不同種類的促滲劑對(duì)芍藥苷透皮吸收的影響

江蘇省泰州市中醫(yī)院（225300) 吳紅旗

赤芍具疏肝理氣、柔肝養(yǎng)血、緩中止痛、抗炎抗?jié)冎π1]，在多種中藥復(fù)方巴布劑中作為君藥或臣藥使用[2][3][4]，芍藥苷為此類巴布劑中散瘀鎮(zhèn)痛、抗炎的主要活性成分[5]，但其為親水性藥物，且分子量較大（480.45），如不加入促滲劑，透皮效果并不理想。因此研究不同促滲劑對(duì)赤芍中主成分芍藥苷透皮的影響，可為赤芍復(fù)方透皮制劑的研究提供基礎(chǔ)。選擇了氮酮、卡波姆、薄荷醇、丙二醇、β-環(huán)糊精及泊洛沙姆，這6種促滲劑來(lái)研究他們對(duì)芍藥苷透皮吸收的影響。選用增滲比(enhancement ratio, ER)、透皮速率常數(shù)(Js)及滯后時(shí)間(Tlag)作為考察指標(biāo)，利用高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷含量，對(duì)促滲劑品種及用量進(jìn)行篩選。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀：包括DAD檢測(cè)器，四元泵；BP-211D分析電子天平(德國(guó)Sartorius公司)；TP-3透皮擴(kuò)散儀(南京新聯(lián)電子設(shè)備有限公司)。

1.2 動(dòng)物與試劑、藥品 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性昆明種小鼠，體重(22±2) g(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司)。試劑、藥品：芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%，南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司）；乙腈(TEDIA)；氮酮、卡波姆、薄荷醇、丙二醇、β-環(huán)糊精、泊洛沙姆（均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 離體鼠皮的制備 將雄性小鼠斷頸處死，剃干凈腹部毛，剪取腹部皮膚，隨后平鋪于干凈的玻璃板上，仔細(xì)剝離皮下脂肪層和結(jié)締組織，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，置于生理鹽水內(nèi)，于低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

附圖 芍藥苷色譜圖 注：A.標(biāo)準(zhǔn)品；B.透皮樣品；1.芍藥苷

2.1.2 供給液的配置 配置濃度分別為0.1%、0.2%及0.3%的卡波姆溶液，及4%的氮酮、薄荷醇、環(huán)糊精、泊洛沙姆及丙二醇溶液，分別往上述溶液中加入芍藥苷，最終配置成濃度為1mg/mL的芍藥苷溶液。

2.1.3 透皮實(shí)驗(yàn) 采用滲透擴(kuò)散裝置為垂直式Franz擴(kuò)散池。從冰箱中取出備用皮膚，自然解凍，將皮膚固定于Franz擴(kuò)散池上(擴(kuò)散池面積為2.0034cm2，體積為20.0mL)，用彈簧夾固定，在供給池中加入2mL的供給液，接受池中加滿生理鹽水作為接收液，以37℃水浴保溫，磁力攪拌子以100 r·min-1的速度攪拌。分別于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h取出接收室中1 mL接收液，隨即補(bǔ)加等量的新鮮接收介質(zhì)。

2.2 分析方法

2.2.1 高效液相色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18(5μm,4.6 mm×150 mm)，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(14∶86)，檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm，流速:1.0 mL/min，進(jìn)樣量：20μL。見(jiàn)附圖。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取芍藥苷對(duì)照品1.00mg，置10mL量瓶中，加甲醇使之溶解，并稀釋至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別配置得芍藥苷濃度分別為0.5、10、20、30、50、100μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)液。以芍藥苷的質(zhì)量濃度(x，μg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A= 33.572x-3.374，R = 0.9995。線性范圍為：0.5μg/mL～100μg/mL。

附表1 不同種類促滲劑對(duì)芍藥苷促滲作用的滲透動(dòng)力學(xué)方程及滲透參數(shù) (n=3, mean±s)

附表2 不同濃度卡波姆對(duì)芍藥苷促滲作用的滲透動(dòng)力學(xué)方程及滲透參數(shù)(n=3, mean±s)

2.2.3 精密度試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn) 取濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，自動(dòng)進(jìn)樣20μL，重復(fù)6次，芍藥苷峰面積RSD值為1.49%。同樣取濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，自動(dòng)進(jìn)樣20μL，每隔2h進(jìn)樣1次，8h內(nèi)4次測(cè)定結(jié)果的峰面積基本保持不變，芍藥苷峰面積RSD值為1.34%。

2.2.4 接受液的預(yù)處理 將分別在l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h時(shí)抽取的1.0mL接受液，置于1.5mL的離心管中，在恒溫水浴鍋上60℃揮干，加入1.0mL甲醇，超聲波振蕩溶解殘?jiān)?4000 r/min離心15min，吸取上澄清液0.5mL移至高效液相樣品瓶中[6]。

2.3 結(jié)果

2.3.1 芍藥苷的累計(jì)滲透量(Q) 實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)散池容積為20.0mL，有效擴(kuò)散面積為2.0034cm2，取樣量為1 mL，按照下列公式計(jì)算累積透過(guò)量Q(μg/cm2)。其中，Cn為t時(shí)間濃度的測(cè)量值，Ci為t時(shí)間以前濃度的測(cè)量值，Vo為接收液的總體積，Vi為每次取樣的體積，A為有效擴(kuò)散面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)附表1。

2.3.2 芍藥苷的透皮速率常數(shù)（Js） 以芍藥苷的累計(jì)滲透量(Q)對(duì)滲透時(shí)間t進(jìn)行線性回歸，所得方程即為滲透動(dòng)力學(xué)方程[7]，其斜率為芍藥苷的透皮速率常數(shù)Js（ μg·h-1·cm-2），結(jié)果見(jiàn)附表1、附表2 。直線與X軸的交點(diǎn)為滯后時(shí)間（Tlag）。增滲比（ER）為加入滲透促進(jìn)劑后與未加入滲透促進(jìn)劑時(shí)藥物在12h內(nèi)的透皮速率常數(shù)之比。所有數(shù)據(jù)都用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)考察了薄荷醇、丙二醇、卡波姆、泊洛沙姆、β-環(huán)糊精、及氮酮對(duì)芍藥苷的促滲作用。實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，卡波姆及氮酮對(duì)芍藥苷均具有顯著的促滲作用，與空白組相比，ER分別為5.598及5.300。泊洛沙姆、β-環(huán)糊精、薄荷醇、丙二醇的ER較小，均在1.5左右。

氮酮對(duì)芍藥苷的促滲效果較好，但與卡波姆相比氮酮存在皮膚刺激性[8]。卡波姆遇水后可形成溶脹的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，皮膚粘附效果好，形成的親水凝膠可以吸收組織滲透液，有利于分泌物的排除，增加皮膚角質(zhì)層的含水量，使基底角質(zhì)層的細(xì)胞膨脹，藥物在該層形成儲(chǔ)庫(kù)，從而維持一定的藥物釋放和作用時(shí)間，促進(jìn)水溶性物質(zhì)經(jīng)水性通道滲透吸收，這也可能是卡波姆對(duì)芍藥苷促滲效果好的原因。

進(jìn)一步選擇卡波姆作為芍藥苷的透皮吸收促滲劑，并考察了不同濃度卡波姆溶液對(duì)芍藥苷的促滲作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)附表2。結(jié)果表明，0.2%卡波姆凝膠促滲效果最好，促滲效果并沒(méi)有隨著卡波姆濃度的提高而增加，可能是因?yàn)殡S著濃度的增加，卡波姆的粘度增大，阻滯作用增強(qiáng)，對(duì)藥物的促滲作用降低。因此，最終選擇0.2%卡波姆凝膠作為芍藥苷的透皮吸收促滲劑，這為芍藥苷透皮吸收制劑處方的優(yōu)化提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。