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    甲胎蛋白修飾的樹突狀細胞誘導(dǎo)抗肝癌免疫作用的研究

    2014-12-04 06:58:50陳國梁
    中國高等醫(yī)學(xué)教育 2014年9期
    關(guān)鍵詞:甲胎蛋白樹突表型

    陳國梁

    (金華市人民醫(yī)院,浙江 金華 321000)

    樹突狀細胞(DC)是人體中功能最強的抗原呈遞細胞,可對抗原進行高效攝取、加工以及呈遞。甲胎蛋白(AFP)屬糖蛋白,源于胚胎肝臟細胞,待胎兒出生兩周后逐漸從血液中消失。最近有研究顯示原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)甲胎蛋白含量普遍較高,因此眾多科研工作者開始考慮甲胎蛋白用于肝癌患者進行生物治療。本研究采用甲胎蛋白修飾的樹突狀細胞誘導(dǎo)抗肝癌免疫,實驗結(jié)果良好,現(xiàn)報道如下。

    一、材料與方法

    (一)AFP修飾DC細胞的制備。

    人肝癌細胞株BeL-7402購自中國科學(xué)院上海生科院細胞資源中心,將其制備為熱休克腫瘤細胞(Bel-7402)凍融抗原。選擇12例健康志愿者,年齡為21-43歲,平均年齡為(31.8±4.2)歲,均抽取其外周血 50-100mL,分別將其單個核細胞進行分離,采用10%的胎牛血清培養(yǎng)基進行細胞懸浮培養(yǎng),培養(yǎng)溫度設(shè)置為37℃,含5%CO2貼壁2h之后,洗去非貼壁淋巴細胞,采用 GM-CSF(1000U/ml)和 IL-4(500U/ml)將其誘導(dǎo)為未成熟的DC,培養(yǎng)至第6天,將其分為兩組,對照組僅采用原先的GM-CSF和IL-4繼續(xù)培養(yǎng),而觀察組加入AFP(甲胎蛋白)陽性的肝癌細胞株Bel-7402,即采用凍融抗原負載誘導(dǎo)。兩組均在誘導(dǎo)24h之后采集DCs,采用流式細胞儀對細胞表型進行分析,采用熒光標記觀察CD80、CD86以及HLA-DR等的表達情況。

    (二)成熟DC誘導(dǎo)T淋巴細胞活化檢測。

    對成熟DCs刺激 T淋巴細胞的活性進行檢測,采用ELISPOT試劑盒,對照組將誘導(dǎo)成熟DCs刺激誘導(dǎo)T細胞,而觀察組將AFP陽性的凍融抗原誘導(dǎo)成熟DCs去刺激誘導(dǎo)T細胞。兩組均在37℃和5%CO2中孵育24-48h,之后觀察釋放IFN-γ的激活T細胞數(shù)。

    (三)成熟DC體外誘導(dǎo)特異性肝癌CTLs的檢測。

    選擇12例HLA-A2陽性志愿者提取出的自體非貼壁細胞淋巴細胞作為目標效應(yīng)細胞,按照1 10比例各加入對照組和觀察組誘導(dǎo)成功的成熟 DCs,培養(yǎng)5天后收獲,采用DimerX技術(shù)觀察兩組細胞中特異性抗肝癌CTLs的百分率。

    (四)統(tǒng)計學(xué)分析。

    采用SPSS 18.0軟件包進行數(shù)據(jù)分析,計量資料采用(±s)來表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料采用x2檢驗,當P<0.05時,兩組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    二、結(jié) 果

    本研究結(jié)果顯示觀察組誘導(dǎo)的 DCs成熟表型中CD80、CD86和HLA-DR的比率均顯著高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=10.16、4.66、15.89,P <0.05)(見表 1)。

    表1 觀察組和對照組的DCs成熟表型比率(%,±s,n=12)

    表1 觀察組和對照組的DCs成熟表型比率(%,±s,n=12)

    CD80 CD86 HLA-DR對照組組別05 8.19±4.13 54.29±5.12 23.22±4.52觀察組 32.33±7.12 65.16±6.25 58.24±6.15 t值 10.16 4.66 15.89 P值 <0.05 <0.05 <0.

    ELISPOT檢測結(jié)果顯示,對照組中平均每105個T淋巴細胞可檢測到的分泌 IFN-γ的斑點數(shù)為(11.25±2.33)個,顯著低于觀察組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=36.85,P<0.05)。

    本研究結(jié)果表明,觀察組中誘導(dǎo)CTLs結(jié)合表位肽A和表位肽B的陽性細胞數(shù)均顯著高于對照 組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=16.58、12.54,P < 0.05)(見表3)。

    表2 兩組成熟DCs激活T細胞釋放IFN-γ的ELISPOT分析(個,±s)

    表2 兩組成熟DCs激活T細胞釋放IFN-γ的ELISPOT分析(個,±s)

    組別 份數(shù) 斑點數(shù)對照組12 11.25±2.33觀察組 12 101.62±8.17 t值 36.85 P 值 <0.05

    表3 兩組成熟DCs誘導(dǎo)CTLs的表位肽-DimerX的檢測結(jié)果(%,±s)

    表3 兩組成熟DCs誘導(dǎo)CTLs的表位肽-DimerX的檢測結(jié)果(%,±s)

    組別 例數(shù) 表位肽A:DimerX 表位肽B:DimerX對照組 12 0.05±0.02 0.05±0.01觀察組 12 1.06±0.21 1.10±0.29 t值 16.58 12.54 P值 <0.05 <0.05

    三、討 論

    目前手術(shù)切除治療肝癌較為徹底,但手術(shù)治療后復(fù)發(fā)率高,尤以肝內(nèi)復(fù)發(fā)最為顯著。即使術(shù)后采取化療措施,復(fù)發(fā)率仍不可小覷。DC屬抗原呈遞細胞,未成熟時遷移能力較強,而成熟后可激活初始T細胞,維持正常免疫應(yīng)答。體內(nèi)多數(shù)DC處于非成熟狀態(tài),受抗原刺激后即分化為成熟DC,表達出高水平的粘附因子[1]。目前針對于 DC的抗腫瘤免疫治療潛力較大,已用于治療黑色素瘤、腎細胞瘤和前列腺癌等[2-3]。甲胎蛋白是一種胚性糖蛋白,正常人體內(nèi) AFP水平很低,但出現(xiàn)肝再生、妊娠、生殖系統(tǒng)癌變或者原發(fā)性肝癌時多數(shù)患者血清中AFP水平均升高,尤其是原發(fā)性肝癌患者,其AFP值升高者大約占80%左右。因此甲胎蛋白是診斷原發(fā)性肝癌的特異性指標。

    本文表明甲胎蛋白修飾的DCs成熟表型中CD80、CD86和HLA-DR所占比率均顯著高于對照組(P<0.05),說明甲胎蛋白抗原誘導(dǎo)促使DC成熟,增強其呈遞抗原功能。ELISPOT檢測結(jié)果顯示,甲胎蛋白修飾的成熟DC誘導(dǎo)T淋巴細胞,平均每105個T淋巴細胞可檢測出分泌IFN-γ的斑點數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。這是由于成熟 DCs表面有較多HSP受體,該受體能夠與T淋巴細胞相互作用,上調(diào)表面分子表達,提高IFN-γ分泌。本研究還發(fā)現(xiàn)甲胎蛋白修飾的成熟DCs誘導(dǎo)CTLs結(jié)合表位肽A和表位肽B的陽性細胞數(shù)均顯著高于對照組(P<0.05),表明甲胎蛋白修飾的成熟DCs可激發(fā)特異性抗肝癌免疫應(yīng)答。綜上所述,甲胎蛋白修飾的樹突狀細胞在誘導(dǎo)抗肝癌免疫中療效較好,值得臨床推廣。

    [1]史繼靜,王 昕,常瑞霞,等.腫瘤抗原特異性CTL細胞聯(lián)合樹突狀細胞治療原發(fā)性肝癌的安全性和有效性評價[J].中國實用醫(yī)刊,2013,40(24):93-95.

    [2]岳玲玲,張連生,柴 曄,等.負載抗原的DC與CIK共培養(yǎng)對耐藥乳腺癌細胞的殺傷作用[J].中國腫瘤生物治療雜志,2012,19(4):437-441.

    [3]章 燁,朱壽興,申小蘇,等.多肽負載DC聯(lián)合CIK治療激素難治性前列腺癌的療效[J].中國腫瘤生物治療雜志,2012,19(4):414-420.

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