維藥白花丹的質(zhì)量標準

孫 宇，卿德剛，張 娟，倪 慧，賈曉光

(新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆烏魯木齊 830002)

白花丹Plumbago zeylanica L.系白花丹科植物，為維吾爾醫(yī)常用藥，維語名稱為夏特然吉印地，藥用部位為干燥莖枝［1］。白花丹具有消除異常體液，開通濕寒氣阻，清音利咽止痛，消食助陽療膚等功效。在維吾爾醫(yī)藥中常用于皮膚白斑，白癜風，癱瘓，面癱及關節(jié)疼痛等病的治療［2-4］。近些年來制劑產(chǎn)品快速發(fā)展，新疆地區(qū)白花丹藥材需求量逐年增加。由于質(zhì)量標準不完善，現(xiàn)行標準中僅有性狀鑒別、顯微鑒別和性質(zhì)、功能主治等內(nèi)容，致使目前藥材市場上藥材來源混亂，質(zhì)量參差不齊。為了進一步提高白花丹藥材的質(zhì)量控制水平，本實驗首先確定了維藥中使用的白花丹藥材基源，后對不同產(chǎn)地藥材的性狀鑒別、顯微鑒別［5-6］、薄層鑒別［7-9］及水分、灰分、浸出物［10］及白花丹醌的量［11-13］等項目進行研究，為維藥白花丹質(zhì)量標準的提高提供了的科學數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2010CHT型高效液相色譜儀;Mettler AE163電子天平;徠卡RM2245旋轉(zhuǎn)切片機;Olympus BX51光學顯微鏡。

1.2 試藥 白花丹醌對照品 (批號P7262)購自美國Sigma公司。液相用甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。白花丹藥材采購自新疆烏魯木齊、和田、喀什及廣西恭城、南寧等地，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所主任藥師劉勇民鑒定均為白花丹科植物白花丹Plumbago zeylanica L.不帶葉干燥莖枝。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材性狀鑒別 本品藥用部位為白花丹的干燥莖枝，莖呈長圓柱形，長短不一，有時可見明顯的節(jié)，具細縱棱，直徑2～8 mm，表面綠色、黃綠色至淡棕褐色。質(zhì)輕，易折斷，斷面皮部纖維狀，內(nèi)層顆粒狀，髓部類白色，海綿狀，松軟;氣微，味淡。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 白花丹莖橫切面顯微特征 表皮細胞1列，橢圓形，切線延長;外被角質(zhì)層。皮內(nèi)側(cè)有2～3列厚壁細胞，棱脊處多達6～8列;皮層為2～8列薄壁細胞，散有分泌細胞，內(nèi)含棕黃色團塊;中柱鞘纖維3～6列，排列成波狀環(huán)形，棱脊處較多;維管束外韌性，導管單個或數(shù)個成群，徑向排列，形成層不明顯，髓部薄壁細胞呈長圓形，可見紋孔，老枝木部較寬。見圖1。

圖1 白花丹顯微鑒別莖橫截面切片圖Fig.1 Microscopic identification of Plumbago zeylanica L.stem cross-sectional slices

2.2.2 白花丹藥材粉末特征 粉末呈淡黃綠色至淡棕黃色。氣孔環(huán)式，副衛(wèi)細胞多3個，大小近相等。惡腺 (硅質(zhì)細胞)近圓形，直徑35～40微米;表面具“十”字交叉及類方形紋理;導管網(wǎng)紋、具緣紋孔或環(huán)紋，直徑10～45微米;髓細胞類長方形，長70～140微米，寬40～70微米，表面具圓形壁孔，纖維長梭形，直徑10～30微米，壁孔明顯。見圖2。

圖2 白花丹顯微鑒別粉末拼圖Fig.2 Microscopic identification of Plumbago zeylanica L.powder jigsaw

2.3 薄層色譜鑒別 取本品粉末5 g，加甲醇50 mL，超聲提取30 min，放冷，濾過，取濾液加入50 mL水，混勻后，用三氯甲烷振搖提取2次，每次50 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加1 mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取白花丹醌對照品，用甲醇配制成0.1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液15 μL，對照品溶液10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰乙酸 (7.5∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干。置氨水蒸氣中熏至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在于對照品相應的位置上，顯相同的紫色斑點。見圖3。

圖3 白花丹藥材薄層色譜圖Fig.3 TLC chromatograms of Plumbago herbs

2.4 水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 水分測定、灰分測定、醇溶性浸出物測定分別按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨH(烘干法)、附錄ⅨK、附錄ⅩA(醇溶性浸出物測定法)等項下方法進行測定。結(jié)果含水量為5.8% ～8.3%，總灰分含有量2.97%～8.75%，醇溶性浸出物含有量為9.92% ～17.46%。

2.5 樣品中白花丹醌測定

2.5.1 色譜條件 島津 LC solution工作站;Waters XTerra RPC18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);以甲醇-水 (60∶40)為流動相;紫外檢測器，檢測波長270 nm;柱溫25℃;進樣量10 μL。對照品及樣品的HPLC圖見圖4。

圖4 白花丹藥材及白花丹醌對照品色譜圖Fig.4 HPLC chromatogramsofPlumbagoherbs and plumbagin

2.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取白花丹醌對照品1.74 mg，加25 mL甲醇溶解制成每1 mL含69.6 μg的溶液，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 取白花丹藥材粉末(過二號篩)約 1.5 g(廣西南寧產(chǎn)，批號20120310)，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入30 mL甲醇，精密稱定，超聲提取30 min，取出，待冷卻后，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。

2.5.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 μL，在色譜條件下，依次進樣，以對照品進樣量 (μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程，Y=414893X －103703，r=0.9998。結(jié)果表明白花丹醌在0.0286～0.4576 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.5.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液10 μL，按“2.5.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算，RSD為0.13%，表明儀器精密度良好。

2.5.6 重復性試驗 取同一批次樣品6份，按“2.5.3”項下制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣，測定白花丹醌的峰面積，計算，結(jié)果RSD為1.3%。

2.5.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別在制備后0、2、4、8、10、12、24 h進樣測定，測定白花丹醌峰面積的RSD值為0.82%。表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.8 加樣回收率試驗 取已知含有量的樣品(廣西南寧產(chǎn)，批號20120310)1.5 g共6份，精密稱定，分別加入相同量的質(zhì)量濃度為69.6 μg/mL的對照品溶液。按“2.5.3”項下制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests

2.5.9 樣品測定 取12批白花丹樣品，精密稱定，分別按“2.5.3”項下制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，計算，結(jié)果見表2。

3 結(jié)論與討論

3.1 本實驗對收集到的白花丹藥材進行了性狀鑒別及顯微鑒別實驗，發(fā)現(xiàn)藥材性狀特征基本一致;藥材莖橫截面顯微圖譜中發(fā)現(xiàn)皮層細胞中常含有棕黃色分泌細胞;藥材粉末鑒別中發(fā)現(xiàn)呈“十”字交叉及類方形紋理，近圓形的惡腺 (硅質(zhì)細胞)，以上特征穩(wěn)定，可作為維藥白花丹藥材顯微鑒別的主要特征。

表2 12批白花丹藥材來源及測定結(jié)果Tab.2 Medicinal sources of 12 batches of Plumbago herbs and measurement results

3.2 分別考察了三氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯等不同薄層展開體系;分別對10批樣品進行鑒別實驗，結(jié)果表明石油醚-乙酸乙酯-冰乙酸 (7.5∶1∶0.5)作為展開劑，實驗結(jié)果分離度好，斑點相對位置和重復性好。比較了國家藥典規(guī)定使用的5種硅膠板，結(jié)果表明均可對白花丹中的白花丹醌進行定性鑒別。

3.3 采用國家藥典附錄方法，對藥材的水分、灰分、浸出物及有效成分的量進行了檢查，根據(jù)所測結(jié)果，擬定:白花丹藥材 (主要是新疆地區(qū))水分不得過9.0%;總灰分不得過9.0%;醇溶性浸出物不得少于10.0%。

3.4 對提取溶劑 (甲醇、乙醇、三氯甲烷等)、提取方法 (冷浸、超聲、回流提取)、提取時間、提取溶劑進行考察，最終建立了白花丹藥材中白花丹醌的HPLC定量測定的方法，對12批白花丹藥材進行了定性定量分析，結(jié)果表明各樣品均可檢出白花丹醌，其在不同產(chǎn)地的樣品中含有量差異較大，有必要進行質(zhì)量控制。

本研究建立的維藥白花丹的定性、定量檢測方法具有簡便、準確、靈敏度高、重復性好等特點，可為維吾爾藥白花丹質(zhì)量標準的提升、促進其深層次的開發(fā)利用提供一定的科學依據(jù)。

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