金線蓮的結(jié)實(shí)特性和無(wú)菌播種培養(yǎng)

何荊洲等

摘要：觀察金線蓮的結(jié)實(shí)性情況，比較其蒴果采收期4種基本培養(yǎng)基、NAA與6-BA激素組合及水果添加物對(duì)金線蓮無(wú)菌播種膨大率及萌發(fā)率的影響。結(jié)果表明：（1）不同雜交組合的結(jié)實(shí)率存在明顯差異，結(jié)實(shí)率變化范圍為0～100%；（2）蒴果在授粉后45 d采收最好，種子的膨大率、萌發(fā)率均較高；（3）不同基本培養(yǎng)基對(duì)金線蓮種子的膨大萌發(fā)效果不同，種子在WPM培養(yǎng)基上的膨大萌發(fā)率最高，膨大率最高達(dá)73%，萌發(fā)率最高為79%；（4）不同生長(zhǎng)激素組合對(duì)金線蓮種子的膨大萌發(fā)影響差異顯著，以1/2MS+0.5 mg/L NAA的效果最好；（5）不同水果有機(jī)添加物都對(duì)金線蓮種子的膨大萌發(fā)有促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞：金線蓮；蒴果；無(wú)菌播種；膨大率；萌發(fā)率

中圖分類號(hào)： S567.23+9.04文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）09-0214-04

收稿日期：2013-11-04

目前國(guó)內(nèi)對(duì)金線蓮的組織培養(yǎng)研究主要集中在原球莖培養(yǎng)[5-6]和叢生芽培養(yǎng)[7-8]方面，在種子培養(yǎng)方面，伍成厚等報(bào)道了金線蓮種子培養(yǎng)過(guò)程中類原球莖的誘導(dǎo)及其分化[9]，羅安雄等則探討了不同培養(yǎng)基對(duì)金線蓮種子萌發(fā)以及幼苗生長(zhǎng)的影響[10]。本研究對(duì)2個(gè)金線蓮品種進(jìn)行了自交及正反交，并觀察了結(jié)實(shí)情況、蒴果采收時(shí)間和培養(yǎng)基成分等因素對(duì)金線蓮非共生萌發(fā)的影響，以期建立金線蓮無(wú)菌播種繁殖技術(shù)，為金線蓮育種提供技術(shù)參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

2個(gè)金線蓮品種材料均取自廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所觀賞植物研發(fā)中心的育苗溫室，其編號(hào)和品種的主要性狀、形態(tài)分別見(jiàn)表1、圖1。

1.2試驗(yàn)地概況

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1授粉在親本花中選取開(kāi)放3～7 d內(nèi)的花朵，用牙簽取其蕊柱上呈淺黃色、具有黏性的花粉塊，并置于親本花的柱頭蕊腔內(nèi)。

1.3.2蒴果發(fā)育情況的測(cè)量以及結(jié)實(shí)率的統(tǒng)計(jì)蒴果采收后用分析天平稱質(zhì)量并用游標(biāo)卡尺測(cè)量果莢最終長(zhǎng)、寬；計(jì)算結(jié)實(shí)率（采收的蒴果占授粉花朵數(shù)的百分?jǐn)?shù)）。

1.3.3種子預(yù)處理與播種將果莢置于流水下，用軟毛刷小心刷洗表皮后用洗衣粉水浸泡10 min（期間不?；蝿?dòng)），再用流水沖洗30 min；在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇擦拭表面后用無(wú)菌水沖洗1次，接著用1%氯化汞浸泡蒴果8 min，再用無(wú)菌水沖洗4次；吸干表面水分，用解剖刀縱向切開(kāi)蒴果，將種子均勻播撒在培養(yǎng)基上；暗培養(yǎng)7 d后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)條件，光照時(shí)間為10 h/d，光照強(qiáng)度1 000～1 500 lx，培養(yǎng)溫度保持在26～30 ℃。

1.4種子萌發(fā)試驗(yàn)

1.4.1蒴果成熟度對(duì)比試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)法，進(jìn)行不同成熟度蒴果的對(duì)比試驗(yàn)，即授粉后31、45、52 d的種子在配方為1/2 MS+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+20 g/L蔗糖、pH值5.6的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

1.4.2基本培養(yǎng)基對(duì)比試驗(yàn)采用單因素比較法，進(jìn)行種子誘導(dǎo)萌動(dòng)的基本培養(yǎng)基對(duì)比試驗(yàn)，即MS（高鹽）培養(yǎng)基、1/2MS（中鹽）培養(yǎng)基、WPM（中鹽、高鈣、高鉀）培養(yǎng)基及KC（低鹽）培養(yǎng)基4個(gè)處理，并附加20 g/L蔗糖、6.5 g/L瓊脂，調(diào)節(jié)pH值為5.6。

1.4.3生長(zhǎng)激素組合的對(duì)比試驗(yàn)以295自交種子為材料，選用0、0.5、1.0、1.5 mg/L 6-BA與0、0.2、0.5 mg/L NAA兩者的組合共8個(gè)處理，加上清水對(duì)照共9個(gè)處理，均附加20 g/L 蔗糖、6.5 g/L瓊脂，最后調(diào)節(jié)pH值為5.6，具體見(jiàn)表2。

2結(jié)果與分析

2.1蒴果結(jié)實(shí)特性及基本特征

由表3、圖2可知，無(wú)論是在形狀還是顏色方面，2種金線蓮的蒴果及種子都無(wú)明顯差別；但自交結(jié)實(shí)率差異明顯，295的自交結(jié)實(shí)率比較高，為92.77%，而294僅為63.75%，兩者之間相差29.02百分點(diǎn)；294與295之間的正反交結(jié)實(shí)率分別為100.00%、0，表明在正交成功的情況下，反交可能不會(huì)雜交成功，因此金線蓮在雜交育種時(shí)，同時(shí)進(jìn)行正反交有助于提高成功率。

2.2種子萌發(fā)

2.2.1蒴果采收期對(duì)種子萌發(fā)的影響將授粉后分別發(fā)育了31、45、52 d的種子播種于1/2MS培養(yǎng)基中，分別培養(yǎng)10、16周，統(tǒng)計(jì)種子的膨大率、萌發(fā)率。由表4可見(jiàn)，授粉后31 d，294×294未見(jiàn)種子的膨大與萌發(fā)，295×295種子的膨大率僅為28.0%，萌發(fā)率為35.0%；授粉后45 d，2個(gè)品種的膨大率和萌發(fā)率都顯著提高，其中295種子的膨大率達(dá)到99.0%，萌發(fā)率達(dá)到91.0%；授粉后52 d，種子的膨大率和萌發(fā)率都比45 d的種子有所下降，其中295×295種子的膨大率相差達(dá)36百分點(diǎn)，萌發(fā)率相差達(dá)18百分點(diǎn)；同一采收期的294×294種子，不論是膨大率還是萌發(fā)率都顯著低于295×295（除授粉后31 d）

。結(jié)果表明，當(dāng)蒴果采收期為45 d時(shí)，最有利于膨大形成原球莖（圖3），且后續(xù)發(fā)育形成原球莖的速度也較快；而當(dāng)蒴果采收期只有31 d時(shí)，不能或很難膨大形成原球莖；當(dāng)蒴果采收期達(dá)52 d時(shí)，果莢飽滿并有輕微皺縮，但尚未開(kāi)裂，說(shuō)明種子已經(jīng)完全成熟，但其膨大率和萌發(fā)率反而有所下降。總體結(jié)果可以看出，不同金線蓮品種之間的膨大、萌發(fā)效果相差較大。

2.2.2基本培養(yǎng)基對(duì)種子萌發(fā)的影響金線蓮種子在4種基本培養(yǎng)基上膨大萌發(fā)的原球莖外形無(wú)明顯差異。但在MS和KC培養(yǎng)基上的種子膨大時(shí)間比在1/2MS和WPM培養(yǎng)基上的晚，原球莖也沒(méi)有那么粗壯。不論是在種子膨大成原球莖還是在原球莖分化成幼苗方面，WPM組都比較粗壯，優(yōu)于其他3組。綜合試驗(yàn)結(jié)果，在發(fā)育形態(tài)方面金線蓮基本培養(yǎng)基的優(yōu)劣順序?yàn)椋篧PM>1/2MS>MS>KC。endprint

2.2.3生長(zhǎng)激素組合對(duì)種子萌發(fā)的影響由表6可知，單獨(dú)使用NAA對(duì)金線蓮種子膨大萌發(fā)最為有利，高于NAA與6-BA不同濃度的組合配比；而單獨(dú)添加6-BA的膨大率低于空白對(duì)照組，萌發(fā)率與空白對(duì)照組無(wú)顯著性差異；隨著6-BA濃度的升高，膨大率、萌發(fā)率出現(xiàn)一定的升高趨勢(shì)，但差異不顯著。推測(cè)可能是低濃度的6-BA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)有一定的抑制作用。

2.2.4水果添加物對(duì)種子萌發(fā)的影響由表7可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，添加不同的水果有機(jī)物對(duì)金線蓮種子膨大有一定的促進(jìn)作用，且不同處理間存在顯著差異。其膨大率大小為：香蕉汁>馬鈴薯汁>蘋果汁>椰子汁；萌發(fā)率大小為：馬鈴薯汁、蘋果汁>椰子汁>香蕉汁。可以看出，加入香蕉汁的培養(yǎng)基對(duì)種子膨大的促進(jìn)效果比添加椰子汁、蘋果汁和馬鈴薯汁的更顯著，但添加香蕉汁的培養(yǎng)基在種子萌發(fā)成幼苗時(shí)的萌發(fā)率比其他3組顯著下降，這說(shuō)明香蕉有促進(jìn)種子吸水膨大的良好效果，但同時(shí)在種子萌發(fā)成苗的過(guò)程中起一定的抑制作用。綜合試驗(yàn)結(jié)果可知，添加馬鈴薯汁對(duì)金線蓮種子的膨大、萌發(fā)最有利。

3結(jié)論

通過(guò)種子無(wú)菌播種，可縮短雜交育種周期，提高育種效率，加快種苗規(guī)模化生產(chǎn)進(jìn)程，是金線蓮種質(zhì)資源保存利用的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。目前國(guó)內(nèi)在金線蓮無(wú)菌播種技術(shù)應(yīng)用研究方面做得比較少，且金線蓮不同品種對(duì)基本培養(yǎng)基、激素組合配比和水果添加物的選擇等有一定的差別。因此，本試驗(yàn)以2個(gè)金線蓮品種的雜交蒴果為材料，探討了蒴果采收時(shí)間、培養(yǎng)基成分、激素組合配比等因素對(duì)種子膨大萌發(fā)的影響，結(jié)果表明：（1）授粉后45 d的種子無(wú)菌播種后膨大率、萌發(fā)率都顯著高于52 d的，這與張娟娟等研究的某些蘭科植物的種子成熟前比成熟后在無(wú)菌萌發(fā)過(guò)程中具有較高的萌發(fā)率相一致[11]，推測(cè)可能是由于種皮開(kāi)始皺縮，木質(zhì)素類物質(zhì)積累，種皮透水性下降導(dǎo)致萌發(fā)率下降，因此金線蓮在野生環(huán)境下需要相應(yīng)的共生真菌侵染后才能萌發(fā)；（2）4種培養(yǎng)基中MS無(wú)機(jī)鹽含量最高，屬于高鹽培養(yǎng)基，1/2MS為中鹽培養(yǎng)基，WPM也是中鹽培養(yǎng)基，但相對(duì)而言鈣、鉀含量高，這說(shuō)明低磷濃度有利于金線蓮種子的萌發(fā)，而高濃度的無(wú)機(jī)鹽含量不利于其膨大萌發(fā)，KC屬于低鹽培養(yǎng)基，且營(yíng)養(yǎng)成分比較簡(jiǎn)單，可能不足以支持種子的萌發(fā)，同時(shí)說(shuō)明金線蓮種子萌發(fā)需要有充足的營(yíng)養(yǎng)；（3）本試驗(yàn)中單獨(dú)使用NAA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)最為有利，顯著高于NAA與6-BA不同濃度組合配比，推測(cè)可能是細(xì)胞分裂素信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過(guò)磷酸基團(tuán)在主要組分之間連續(xù)傳遞而實(shí)現(xiàn)的[12]，而低磷濃度有利于金線蓮種子的萌發(fā)，因此6-BA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)起不到促進(jìn)作用，NAA與6-BA同時(shí)配合使用時(shí)，6-BA通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞的分化，在一定程度上對(duì)抗著NAA的作用，因此NAA與6-BA不同濃度組合與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異，也可能是激素濃度范圍過(guò)小或激素種類過(guò)少造成的結(jié)果，在以后的試驗(yàn)中可以適當(dāng)擴(kuò)大激素范圍濃度和種類；（4）天然水果添加物的成分比較復(fù)雜，大多含有氨基酸、激素、酶等一些復(fù)雜的化合物，它們對(duì)細(xì)胞和組織的增殖、分化有明顯的促進(jìn)作用，培養(yǎng)基中添加香蕉汁，可有效促進(jìn)金線蓮種子的膨大，卻又抑制了其萌發(fā)，這可能是成熟的香蕉中含有較多的植物生長(zhǎng)激素，有利于膨大，同時(shí)又含有較高的可溶性糖，提高了培養(yǎng)基的碳/氮比，從而抑制了種子的萌發(fā)；（5）金線蓮品種之間的膨大萌發(fā)效果相差顯著。

種子萌發(fā)是一個(gè)復(fù)雜的植物生理過(guò)程，在自然環(huán)境中，金線蓮種子只有經(jīng)過(guò)適宜的真菌侵染才能萌發(fā)，且萌發(fā)率低，因而其野生資源十分匱乏。金線蓮每個(gè)果莢中都含有成千上萬(wàn)粒種子，通過(guò)無(wú)菌播種手段可以使之萌發(fā)成苗，應(yīng)用于生產(chǎn)上可以加速金線蓮的繁殖，為中藥材和花卉市場(chǎng)提供大量的商品苗，具有良好的應(yīng)用前景。此外，通過(guò)無(wú)菌播種手段也可以促進(jìn)金線蓮資源的再生，對(duì)野生資源的保護(hù)也會(huì)起到積極的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]鐘岑生. 金線蓮的藥用價(jià)值與開(kāi)發(fā)[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（2）：51-53.

[2]李介元. 臺(tái)灣金線蓮[J]. 臺(tái)灣農(nóng)業(yè)探索，2001（2）：42.

[3]陳裕，林坤瑞，管其寬，等. 金線蓮生物學(xué)特性及生境特點(diǎn)的研究[J]. 亞熱帶植物通訊，1994，23（1）：18-24.

[4]蔡文燕，肖華山，范秀珍.金線蓮研究進(jìn)展（綜述）[J]. 亞熱帶植物科學(xué)，2003，32（3）：68-72.

[5]王建勤，林蘭英，陳鋼. 金線蓮原球莖的誘導(dǎo)與植株再生[J]. 植物學(xué)通報(bào)，1996，13（1）：55-56.

[6]韓曉紅，羅明英，歐陽(yáng)志成，等. 金線蓮原球莖增殖研究[J]. 北方園藝，2012（24）：144-146.

[7]孟志霞，郭順星，于雪梅，等. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)福建金線蓮叢生芽增殖的影響[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（23）：1777-1780.

[8]闞世超，張明生，李花. 金線蓮叢生芽誘導(dǎo)研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（3）：981-982.

[9]伍成厚，馮毅敏，賀漫媚，等. 金線蓮種子培養(yǎng)的研究[J]. 中國(guó)野生植物資源，2008，27（1）：47-50.

[10]羅安雄，孟志霞，陳曉梅，等. 福建金線蓮種子萌發(fā)及幼苗培養(yǎng)研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47（15）：1199-1203.

[11]張娟娟，嚴(yán)寧，胡虹. 三種兜蘭屬植物種子發(fā)育過(guò)程及其與無(wú)菌萌發(fā)的關(guān)系[J]. 植物分類與資源學(xué)報(bào)，2013，35（1）：33-40.

[12]許智宏，薛紅衛(wèi). 植物激素作用的分子機(jī)理[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012.馬鳳霞，趙權(quán). 乙烯利、ABA對(duì)北五味子品質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：218-220.endprint

2.2.3生長(zhǎng)激素組合對(duì)種子萌發(fā)的影響由表6可知，單獨(dú)使用NAA對(duì)金線蓮種子膨大萌發(fā)最為有利，高于NAA與6-BA不同濃度的組合配比；而單獨(dú)添加6-BA的膨大率低于空白對(duì)照組，萌發(fā)率與空白對(duì)照組無(wú)顯著性差異；隨著6-BA濃度的升高，膨大率、萌發(fā)率出現(xiàn)一定的升高趨勢(shì)，但差異不顯著。推測(cè)可能是低濃度的6-BA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)有一定的抑制作用。

2.2.4水果添加物對(duì)種子萌發(fā)的影響由表7可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，添加不同的水果有機(jī)物對(duì)金線蓮種子膨大有一定的促進(jìn)作用，且不同處理間存在顯著差異。其膨大率大小為：香蕉汁>馬鈴薯汁>蘋果汁>椰子汁；萌發(fā)率大小為：馬鈴薯汁、蘋果汁>椰子汁>香蕉汁?？梢钥闯?，加入香蕉汁的培養(yǎng)基對(duì)種子膨大的促進(jìn)效果比添加椰子汁、蘋果汁和馬鈴薯汁的更顯著，但添加香蕉汁的培養(yǎng)基在種子萌發(fā)成幼苗時(shí)的萌發(fā)率比其他3組顯著下降，這說(shuō)明香蕉有促進(jìn)種子吸水膨大的良好效果，但同時(shí)在種子萌發(fā)成苗的過(guò)程中起一定的抑制作用。綜合試驗(yàn)結(jié)果可知，添加馬鈴薯汁對(duì)金線蓮種子的膨大、萌發(fā)最有利。

3結(jié)論

通過(guò)種子無(wú)菌播種，可縮短雜交育種周期，提高育種效率，加快種苗規(guī)模化生產(chǎn)進(jìn)程，是金線蓮種質(zhì)資源保存利用的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。目前國(guó)內(nèi)在金線蓮無(wú)菌播種技術(shù)應(yīng)用研究方面做得比較少，且金線蓮不同品種對(duì)基本培養(yǎng)基、激素組合配比和水果添加物的選擇等有一定的差別。因此，本試驗(yàn)以2個(gè)金線蓮品種的雜交蒴果為材料，探討了蒴果采收時(shí)間、培養(yǎng)基成分、激素組合配比等因素對(duì)種子膨大萌發(fā)的影響，結(jié)果表明：（1）授粉后45 d的種子無(wú)菌播種后膨大率、萌發(fā)率都顯著高于52 d的，這與張娟娟等研究的某些蘭科植物的種子成熟前比成熟后在無(wú)菌萌發(fā)過(guò)程中具有較高的萌發(fā)率相一致[11]，推測(cè)可能是由于種皮開(kāi)始皺縮，木質(zhì)素類物質(zhì)積累，種皮透水性下降導(dǎo)致萌發(fā)率下降，因此金線蓮在野生環(huán)境下需要相應(yīng)的共生真菌侵染后才能萌發(fā)；（2）4種培養(yǎng)基中MS無(wú)機(jī)鹽含量最高，屬于高鹽培養(yǎng)基，1/2MS為中鹽培養(yǎng)基，WPM也是中鹽培養(yǎng)基，但相對(duì)而言鈣、鉀含量高，這說(shuō)明低磷濃度有利于金線蓮種子的萌發(fā)，而高濃度的無(wú)機(jī)鹽含量不利于其膨大萌發(fā)，KC屬于低鹽培養(yǎng)基，且營(yíng)養(yǎng)成分比較簡(jiǎn)單，可能不足以支持種子的萌發(fā)，同時(shí)說(shuō)明金線蓮種子萌發(fā)需要有充足的營(yíng)養(yǎng)；（3）本試驗(yàn)中單獨(dú)使用NAA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)最為有利，顯著高于NAA與6-BA不同濃度組合配比，推測(cè)可能是細(xì)胞分裂素信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過(guò)磷酸基團(tuán)在主要組分之間連續(xù)傳遞而實(shí)現(xiàn)的[12]，而低磷濃度有利于金線蓮種子的萌發(fā)，因此6-BA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)起不到促進(jìn)作用，NAA與6-BA同時(shí)配合使用時(shí)，6-BA通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞的分化，在一定程度上對(duì)抗著NAA的作用，因此NAA與6-BA不同濃度組合與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異，也可能是激素濃度范圍過(guò)小或激素種類過(guò)少造成的結(jié)果，在以后的試驗(yàn)中可以適當(dāng)擴(kuò)大激素范圍濃度和種類；（4）天然水果添加物的成分比較復(fù)雜，大多含有氨基酸、激素、酶等一些復(fù)雜的化合物，它們對(duì)細(xì)胞和組織的增殖、分化有明顯的促進(jìn)作用，培養(yǎng)基中添加香蕉汁，可有效促進(jìn)金線蓮種子的膨大，卻又抑制了其萌發(fā)，這可能是成熟的香蕉中含有較多的植物生長(zhǎng)激素，有利于膨大，同時(shí)又含有較高的可溶性糖，提高了培養(yǎng)基的碳/氮比，從而抑制了種子的萌發(fā)；（5）金線蓮品種之間的膨大萌發(fā)效果相差顯著。

種子萌發(fā)是一個(gè)復(fù)雜的植物生理過(guò)程，在自然環(huán)境中，金線蓮種子只有經(jīng)過(guò)適宜的真菌侵染才能萌發(fā)，且萌發(fā)率低，因而其野生資源十分匱乏。金線蓮每個(gè)果莢中都含有成千上萬(wàn)粒種子，通過(guò)無(wú)菌播種手段可以使之萌發(fā)成苗，應(yīng)用于生產(chǎn)上可以加速金線蓮的繁殖，為中藥材和花卉市場(chǎng)提供大量的商品苗，具有良好的應(yīng)用前景。此外，通過(guò)無(wú)菌播種手段也可以促進(jìn)金線蓮資源的再生，對(duì)野生資源的保護(hù)也會(huì)起到積極的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]鐘岑生. 金線蓮的藥用價(jià)值與開(kāi)發(fā)[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（2）：51-53.

[2]李介元. 臺(tái)灣金線蓮[J]. 臺(tái)灣農(nóng)業(yè)探索，2001（2）：42.

[3]陳裕，林坤瑞，管其寬，等. 金線蓮生物學(xué)特性及生境特點(diǎn)的研究[J]. 亞熱帶植物通訊，1994，23（1）：18-24.

[4]蔡文燕，肖華山，范秀珍.金線蓮研究進(jìn)展（綜述）[J]. 亞熱帶植物科學(xué)，2003，32（3）：68-72.

[5]王建勤，林蘭英，陳鋼. 金線蓮原球莖的誘導(dǎo)與植株再生[J]. 植物學(xué)通報(bào)，1996，13（1）：55-56.

[6]韓曉紅，羅明英，歐陽(yáng)志成，等. 金線蓮原球莖增殖研究[J]. 北方園藝，2012（24）：144-146.

[7]孟志霞，郭順星，于雪梅，等. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)福建金線蓮叢生芽增殖的影響[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（23）：1777-1780.

[8]闞世超，張明生，李花. 金線蓮叢生芽誘導(dǎo)研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（3）：981-982.

[9]伍成厚，馮毅敏，賀漫媚，等. 金線蓮種子培養(yǎng)的研究[J]. 中國(guó)野生植物資源，2008，27（1）：47-50.

[10]羅安雄，孟志霞，陳曉梅，等. 福建金線蓮種子萌發(fā)及幼苗培養(yǎng)研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47（15）：1199-1203.

[11]張娟娟，嚴(yán)寧，胡虹. 三種兜蘭屬植物種子發(fā)育過(guò)程及其與無(wú)菌萌發(fā)的關(guān)系[J]. 植物分類與資源學(xué)報(bào)，2013，35（1）：33-40.

[12]許智宏，薛紅衛(wèi). 植物激素作用的分子機(jī)理[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012.馬鳳霞，趙權(quán). 乙烯利、ABA對(duì)北五味子品質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：218-220.endprint

2.2.3生長(zhǎng)激素組合對(duì)種子萌發(fā)的影響由表6可知，單獨(dú)使用NAA對(duì)金線蓮種子膨大萌發(fā)最為有利，高于NAA與6-BA不同濃度的組合配比；而單獨(dú)添加6-BA的膨大率低于空白對(duì)照組，萌發(fā)率與空白對(duì)照組無(wú)顯著性差異；隨著6-BA濃度的升高，膨大率、萌發(fā)率出現(xiàn)一定的升高趨勢(shì)，但差異不顯著。推測(cè)可能是低濃度的6-BA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)有一定的抑制作用。

2.2.4水果添加物對(duì)種子萌發(fā)的影響由表7可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，添加不同的水果有機(jī)物對(duì)金線蓮種子膨大有一定的促進(jìn)作用，且不同處理間存在顯著差異。其膨大率大小為：香蕉汁>馬鈴薯汁>蘋果汁>椰子汁；萌發(fā)率大小為：馬鈴薯汁、蘋果汁>椰子汁>香蕉汁。可以看出，加入香蕉汁的培養(yǎng)基對(duì)種子膨大的促進(jìn)效果比添加椰子汁、蘋果汁和馬鈴薯汁的更顯著，但添加香蕉汁的培養(yǎng)基在種子萌發(fā)成幼苗時(shí)的萌發(fā)率比其他3組顯著下降，這說(shuō)明香蕉有促進(jìn)種子吸水膨大的良好效果，但同時(shí)在種子萌發(fā)成苗的過(guò)程中起一定的抑制作用。綜合試驗(yàn)結(jié)果可知，添加馬鈴薯汁對(duì)金線蓮種子的膨大、萌發(fā)最有利。

3結(jié)論

通過(guò)種子無(wú)菌播種，可縮短雜交育種周期，提高育種效率，加快種苗規(guī)?；a(chǎn)進(jìn)程，是金線蓮種質(zhì)資源保存利用的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。目前國(guó)內(nèi)在金線蓮無(wú)菌播種技術(shù)應(yīng)用研究方面做得比較少，且金線蓮不同品種對(duì)基本培養(yǎng)基、激素組合配比和水果添加物的選擇等有一定的差別。因此，本試驗(yàn)以2個(gè)金線蓮品種的雜交蒴果為材料，探討了蒴果采收時(shí)間、培養(yǎng)基成分、激素組合配比等因素對(duì)種子膨大萌發(fā)的影響，結(jié)果表明：（1）授粉后45 d的種子無(wú)菌播種后膨大率、萌發(fā)率都顯著高于52 d的，這與張娟娟等研究的某些蘭科植物的種子成熟前比成熟后在無(wú)菌萌發(fā)過(guò)程中具有較高的萌發(fā)率相一致[11]，推測(cè)可能是由于種皮開(kāi)始皺縮，木質(zhì)素類物質(zhì)積累，種皮透水性下降導(dǎo)致萌發(fā)率下降，因此金線蓮在野生環(huán)境下需要相應(yīng)的共生真菌侵染后才能萌發(fā)；（2）4種培養(yǎng)基中MS無(wú)機(jī)鹽含量最高，屬于高鹽培養(yǎng)基，1/2MS為中鹽培養(yǎng)基，WPM也是中鹽培養(yǎng)基，但相對(duì)而言鈣、鉀含量高，這說(shuō)明低磷濃度有利于金線蓮種子的萌發(fā)，而高濃度的無(wú)機(jī)鹽含量不利于其膨大萌發(fā)，KC屬于低鹽培養(yǎng)基，且營(yíng)養(yǎng)成分比較簡(jiǎn)單，可能不足以支持種子的萌發(fā)，同時(shí)說(shuō)明金線蓮種子萌發(fā)需要有充足的營(yíng)養(yǎng)；（3）本試驗(yàn)中單獨(dú)使用NAA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)最為有利，顯著高于NAA與6-BA不同濃度組合配比，推測(cè)可能是細(xì)胞分裂素信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過(guò)磷酸基團(tuán)在主要組分之間連續(xù)傳遞而實(shí)現(xiàn)的[12]，而低磷濃度有利于金線蓮種子的萌發(fā)，因此6-BA對(duì)金線蓮種子萌發(fā)起不到促進(jìn)作用，NAA與6-BA同時(shí)配合使用時(shí)，6-BA通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞的分化，在一定程度上對(duì)抗著NAA的作用，因此NAA與6-BA不同濃度組合與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異，也可能是激素濃度范圍過(guò)小或激素種類過(guò)少造成的結(jié)果，在以后的試驗(yàn)中可以適當(dāng)擴(kuò)大激素范圍濃度和種類；（4）天然水果添加物的成分比較復(fù)雜，大多含有氨基酸、激素、酶等一些復(fù)雜的化合物，它們對(duì)細(xì)胞和組織的增殖、分化有明顯的促進(jìn)作用，培養(yǎng)基中添加香蕉汁，可有效促進(jìn)金線蓮種子的膨大，卻又抑制了其萌發(fā)，這可能是成熟的香蕉中含有較多的植物生長(zhǎng)激素，有利于膨大，同時(shí)又含有較高的可溶性糖，提高了培養(yǎng)基的碳/氮比，從而抑制了種子的萌發(fā)；（5）金線蓮品種之間的膨大萌發(fā)效果相差顯著。

種子萌發(fā)是一個(gè)復(fù)雜的植物生理過(guò)程，在自然環(huán)境中，金線蓮種子只有經(jīng)過(guò)適宜的真菌侵染才能萌發(fā)，且萌發(fā)率低，因而其野生資源十分匱乏。金線蓮每個(gè)果莢中都含有成千上萬(wàn)粒種子，通過(guò)無(wú)菌播種手段可以使之萌發(fā)成苗，應(yīng)用于生產(chǎn)上可以加速金線蓮的繁殖，為中藥材和花卉市場(chǎng)提供大量的商品苗，具有良好的應(yīng)用前景。此外，通過(guò)無(wú)菌播種手段也可以促進(jìn)金線蓮資源的再生，對(duì)野生資源的保護(hù)也會(huì)起到積極的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]鐘岑生. 金線蓮的藥用價(jià)值與開(kāi)發(fā)[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（2）：51-53.

[2]李介元. 臺(tái)灣金線蓮[J]. 臺(tái)灣農(nóng)業(yè)探索，2001（2）：42.

[3]陳裕，林坤瑞，管其寬，等. 金線蓮生物學(xué)特性及生境特點(diǎn)的研究[J]. 亞熱帶植物通訊，1994，23（1）：18-24.

[4]蔡文燕，肖華山，范秀珍.金線蓮研究進(jìn)展（綜述）[J]. 亞熱帶植物科學(xué)，2003，32（3）：68-72.

[5]王建勤，林蘭英，陳鋼. 金線蓮原球莖的誘導(dǎo)與植株再生[J]. 植物學(xué)通報(bào)，1996，13（1）：55-56.

[6]韓曉紅，羅明英，歐陽(yáng)志成，等. 金線蓮原球莖增殖研究[J]. 北方園藝，2012（24）：144-146.

[7]孟志霞，郭順星，于雪梅，等. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)福建金線蓮叢生芽增殖的影響[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（23）：1777-1780.

[8]闞世超，張明生，李花. 金線蓮叢生芽誘導(dǎo)研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（3）：981-982.

[9]伍成厚，馮毅敏，賀漫媚，等. 金線蓮種子培養(yǎng)的研究[J]. 中國(guó)野生植物資源，2008，27（1）：47-50.

[10]羅安雄，孟志霞，陳曉梅，等. 福建金線蓮種子萌發(fā)及幼苗培養(yǎng)研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47（15）：1199-1203.

[11]張娟娟，嚴(yán)寧，胡虹. 三種兜蘭屬植物種子發(fā)育過(guò)程及其與無(wú)菌萌發(fā)的關(guān)系[J]. 植物分類與資源學(xué)報(bào)，2013，35（1）：33-40.

[12]許智宏，薛紅衛(wèi). 植物激素作用的分子機(jī)理[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012.馬鳳霞，趙權(quán). 乙烯利、ABA對(duì)北五味子品質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：218-220.endprint