感品系可以作為監(jiān)測貴州省煙蚜抗藥性的對照。

通過監(jiān)測貴州主要煙區(qū)的煙蚜種群對煙葉生產(chǎn)中常用的6種殺蟲劑的抗性水平，結(jié)果表明，湄潭煙區(qū)煙蚜種群對滅多威的抗性指數(shù)為5.05，其余5 煙區(qū)煙蚜種群均處于低抗以下水平;長順煙區(qū)煙蚜種群對阿維菌素的抗性指數(shù)為6.043，其余5 煙區(qū)煙蚜種群均處于敏感水平;德江、湄潭和清鎮(zhèn)煙區(qū)煙蚜對樂果的抗性指數(shù)分別為6.666、6.946 和7.568，其余3 煙區(qū)均處于敏感性下降階段;6 煙區(qū)煙蚜種群對啶蟲脒、溴氰菊酯和吡蟲啉均處于低抗以下水平。宋春滿等(2006)測定了云南5個主要煙區(qū)的煙蚜抗藥性，結(jié)果顯示5個種群煙蚜對滅多威和溴氰菊酯均處于低抗以下水平，這與貴州主要煙區(qū)煙蚜抗藥性水平相近。劉筱兵等(2008)測定的福建3個煙區(qū)煙蚜抗藥性結(jié)果顯示，南平煙蚜種群對滅多威與啶蟲脒處于中抗水平，其余兩個煙區(qū)處于低抗及低抗以下水平;3個煙區(qū)煙蚜對吡蟲啉均處于低抗及低抗以下水平。福建主要煙區(qū)煙蚜對滅多威與啶蟲脒抗性明顯高于貴州，兩省主要煙區(qū)煙蚜對吡蟲啉的抗性情況相近?？偟膩碚f，貴州地區(qū)煙蚜種群對6種殺蟲劑表現(xiàn)為低抗及低抗以下水平，并且大部分處于敏感性下降及相對敏感的階段，這與顧春波等(2006)報道的貴州煙蚜的抗性監(jiān)測結(jié)果基本一致。因此，貴州主要煙區(qū)在防治煙蚜為主的煙草害蟲時，應(yīng)盡量避免使用樂果，同時注意殺蟲劑的合理使用，以盡量延緩煙蚜產(chǎn)生抗藥性。

表現(xiàn)交互抗性的藥劑，實際上是抗性機理相似的藥劑。因此無論在哪個種群內(nèi)，只要對一種藥劑表現(xiàn)抗性，對另一種也就會表現(xiàn)出抗性(韓召軍等，1990)。根據(jù)供試殺蟲劑的種類及性質(zhì)，并結(jié)合交互抗性的測定結(jié)果可以看出:煙蚜種群對滅多威產(chǎn)生抗性后，會對有機磷類殺蟲劑樂果、新煙堿類殺蟲劑吡蟲啉和啶蟲脒產(chǎn)生交互抗性，同時煙蚜種群對樂果產(chǎn)生抗性后，同樣會對吡蟲啉與啶蟲脒產(chǎn)生交互抗性。因此，在防治煙蚜過程中盡量選擇無交互抗性的非同類殺蟲劑輪換使用，以延緩煙蚜抗性發(fā)展，延長殺蟲劑使用壽命。

貴州是我國主要煙葉生產(chǎn)大省，本文監(jiān)測點還不完全代表全省的抗藥性現(xiàn)狀，應(yīng)選擇有代表性的地區(qū)建立監(jiān)測點進行系統(tǒng)監(jiān)測，進行全省煙區(qū)的抗藥性普查，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果，明確煙草害蟲煙蚜的抗藥性現(xiàn)狀、交互抗性范圍，從而進一步篩選出高效、低毒、對產(chǎn)品無污染的殺蟲劑，制定正確的技術(shù)規(guī)程，合理統(tǒng)籌安排防治藥劑，科學(xué)用藥，通過這一系列措施延緩煙蚜抗性發(fā)展。

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