回瑞華,刁全平,侯冬巖,李鐵純
(鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧鞍山114007)
學(xué)齡前兒童正處于生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期,蛋白質(zhì)的供給特別重要.蛋白質(zhì)由多種氨基酸組成,它是構(gòu)成細(xì)胞組織的主要成分,是兒童生長(zhǎng)發(fā)育所必要的物質(zhì).學(xué)齡前兒童需要蛋白質(zhì)較成人多,因?yàn)樗麄儾坏枰鞍踪|(zhì)來(lái)補(bǔ)充丟失的熱量,而且還需要它來(lái)增長(zhǎng)和構(gòu)成新組織,學(xué)齡前兒童體重每增加1 kg,體內(nèi)就要合成160 g新的蛋白質(zhì),以滿足身體細(xì)胞組織生長(zhǎng)的需要.若長(zhǎng)期缺乏蛋白質(zhì),可引起智力障礙、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、體重過(guò)輕以及貧血等,健康受到影響.研究表明,食物中以豆類(lèi)、干果、肉類(lèi)、乳類(lèi)、蛋類(lèi)、魚(yú)蝦類(lèi)蛋白質(zhì)含量較高.除了保證學(xué)齡前兒童飲食中有足夠的蛋白質(zhì)數(shù)量以外,還要注意飲食中蛋白質(zhì)的質(zhì)量,就是說(shuō)動(dòng)物性蛋白質(zhì)和植物性蛋白質(zhì)的量要占蛋白質(zhì)總攝入量的1/2.據(jù)調(diào)查目前城區(qū)學(xué)齡前兒童普遍存在動(dòng)物蛋白多、植物蛋白少,蛋白質(zhì)的獲得不平衡.在植物性食物中,干果像松子仁、核桃仁、腰果、葵花子、黑芝麻、榛子仁、花生仁等營(yíng)養(yǎng)成分很高[1-4],特別是蛋白質(zhì)的含量均較高[5].本文采用光譜法對(duì)干果中蛋白質(zhì)含量進(jìn)行分析[6-7],為學(xué)齡前兒童合理補(bǔ)充植物蛋白提供參考.
KQ-250B型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),UV036型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó)瓦里安公司),離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠,4 000 r/min),0.085 946 moL/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,0.1 moL/L檸檬酸水溶液,8 moL/L尿素的2 moL/L氫氧化鈉溶液,試劑均為分析純,水為二次蒸餾水.
蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品:牛血清白蛋白,北京北方同正生物技術(shù)發(fā)展有限公司.
樣品:松子仁、核桃仁、腰果、葵花子、黑芝麻、榛子仁、花生仁,均購(gòu)于鞍山市場(chǎng).
準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品2.00 g,置于50 mL燒杯中,加入0.1 moL/mL檸檬酸溶液30 mL,超聲15 min,使其充分溶解,過(guò)濾后,以3 000 r/min的速度離心20 min,上清液過(guò)濾保存為儲(chǔ)備液.
精確稱(chēng)取牛血清白蛋白2.0 g,置于50 mL燒杯中,加入0.1 moL/mL檸檬酸溶液30 mL,超聲15 min,使其充分溶解保存為儲(chǔ)備液.
1.4.1 測(cè)定波長(zhǎng)的確定 取0.1 mL濾液于10 mL容量瓶中,8 moL/L尿素的2 moL/L氫氧化鈉溶液定容,充分振搖2 min,將濾液置于比色皿中,以8 moL/L尿素的2 moL/L氫氧化鈉溶液作參比液,在200~800 nm范圍內(nèi)掃描,得到其吸收光譜,最大吸收波長(zhǎng)為280 nm[4-6].
1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別移取 0,0.30,0.60,0.90,1.20,1.50 mL1.3 中的儲(chǔ)備液于 10 mL 容量瓶中,以8 moL/L尿素的2 moL/L的氫氧化鈉溶液定容,充分振搖,以8 moL/L尿素的2 moL/L的氫氧化鈉溶液作參比液,在280 nm處分別測(cè)定其吸光度值A(chǔ).以蛋白質(zhì)濃度C為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.回歸方程是
相關(guān)系數(shù) r為0.999 9,線性范圍為0.447 8 ~1.497 3(mg/mL).
1.4.3 實(shí)驗(yàn)方法 按1.2處理樣品,按照1.4.2測(cè)定方法分別測(cè)定其吸光度,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定干果樣品中蛋白質(zhì)含量.
用與繪制吸收曲線相同方法配置的樣品進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:樣品放置60 min,測(cè)得其吸光度值基本不變.
移取1.3中的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,按照1.4.2測(cè)定方法測(cè)定6次,計(jì)算該方法的RSD為0.24%.
準(zhǔn)確移取3份相同質(zhì)量濃度的樣品,加入不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照1.4.2的方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算該方法的回收率見(jiàn)表1.
表1 方法回收率
按1.2分別處理干果樣品,按照1.4.3實(shí)驗(yàn)方法分別測(cè)定其吸光度,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量分析出干果樣品中蛋白質(zhì)含量,結(jié)果如表2.
表2 干果中蛋白質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果 (mg/g)
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,干果中松子仁、核桃仁、腰果、葵花子、黑芝麻、榛子仁、花生仁等蛋白質(zhì)的含量均較高,其含量由大到小依次為:花生仁、榛子仁、黑芝麻、葵花子、腰果、核桃仁、松子仁,測(cè)定的干果樣品中花生仁蛋白質(zhì)含量最高,為243 mg/g.
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