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    肝癌患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜的研究

    2014-12-09 07:53:20刁振琦李云濤饒鳳飛張建民唐偉躍
    腫瘤基礎(chǔ)與臨床 2014年6期
    關(guān)鍵詞:譜峰健康人吸收光譜

    刁振琦,李云濤,熊 洋,饒鳳飛,張建民,唐偉躍

    (鄭州大學(xué)物理工程學(xué)院,河南 鄭州450001)

    肝癌是第5 大常見的惡性腫瘤,占腫瘤致死原因的第3 位,其5 a 自然死亡率超過95%[1]。中國(guó)占全世界肝癌病例的45%[2]。因此肝癌在世界各地都極受關(guān)注。肝癌的創(chuàng)痛治療方法是手術(shù)、化療。肝癌的早期發(fā)現(xiàn)對(duì)治療后的生存率有極大幫助,因此,探索肝癌的早期診斷有重大意義。本文利用健康人、肝癌患者和肝癌術(shù)后患者的氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜,研究肝癌的早期診斷。

    紫外-可見吸收光譜屬于分子光譜,是由于價(jià)電子的躍遷而產(chǎn)生的。紫外-可見吸收光譜具有以下3點(diǎn)性質(zhì):1)對(duì)于同一種物質(zhì),濃度越大,吸收強(qiáng)度也越大;2)對(duì)于同一物質(zhì),同一濃度待測(cè)溶液,對(duì)不同波長(zhǎng)的吸收強(qiáng)度會(huì)呈現(xiàn)出不同的狀況;3)對(duì)于同一物質(zhì),最大吸收峰位置與物質(zhì)的濃度無(wú)關(guān),吸收譜的形狀完全相同[3]。

    紫外-可見吸收光譜的應(yīng)用非常廣泛,常見的應(yīng)用是對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析,對(duì)常量、微量、多組分進(jìn)行測(cè)定;也可根據(jù)物質(zhì)吸收峰的特性來(lái)對(duì)進(jìn)行定性分析和結(jié)構(gòu)分析。

    血液是有血漿和血細(xì)胞組成。血漿為淺黃色半透明液體,其中除含大量水分外,還含有無(wú)機(jī)鹽、白蛋白、球蛋白、酶和各種激素等;血細(xì)胞由人體造血器官產(chǎn)生,分為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。紅細(xì)胞有一定的彈性和可塑性,直徑在7 ~8.5 μm 之間,呈雙凹圓盤狀,中央較薄,邊緣較厚。成熟的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核和細(xì)胞器,里面充滿了血紅蛋白,血紅蛋白是含鐵的蛋白質(zhì),約占紅細(xì)胞質(zhì)量的33%,具有運(yùn)輸與結(jié)合氧氣和二氧化碳的功能。氧合血紅蛋白是血紅蛋白和氧分子的結(jié)合物,是一種亮紅色的血紅蛋白和氧的化學(xué)合成物,把氧氣運(yùn)輸?shù)饺梭w組織中。

    1 試驗(yàn)儀器與材料

    儀器:小型臺(tái)式離心機(jī)TGL216G,紫外-可見吸收光譜儀(UV-101,日本Shimadzu 公司),電子掃描顯微鏡(S-505,荷蘭Philips 公司);電子透射顯微鏡(H-606,日本Hitachi 公司),便攜式拉曼光譜儀(R-3000TM,美國(guó)Ocean Optics 公司)。

    血液樣品:30 例健康人、40 例肝癌患者和30 例肝癌術(shù)后患者血液樣本均采集于鄭州大學(xué)人民醫(yī)院和鄭州大學(xué)腫瘤醫(yī)院。

    化學(xué)試劑(質(zhì)量分?jǐn)?shù)):硝酸銀(99.8%),聚乙烯醇(95%),濃硫酸(98%),銀棒(99. 9%),雙氧水(30%),氨水(28%),去離子水(18.0 MΩ·cm),載玻片。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 提取氧合血紅蛋白 取自健康人、肝癌患者和肝癌術(shù)后患者的新鮮血液樣品每例3 mL,不加任何抗凝劑,在37 ℃室溫中放置1 h 左右使其凝結(jié)。然后用小型臺(tái)式離心機(jī)5 000 r·min-1離心5 min,使之分層,提取下層紅細(xì)胞,然后將提取的紅細(xì)胞按體積比為1∶10 加入到去離子水中,使之溶血。之后再次使用小型臺(tái)式離心機(jī)5 000 r·min-1離心5 min,提取中間溶液即氧合血紅蛋白溶液,放置于冰箱中,0 ~4 ℃保存待測(cè)。

    2.2 健康人、肝癌和術(shù)后患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜 檢測(cè)了30 例健康人、40 例肝癌患者及30 例術(shù)后患者氧合血紅蛋白的紫外-可見吸收光譜。

    健康人紫外-可見吸收光譜在413 nm 處出現(xiàn)譜峰,而在肝癌和術(shù)后患者紫外-可見吸收光譜中,此譜峰位置分別平移到了410 nm 和412 nm 處。而在541、576 nm 處沒有出現(xiàn)譜峰平移的情況。健康人、肝癌術(shù)后患者和肝癌患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜在413 nm 譜峰附近強(qiáng)度基本呈現(xiàn)出依次增強(qiáng)的情況;而在541、576 nm 處,健康人、肝癌患者和肝癌術(shù)后患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜譜峰強(qiáng)度基本相同;在413 nm-1附近,肝癌患者紫外-可見吸收光譜的強(qiáng)度普遍要比健康人高很多。見圖1。

    在正常生理?xiàng)l件下(37 ℃,pH 7.4),氧合血紅蛋白在541 nm 和576 nm 處附近有特征吸收峰,吸收峰的高度不僅與紅細(xì)胞內(nèi)氧合血紅蛋白溶液濃度的高低有關(guān),而且還與血紅蛋白的理化性質(zhì)(如溶解性穩(wěn)定性和氧化狀態(tài)等)有關(guān);吸收峰的位置與不同攜氧能力下氧合血紅蛋白的構(gòu)型有關(guān)[4-5],413 nm 附近對(duì)應(yīng)于血紅蛋白的特征峰。541 nm 和576 nm 特征吸收峰的峰高、峰位和峰形反映了氧合血紅蛋白分子的濃度分子結(jié)構(gòu)的變化及輸氧功能的強(qiáng)弱,吸收峰強(qiáng)弱以及峰行的變化反應(yīng)了氧合血紅蛋白分子機(jī)構(gòu)的變化[4]。在413 nm 處附近,健康人、肝癌患者和術(shù)后患者呈現(xiàn)出明顯不同的光譜強(qiáng)度,肝癌患者紫外-可見吸收光譜的強(qiáng)度普遍要比健康人高很多,肝癌術(shù)后患者也比健康人譜峰強(qiáng)度高,可以表明肝癌患者血液中血紅蛋白的含量可能高于健康人,肝癌術(shù)后患者血紅蛋白含量低于肝癌患者,其血液中血紅蛋白含量在降低。見圖1。

    圖1 健康人(黑色)、肝癌(紅色)和肝癌術(shù)后(粉紅色)和紫外-可見吸收光譜

    3 討論

    實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)了健康人、肝癌及術(shù)后患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜,分析發(fā)現(xiàn)肝癌及術(shù)后患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜在413 nm 譜峰位置出現(xiàn)平移,分別平移到410 nm 和412 nm 處。健康人、肝癌術(shù)后患者和肝癌患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜在413 nm 譜峰附近強(qiáng)度基本呈現(xiàn)出依次增強(qiáng)的情況;而在541、576 nm 處,健康人、肝癌患者和肝癌術(shù)后患者氧合血紅蛋白紫外-可見吸收光譜譜峰強(qiáng)度基本相同;在413 nm 處附近,肝癌患者紫外-可見吸收光譜的強(qiáng)度普遍要比健康人高很多,肝癌術(shù)后患者也比健康人譜峰強(qiáng)度高,可以表明肝癌患者血液中血紅蛋白的含量可能高于健康人,肝癌術(shù)后患者血紅蛋白含量低于肝癌患者;相對(duì)于肝癌患者,肝癌術(shù)后患者血液中血紅蛋白含量在降低。

    [1]徐海峰,楊華瑜,張宏冰,等. 改變肝癌早期診斷和治療現(xiàn)狀的新肝癌血清標(biāo)志物[J]. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,28(1):104-108.

    [2]李根叢,陸才德.肝癌治療的現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué),2005,17(6):319 -321.

    [3]李建軍,丁正生,張海燕.常用判別分類方法分析[J].西安科技大學(xué)學(xué)報(bào),2007,27(1):138 -142.

    [4]Tsujita K,Shiraishi T,Kakinuma K. Microspectrophotometry of nitric oxide-dependent changes in hemoglobin in single red blood cells incubatedwith stimulated macrophages[J]. J Biochem,1997,122(2):264 -270.

    [5]魏英耐,陳長(zhǎng)青,李云濤,等. 不同劑量電子線照射宮頸癌細(xì)胞后紅外光譜的統(tǒng)計(jì)分析[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2013,26(3):216-220.

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