響應(yīng)面法優(yōu)化超聲輔助提取野木瓜多酚工藝

夏 季，鄭 炯，2，3，陳光靜，王曉靜，闞建全，2，3，*

(1．西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶400715;2．重慶市農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400715;3．農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(重慶)，重慶400715)

野木瓜(Stauntonia chinensis)屬薔薇科野木瓜屬植物，果無蒂，果成熟后，香氣濃郁，在我國分布廣，資源豐富，能人工栽培，但利用率較低［1-2］。野木瓜中含有豐富的多酚類物質(zhì)［3］，主要包括黃酮類、酚酸、單寧、芪類和木脂素類等物質(zhì)［4］，具有抗炎、抗菌、抗癌、抗過敏、抗氧化、預(yù)防糖尿病、肥胖和心血管疾病等作用，可作為功能食品的有效成分［5-12］。相關(guān)研究表明，黃酮類物質(zhì)能有效預(yù)防人和動(dòng)物的增齡性認(rèn)知能力衰退和神經(jīng)退行性變［13］。近年來，植物多酚因其在人體健康方面的積極作用已成為研究熱點(diǎn)［14］，但國內(nèi)外關(guān)于野木瓜的研究主要集中在野木瓜中的多糖［15-17］和皂苷成分［18-24］、野木瓜產(chǎn)品開發(fā)［25-26］及野木瓜的藥理作用［27］，關(guān)于野木瓜多酚的報(bào)道較少。對(duì)野木瓜中的多酚物質(zhì)進(jìn)行提取并用于保健食品的開發(fā)具有十分廣闊的市場(chǎng)前景。

超聲波提取法是利用超聲波的機(jī)械破損和空化作用，以期達(dá)到縮短浸提時(shí)間的效果，該方法具有提取溫度低、得率高、操作簡(jiǎn)便快捷、提取物結(jié)構(gòu)不易被破壞等特點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于多種天然植物資源如茶葉［28］、葡萄［29］、石榴［30］、玉米［31］、板栗［32］、蘋果［33］中多酚的提取，但其對(duì)野木瓜多酚的提取研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬采用超聲波提取法提取野木瓜多酚，運(yùn)用Folin-Ciocalteu法測(cè)定野木瓜多酚的得率，并在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，得到野木瓜多酚提取的最佳工藝條件，以期為野木瓜多酚的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

重慶綦江吹角村的野木瓜，粉碎后得野木瓜粉備用。石油醚、丙酮、鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰(均為分析純) 成都金山化學(xué)試劑有限公司;無水碳酸鈉(分析純) 重慶川東化工(集團(tuán))有限公司化學(xué)試劑廠;沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品 美國Sigma公司。

DD-5000型立式低速離心機(jī) 成都彼岸生物科技有限責(zé)任公司;DY-10-200DT型超聲波清洗器 重慶東悅儀器有限公司;HHS-24電熱恒溫水浴鍋 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;RE-5220旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 重慶東悅儀器有限公司;SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵 鄭州長城科工貿(mào)有限公司;UV-2450紫外可見分光光度計(jì) 日本島津;WF130萬能粉碎機(jī) 江陰市天元藥化機(jī)械有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 向100mL容量瓶中精確加入沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0．010g，用蒸餾水溶解并定容至 100mL。分別吸取 0．1、0．2、0．3、0．4、0．5mL 上述標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到10mL容量瓶中，添加1mL事先制備好的Folin-ciocalten試劑［34］，搖勻后，加入15%Na2CO3溶液2mL，用蒸餾水定容至刻度線。室溫下反應(yīng)2h，于765nm 波長下測(cè)定吸光度值［35］，以沒食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．2．2 野木瓜多酚的提取與測(cè)定 準(zhǔn)確稱取1．0g野木瓜粉，按一定料液比加入一定體積分?jǐn)?shù)的丙酮溶液后，于一定時(shí)間和溫度條件下超聲處理，然后以4000r/min離心提取液8min，收集上層清液，重復(fù)離心兩次，合并兩次離心所得上層清液，再40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，收集殘留物并定容至25mL棕色容量瓶中待測(cè)［36］。

向10mL容量瓶中依次準(zhǔn)確加入0．1mL待測(cè)提取液、1mL Folin-Ciocalteu 試劑、2mL 15%Na2CO3溶液，用蒸餾水定容至刻度線，搖勻后室溫下反應(yīng)2h，于765nm波長下測(cè)定吸光度值，根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算其對(duì)應(yīng)的多酚質(zhì)量濃度，根據(jù)下式計(jì)算多酚得率:

式中:C為待測(cè)提取液中多酚的質(zhì)量濃度，mg/mL;N為稀釋倍數(shù);V為待測(cè)提取液定容后體積，mL;m為野木瓜粉質(zhì)量，g。

1．2．3 單因素實(shí)驗(yàn)

1．2．3．1 超聲時(shí)間對(duì)野木瓜多酚得率的影響 固定丙酮體積分?jǐn)?shù)60%，料液比1∶16，提取溫度50℃，超聲功率100W，分別采用 10、20、30、40、50min 的超聲時(shí)間提取多酚，平行實(shí)驗(yàn)3次，測(cè)定多酚得率。

1．2．3．2 超聲溫度對(duì)野木瓜多酚得率的影響 固定丙酮體積分?jǐn)?shù)60%，料液比1∶16，提取時(shí)間30min，超聲功率100W，分別采用40、50、60、70、80℃的超聲溫度提取多酚，平行實(shí)驗(yàn)3次，測(cè)定多酚得率。

1．2．3．3 丙酮體積分?jǐn)?shù)對(duì)野木瓜多酚得率的影響固定料液比1∶16，提取溫度60℃，提取時(shí)間30min，超聲功率100W，分別采用體積分?jǐn)?shù)為50%、60%、70%、80%、90%的丙酮溶液提取多酚，平行實(shí)驗(yàn)3次，測(cè)定多酚得率。

1．2．3．4 料液比對(duì)野木瓜多酚得率的影響 固定丙酮體積分?jǐn)?shù)60%，超聲溫度60℃，超聲時(shí)間30min，超聲功率 100W，分別采用 1∶8、1∶10、1∶12、1∶16、1∶20的料液比提取多酚，平行實(shí)驗(yàn)3次，測(cè)定多酚得率。

1．2．4 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 分別以超聲時(shí)間(A)、超聲溫度(B)、丙酮體積分?jǐn)?shù)(C)、料液比(D)為變量，研究單因素對(duì)野木瓜多酚得率的影響，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用Box-Behnken設(shè)計(jì)，通過響應(yīng)曲面分析優(yōu)化野木瓜多酚提取的工藝條件。實(shí)驗(yàn)的因素水平編碼表見表1。

表1 響應(yīng)面分析因素和水平表Table 1 Factors and levels of response surface experiment

1.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

利用 Design-Expert 8．0．5 軟件進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)和分析，采用ORIGIN 8．6進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 y=15．33x-0．0115，式中 x 為沒食子酸質(zhì)量濃度(mg/mL)，y為吸光度，R2=0．9994。

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2．2．1 超聲時(shí)間對(duì)野木瓜多酚得率的影響 由圖1可知，野木瓜多酚得率隨超聲時(shí)間的延長先增加后減少，在超聲提取30min時(shí)達(dá)到最大，之后降低，其原因可能是超聲時(shí)間過長使細(xì)胞內(nèi)溫度升高，以及多酚暴露在空氣中時(shí)間的延長，使得多酚發(fā)生氧化、縮合、降解等反應(yīng)的概率增加，導(dǎo)致野木瓜多酚的表觀得率下降［32，37-38］。因此，選取 30min 作為較佳超聲時(shí)間。

2．2．2 超聲溫度對(duì)野木瓜多酚得率的影響 由圖2可知，野木瓜多酚得率隨超聲溫度的升高先增加后減少，當(dāng)超聲溫度升高到60℃時(shí)，野木瓜多酚得率達(dá)到最大，隨后開始下降。其原因是超聲溫度的升高加劇分子的運(yùn)動(dòng)，使多酚更容易滲出，但過高的溫度會(huì)破壞多酚的結(jié)構(gòu)，降低野木瓜多酚的得率。因此，選取60℃為較佳提取溫度。

圖1 超聲時(shí)間對(duì)野木瓜多酚提取的影響Fig．1 Effects of extraction time on the extraction of polyphenols from Stauntonia chinensis

圖2 超聲溫度對(duì)野木瓜多酚提取的影響Fig．2 Effects of extraction temperature on the extraction of polyphenols from Stauntonia chinensis

2．2．3 丙酮體積分?jǐn)?shù)對(duì)野木瓜多酚得率的影響 由圖3可以看出，隨著丙酮體積分?jǐn)?shù)的增加，總酚得率先增加后減小，丙酮體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)提取效果最佳。這是由于多酚是水溶性物質(zhì)，根據(jù)相似相溶原理，提取多酚需使用與多酚極性相似的溶劑以使其充分溶出［39］。多酚在植物體內(nèi)常以氫鍵的形式與蛋白質(zhì)等形成穩(wěn)定復(fù)合物，過低體積分?jǐn)?shù)的丙酮不足以使氫鍵破壞或破壞程度不夠，導(dǎo)致多酚得率不高［40］;過高體積分?jǐn)?shù)的丙酮使溶劑極性降低，導(dǎo)致多酚得率下降，并且丙酮體積分?jǐn)?shù)過高會(huì)增加脂溶性物質(zhì)的溶出［41］，不利于后續(xù)多酚的分離純化。因此，確定丙酮體積分?jǐn)?shù)為60%。

圖3 不同體積分?jǐn)?shù)的丙酮對(duì)野木瓜多酚提取的影響Fig．3 Effects of different concentrations of acetone on the extraction of polyphenols from Stauntonia chinensis

2．2．4 料液比對(duì)野木瓜多酚得率的影響 由圖4可知，隨著料液比的增加，野木瓜多酚得率增加，說明溶劑比例大有利于多酚物質(zhì)的溶出。但當(dāng)料液比增加到1∶16后，多酚得率基本保持不變，且料液比過大容易造成溶劑的浪費(fèi)，綜合考慮多酚得率及提取成本，最終確定最優(yōu)料液比為1∶16。

圖4 料液比對(duì)野木瓜多酚提取的影響Fig．4 Effects of ratio of material to liquid on the extraction of polyphenols from Stauntonia chinensis

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化法確定野木瓜多酚的最佳提取條件

2．3．1 響應(yīng)模型的建立與分析 實(shí)驗(yàn)采用 Box-Behnken 設(shè)計(jì)，利用 Design-Expert 8．0．5 軟件分析超聲時(shí)間A、超聲溫度B、丙酮體積分?jǐn)?shù)C、料液比D 4個(gè)影響因素對(duì)野木瓜多酚得率的影響，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Experiment design and the result

表3 二次響應(yīng)模型方差分析Table 3 ANOVA results for response surface quadratic model

由表3方差分析可知，模型的p＜0．0001，表明該模型具有高度顯著性。失擬項(xiàng)p=0．1093在p＜0．05水平上差異不顯著，表明該模型具有較高擬合度，實(shí)驗(yàn)誤差小，說明該模型具有實(shí)際應(yīng)用意義。超聲時(shí)間(A)和料液比(D)對(duì)野木瓜多酚得率影響極顯著，二項(xiàng)式A2、B2、C2的p值都達(dá)到極顯著水平，D2對(duì)野木瓜多酚得率影響顯著，超聲時(shí)間是對(duì)野木瓜多酚得率影響最大的因素。野木瓜多酚得率與各因素變量的二次方程模型為:

R1=8．05200-0．32583A+0．063333B+0．057500C+0．17833D-0．025000AB+0．22000AC-0．26750AD+0．025000BC+0．28000BD+0．022500CD-0．27058A2-0．54433B2-0．33558C2-0．20183D2。

各因素之間的響應(yīng)面圖如圖5所示。若響應(yīng)曲面坡度趨于陡峭，表明響應(yīng)值對(duì)于操作條件的改變非常敏感，若曲面坡度相對(duì)平緩，則表明操作條件的改變對(duì)響應(yīng)值影響較小。響應(yīng)面在底面的投影即等高線趨向橢圓且橢圓的軸線與坐標(biāo)軸存在一定角度，則表明兩因素交互作用明顯，若等高線的形狀趨于圓形或橢圓的軸線與坐標(biāo)軸角度較小，則表明兩因素交互作用較弱［42］。根據(jù)上述響應(yīng)面的性質(zhì)分析，超聲時(shí)間與丙酮體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間與料液比、超聲溫度與料液比間交互顯著，其余3組間交互不顯著，與方差分析表結(jié)果一致。圖5(a)顯示，當(dāng)丙酮體積分?jǐn)?shù)和料液比一定時(shí)，多酚得率隨超聲時(shí)間的變化較快，超聲時(shí)間約為25min、超聲溫度約為60℃時(shí)多酚得率最大。由圖5(b)可以看出，當(dāng)超聲溫度與料液比一定時(shí)，在丙酮體積分?jǐn)?shù)較低的情況下，多酚得率對(duì)超聲時(shí)間的變化敏感，超聲時(shí)間為25min左右多酚得率最大。圖5(c)顯示，當(dāng)超聲溫度與丙酮體積分?jǐn)?shù)一定時(shí)，在超聲時(shí)間為20min的情況下，多酚得率隨料液比的增大而較快增加，料液比為1∶20時(shí)多酚得率最大，超聲時(shí)間為40min時(shí)，多酚得率隨料液比的增加變化不明顯。圖5(d)中，固定超聲時(shí)間和料液比，多酚得率隨超聲溫度和丙酮體積分?jǐn)?shù)的增加先增大后減小，超聲溫度為60℃、丙酮體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)多酚得率達(dá)到最大。由圖5(e)可以看出，固定超聲時(shí)間和丙酮體積分?jǐn)?shù)，多酚得率隨超聲溫度的增加先增加后減少，超聲溫度在60～65℃范圍內(nèi)多酚得率最大。圖5(f)顯示，當(dāng)超聲溫度和超聲時(shí)間一定時(shí)，多酚得率隨丙酮體積分?jǐn)?shù)的增加先增大后減小，但變化緩慢，料液比為1∶18、丙酮體積分?jǐn)?shù)為60%左右多酚得率較大。

2．3．2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)所建立的模型進(jìn)行工藝條件的優(yōu)化組合，得到最佳工藝條件為超聲時(shí)間20min，超聲溫度63．3℃，丙酮體積分?jǐn)?shù)58%，料液比1∶20，此時(shí)野木瓜多酚得率預(yù)測(cè)值為8．426mg/g。為了操作方便，以超聲時(shí)間20min，超聲溫度63℃，丙酮體積分?jǐn)?shù)58%，料液比1∶20為工藝條件進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果顯示在該工藝條件下，野木瓜多酚得率為8．402mg/g，與上述預(yù)測(cè)值的相對(duì)誤差為0．3%，證實(shí)該模型可用于野木瓜多酚的提取。

3 結(jié)論

采用超聲輔助提取法提取野木瓜中的多酚物質(zhì)，通過單因素實(shí)驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到優(yōu)化的工藝條件:超聲時(shí)間20min，超聲溫度63℃，丙酮體積分?jǐn)?shù)58%，料液比1∶20，在最優(yōu)條件下，野木瓜多酚的得率為8．402 mg/g，與預(yù)測(cè)值8．426mg/g的相對(duì)誤差為0．3%，此工藝條件可以為野木瓜多酚的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

圖5 各兩因素交互作用對(duì)野木瓜多酚得率影響的響應(yīng)面圖Fig．5 Response surface showing the pairwise interactive effects of four operating parameters on the extraction of polyphenols from Stauntonia chinensis

［1］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì)．中華本草［M］．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:761-767．

［2］龍立利．野木瓜果酒發(fā)酵特性的研究［D］．重慶:西南大學(xué)，2010:9．

［3］王紹美，何照范，郁建平．木瓜營養(yǎng)成分分析［J］．營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2000，22(2):190-192．

［4］Ignat I，Volf I，Popa V I．A critical review of methods for characterisation of polyphenolic compounds in fruits and vegetables［J］．Food Chemistry，2011，126(4):1821-1835．

［5］Santos-Buelga C，Andres-Lacueva C．Guest editorial-Polyphenols and health(ICPH2011)［J］．Archives of Biochemistry and Biophysics，2012，527(2):65-66．

［6］Bansal S，Syan N，Mathur P，et al．Pharmacological profile of green tea and its polyphenols:a review［J］．Medicinal Chemistry Research，2012，21(11):3347-3360．

［7］Boath A S，Grussu D，Stewart D，et al．Berry polyphenols inhibit digestive enzymes:a source of potential health benefits?［J］．Food Digestion，2012，3(1-3):1-7．

［8］Taylor J，Lopez ABC．Investigating how polyphenols protect against cardiovascular disease［J］．Circulation，2012，125(1):F6．

［9］Zaveri N T．Green tea and its polyphenolic catechins:Medicinal uses in cancer and noncancer applications［J］．Life Sciences，2006，78(18):2073-2080．

［10］Chung S，Champagne E T．Using phenolic compounds to reduce the allergenic properties of peanut extracts and peanut butter slurries［J］．Journal of Allergy and Clinical Immunology，2008，121(2 Suppl 1):S249．

［11］Viswanath V，Urooj A，Malleshi N G．Evaluation of antioxidant and antimicrobial properties of finger millet polyphenols(Eleusine coracana)［J］．Food Chemistry，2009，114(1):340-346．

［12］Singh R，Akhtar N，Haqqi T M．Green tea polyphenol epigallocatechi3-gallate:Inflammation and arthritis［J］．Life Sciences，2010，86(25-26):907-918．

［13］Spencer J P E，Vafeiadou K，Williams R J，et al．Neuroinflammation:Modulation by flavonoids and mechanisms of action［J］．Molecular Aspects of Medicine，2012，33(1):83-97．

［14］程正濤，丁慶波，張昊，等．海紅果多酚提取工藝優(yōu)化［J］．食品科學(xué)，2010，31(24):172-176．

［15］王文平，郭祀遠(yuǎn)，李琳，等．苯酚-硫酸法測(cè)定野木瓜中多糖含量的研究［J］．食品科學(xué)，2007，28(4):276-279．

［16］王文平，郭祀遠(yuǎn)，李琳，等．野木瓜中多糖提取工藝研究［J］．食品科技，2007，32(1):99-101．

［17］王文平，郭祀遠(yuǎn)，李琳，等．野木瓜水溶性多糖的提取、分離及結(jié)構(gòu)分析［J］．華南理工大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2008，36(7):128-133．

［18］宋發(fā)軍，楊芳，許德紅，等．野木瓜藤莖部位總皂苷閃式提取工藝［J］．中南民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2010，29(3):29-32．

［19］張倫，楊光忠，歐澤亮，等．野木瓜三萜皂苷類化合物抗炎活性研究［J］．華中師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2013，47(3):348-352．

［20］Wang H B，Mayer R，Rücker G．Triterpenoid glycosides from Stauntonia hexaphylla［J］．Phytochemistry，1993，34(5):1389-1394．

［21］Ikuta A，Morikawa A，Kubota K．A saponin from callus tissue of Stauntonia hexaphylla［J］．Phytochemistry，1991，30(7):2425-2427．

［22］Wei Y，Ma C M，Chen D Y，et al．Anti-HIV-1 protease triterpenoids from Stauntonia obovatifoliola Hayata subsp．intermedia［J］．Phytochemistry，2008，69(9):1875-1879．

［23］Wang D，Tian J，Zhou G P，et al．Triterpenoid glycosides from Stauntonia chinensis［J］．Journal of Asian Natural Products Research，2010，12(1-2):149-155．

［24］Chen C，Meng D L．Chemical constituents from Stauntonia brachyanthera Hand-Mazz［J］．Biochemical Systematics and Ecology，2013，48:182-185．

［25］田亮，王文平，吳國卿，等．野木瓜糯米酒的加工工藝［J］．食品研究與開發(fā)，2011，32(5):66-68．

［26］潘紅梅，游敬剛，柏紅梅，等．野木瓜飲料的工藝研究［J］．食品與發(fā)酵科技，2011，47(6):92-95．

［27］孫帥，謝培山．野木瓜的研究進(jìn)展［J］．中藥新藥與臨床藥理，2011，22(6):696-700．

［28］付婧，岳田利，袁亞宏，等．真空耦合超聲提取茶多酚的工藝研究［J］．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2013，41(3):172-178．

［29］令博，王捷，吳洪斌，等．葡萄皮渣多酚超聲波輔助提取工藝響應(yīng)面法優(yōu)化及抗氧化活性研究［J］．食品科學(xué)，2011，32(18):24-29．

［30］房玉林，齊迪，郭志君，等．超聲波輔助法提取石榴皮中總多酚工藝［J］．食品科學(xué)，2012，33(6):115-118．

［31］賴富饒，李臻，吳暉，等．甜玉米芯多酚的超聲提取工藝優(yōu)化［J］．現(xiàn)代食品科技，2012，28(1):52-55，17．

［32］石恩慧，李紅，谷明燦，等．響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取板栗總苞多酚工藝條件［J］．中國食品學(xué)報(bào)，2013，13(5):69-76．

［33］周麗萍，楊瑞華，張悅．響應(yīng)面法優(yōu)化研磨珠輔助超聲波萃取蘋果多酚的工藝研究［J］．食品工業(yè)科技，2012，33(21):277-281．

［34］Yoo K S，Lee E J，Leskovar D，et al．Development of an automated method for Folin-Ciocalteu total phenolic assay in artichoke extracts［J］．Journal of Food Science，2012，77(12):C1279-C1284．

［35］王文昕，董全．響應(yīng)面法優(yōu)化超聲輔助提取花生紅衣多酚工藝［J］．食品科學(xué)，2012，33(22):1-5．

［36］周曉麗，邵震，李婷婷．木瓜黃酮的提取及抗氧化性研究［J］．食品工業(yè)科技，2007，28(8):170-171．

［37］李倩，李俶，徐金龍，等．響應(yīng)面法優(yōu)化南酸棗皮中多酚提取工藝［J］．食品工業(yè)科技，2012，33(20):251-254．

［38］程正濤，丁慶波，張昊，等．海紅果多酚提取工藝優(yōu)化［J］．食品科學(xué)，2010，31(24):172-176．

［39］Kallithraka S，Garcia V C．Survey of solvents for the extraction of grape seed phenolics［J］．Phytochemical Analysis，1995，6(5):265-267．

［40］Luengthanaphol S，Mongkholkhajornsilp D，Douglas S，et al．Extraction of antioxidants from sweet Thai tamarind seed coat:preliminary experiments［J］．Journal of Food Engineering，2004，63(2):247-252．

［41］張玉香，曲慧鴿，張潤亞，等．響應(yīng)面法優(yōu)化藍(lán)莓葉黃酮的微波提取工藝［J］．食品科學(xué)，2010，31(16):33-37．

［42］劉奉強(qiáng)，肖鑒謀，劉太澤．應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波提取荊芥中總黃酮的工藝［J］．南昌大學(xué)學(xué)報(bào):工科版，2011，33(2):149-155．