幾種精液處理方法在宮腔內(nèi)人工受精中的選擇

張斕，劉燦華

(吉安市中心人民醫(yī)院1、核醫(yī)學(xué)科2、輸血科，江西 吉安343000)

隨著輔助生殖技術(shù)的迅速發(fā)展，精液體外處理的方法也越來越多，每一種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)。洗滌法是精子經(jīng)過洗滌可有效去除精液中的前列腺素，去獲能因子，抗精子抗體等，使精子獲能，提高精子受精能力，但不能很好去除白細(xì)胞、細(xì)胞碎片、細(xì)菌及死精子等。標(biāo)準(zhǔn)上游法是利用精子具有主動(dòng)游過液體界面進(jìn)入不同培養(yǎng)液的能力，而達(dá)到自行與死精、凝集精子、畸形精子和細(xì)胞雜質(zhì)分離的目的。獲得的精子活力、活率較高，達(dá)90%以上。但卻存在精子回收率較低的缺點(diǎn),僅適用于精子活動(dòng)力、密度均正常的患者。而Isolate密度梯度離心法則是利用不同成熟階段的精子和各種細(xì)胞成分各自的密度差異，使之在不同濃度的溶液中，在離心力作用下停留在不同密度的界面上，達(dá)到較好的分離目的，處理后精子數(shù)回收較高，處理的時(shí)間短，但由于離心時(shí)間長，可能對(duì)精子造成物理損傷如頂體的松動(dòng)或不完整等，處理后死精子相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)上游法多，回收的精子活動(dòng)率較標(biāo)準(zhǔn)上游法低，可能引起精子受精功能下降等[1]。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取在本院2009年1月至2012年12月98例夫精宮腔內(nèi)人工受精 (IUI)患者，共162個(gè)周期為研究對(duì)象，年齡22～38歲，平均(26.5±4.5)歲，原發(fā)性不孕62例，繼發(fā)性不孕36例，不孕時(shí)間2～8年。不孕、不育原因：男性因素(少、弱精，心理因素，射精功能異常，液化異常，免疫性因素)70例，女性因素(輕、中度子宮內(nèi)膜異位癥，宮頸黏液分泌異常，排卵障礙，免疫性因素)26例，不明原因性不孕2例。根據(jù)患者精液質(zhì)量情況，接受IUI時(shí)選擇的精液處理方法分成三組。其中80個(gè)周期采用梯度離心法處理精液為一組，62個(gè)周期采用標(biāo)準(zhǔn)上游法處理精液為一組，20個(gè)周期采用兩次洗滌處理精液為另一組。

1.2 設(shè)備與試劑 WLJY-9000偉力彩色精子分析儀、超凈工作臺(tái)(蘇州凈化)、水平離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、HTF-HEEPS、10%SSS、Isolate 精子分離液等。

1.3 處理方法

1.3.1 精液的采集 禁欲3～5d，在IUI日手淫法留取整份精液在無毒性一次性取精杯中，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中等精液完全液化后處理。

1.3.2 精液的處理 兩次洗滌法：一份精液加一份10%SSSHTF-HEEPS 稀釋，200g×10min，去上清液，沉淀加2ml10%SSSHTF-HEEPS混勻，離心洗滌兩次后，沉淀加0.5ml10%SSSHTF-HEEPS混勻做受精用。標(biāo)準(zhǔn)上游法：取試管數(shù)支，每管加入2.0ml精子培養(yǎng)液。再分別將0.5ml液化精液慢慢加入試管底部，使其形成兩個(gè)界面。加蓋，45°傾斜，置于37℃、5%CO2孵箱中30～60min。收集各管上清液，離心200g×5min，棄上清液，加2ml培養(yǎng)液，打允后離心200g×5min。留沉淀物，加0.5ml培養(yǎng)液制成精子懸液，調(diào)整精子濃度 10×106～30×106/ml備用[2]。

Isolate密度梯度離心法：向錐底離心試管內(nèi)分別加入Lower phase和Upper phase各1ml、精液2 ml，300g×20min，棄上清液，留沉淀物，加 2ml洗精液，打勻后，離心200g×5min，重復(fù)洗滌2次后，棄上清液。留沉淀物，加0.5ml培養(yǎng)液制成精子懸液備用。

2 結(jié)果

精液處理前應(yīng)取少許精液涂片在顯微鏡下觀查：精液的密度、活力、活率等，并根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果選擇相應(yīng)的精液處理方式。三組妊娠率比較見表1，三組精液處理方法在處理前、后精子密度、活率、活力比較見表2。標(biāo)準(zhǔn)上游法、密度梯度離心法兩組之間妊娠率無顯著差異 (P＞0.05),標(biāo)準(zhǔn)上游法、密度梯度離心法組與兩次洗滌法組之間妊娠率有顯著差異(P＜0.05)；標(biāo)準(zhǔn)上游法、密度梯度離心法組與兩次洗滌法組處理后精子密度、活率、活力有顯著差異(P＜0.05)。

表1 三種方法處理后妊娠率比較

表2 三種方法處理前、后精子密度、活率、活力比較

3 討論

影響宮腔內(nèi)人工受精的因素很多，而臨床提高人工受精的妊娠率的關(guān)鍵是適應(yīng)癥的選擇，精子的處理方法，排卵的監(jiān)測(cè)，IUI的時(shí)機(jī)選擇等。因此，選擇相應(yīng)的精液處理方法是人工受精取得成功的關(guān)鍵之一。綜上所述,筆者認(rèn)為，女方因素引起的不孕(如多囊卵巢等)，排除男方因素，宜采用標(biāo)準(zhǔn)上游法優(yōu)選精子；男方因素引起的不育[3](如少精、弱精及精液量不足1ml)宜采用梯度離心法優(yōu)選精子較好；男方因素引起的不育[3](如活力、活率太低)排除女方因素，宜采用洗滌法?？傊?，根據(jù)患者精液情況，采用相應(yīng)的處理方法，以提高臨床妊娠率，服務(wù)于更多的患者。

[1]劉燦華,張斕,陳銘,等.梯度離心法與標(biāo)準(zhǔn)上游法在宮腔內(nèi)人工授精(IUI)中應(yīng)用比較[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,31(6):469-470.

[2]鄧曉惠.生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)及其彩色圖譜[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社,2004:45.

[3]羅明,盧雪芳,饒研文.精漿鋅濃度檢測(cè)在不育癥患者中的臨床應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(3):259-260.