兩種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)對糖鏈抗原19－9測定結(jié)果的可比性研究

彭又生，陳偉彥，李健雄（廣東省江門市中心醫(yī)院 529070）

20世紀(jì)80年代，專家利用雜交瘤技術(shù)獲得了能識別腫瘤特異性大分子糖蛋白抗原（CA），并研制了單克隆抗體識別系統(tǒng)。CA19－9抗原決定簇是唾液酸化Ⅱ型乳酸巖藻糖，對于胰腺癌等消化道腫瘤有重要的臨床意義［1］。目前，常用于CA19－9檢測的方法有酶標(biāo)記法、放射免疫法以及化學(xué)發(fā)光法，因化學(xué)發(fā)光法檢測CA19－9具有高度敏感性和特異性在臨床廣泛應(yīng)用。由于不同廠商的檢測系統(tǒng)采用不同的檢測方法，所使用的發(fā)光底物也不同，這就可能造成相同樣品在不同系統(tǒng)檢測時結(jié)果不一致，給臨床疾病的診斷及預(yù)后判斷帶來不便［2］。因此，本研究對本科室2種常用的CA19－9檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，確定其相關(guān)性。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本來源 按美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）EP9－A2文件制備標(biāo)本，收集江門市中心醫(yī)院2013年7月8～18日檢測CA19－9的新鮮血清，并從中抽取40份（低值10份，中值20份，高值10份）作為檢測標(biāo)本。

1．2 儀器與試劑 Cobas e 411電化學(xué)發(fā)光儀、Beckman Dxi800化學(xué)發(fā)光儀，試劑和校準(zhǔn)物均用其各自配套產(chǎn)品。Cobas e CA19－9試劑批號為17078504；Cobas e CA19－9校準(zhǔn)物批號為16877201。Beckman CA19－9試劑批號為230437；Beckman CA19－9校準(zhǔn)物批號為219439。Cobas e 411發(fā)光系統(tǒng)用A系統(tǒng)代表；Beckman Dxi800發(fā)光系統(tǒng)用B系統(tǒng)代表。

1．3 方法

1．3．1 取高低兩個濃度的BIO－RAD質(zhì)控物在兩種化學(xué)發(fā)光檢測儀器上分別進(jìn)行檢測，每份標(biāo)本連續(xù)測定20次，計算批內(nèi)變異系數(shù)（CV）值，每日測定1次，連續(xù)測定20d，計算批間CV值。

1．3．2 用配套定標(biāo)液對所檢測的項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)，同時做好質(zhì)控，按EP9－A2將收集標(biāo)本分別在2臺分析儀上及時進(jìn)行檢測。

1．3．3 計算方法間的系統(tǒng)誤差，根據(jù)臨床使用要求，以CA19－9生物學(xué)變異確定的最佳允許總誤差（TEa）22．1%為標(biāo)準(zhǔn)［3］，計算B系統(tǒng)和A系統(tǒng)之間的系統(tǒng)誤差即預(yù)期偏倚（SE）和相對偏倚（SE%），在CA19－9參考值上限25U／mL和250U／mL（CA19－9目前無醫(yī)學(xué)決定濃度）（Xc）代入回歸方程，計算Y與X之間的系統(tǒng)誤差及預(yù)期偏倚（SE）。SE＝｜Y－X｜；SE%＝（SE／Xc）×100%。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS19．0統(tǒng)計學(xué)軟件對2種檢測系統(tǒng)相互間的差異作秩和檢驗(yàn)，采用Wilcoxon檢驗(yàn)。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。用Excel2003做離群值檢驗(yàn)。以A系統(tǒng)作為基準(zhǔn)系統(tǒng)，另外B系統(tǒng)與之做相關(guān)回歸分析，計算線性回歸方程YB＝aXA＋b。

2 結(jié) 果

2．1 兩種系統(tǒng)重復(fù)性試驗(yàn)的結(jié)果 A、B分析系統(tǒng)低值批內(nèi)CV分別為4．74%和4．75%；高值批內(nèi)CV分別為4．33%和5．16%。A、B分析系統(tǒng)低值批間CV分別為4．87%和5．74%，高值批間CV分別為4．42%和6．02%。兩系統(tǒng)精密度良好，適合進(jìn)行可比性研究。具體結(jié)果見表1。

表1 A、B兩種分析系統(tǒng)質(zhì)控物測定結(jié)果

2．2 秩和檢驗(yàn)結(jié)果 A與B系統(tǒng)Wilcoxon檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）。見表2。

表2 兩種分析系統(tǒng)CA19－9血清測定結(jié)果

圖1 A和B系統(tǒng)測定血清CA19－9結(jié)果的相關(guān)性

2．3 兩種檢測系統(tǒng)的相關(guān)性 用Excel2003計算離群值檢驗(yàn)合格后（實(shí)驗(yàn)時有一組間離群值，計算時刪除該值，補(bǔ)測一標(biāo)本），以A系統(tǒng)作為基準(zhǔn)系統(tǒng)，B系統(tǒng)與A系統(tǒng)相關(guān)回歸方程為YB＝1．081 2 XA－4．848 4，r2＝0．962 2。r2＞0．95，說明回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠，可以估計不同檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差。見圖1。

2．4 各發(fā)光檢測系統(tǒng)臨床可接受性能評價 以A系統(tǒng)作為基準(zhǔn)系統(tǒng)，在CA19－9在測定濃度為25U／mL和250U／mL處，對B系統(tǒng)和A系統(tǒng)之間的SE和SE%進(jìn)行計算。以是否小于CA19－9生物學(xué)變異確定的最佳的TEa22．1%為標(biāo)準(zhǔn)，臨床可接受性性能評價為可接受，見表3。

表3 2種檢測系統(tǒng)的臨床可接受性能評價（A系統(tǒng)作為基準(zhǔn)系統(tǒng)）

3 討 論

CA19－9抗原決定簇是唾液酸化Ⅱ型乳酸巖藻糖，是腫瘤細(xì)胞神經(jīng)節(jié)苷脂。CA19－9的特異單抗1116NS99是1981年從大腸腺癌系和免疫鼠雜交瘤產(chǎn)物分離而來，相對分子質(zhì)量210×103。CA19－9升高見于胰腺癌、肝膽系癌、胃癌、結(jié)直腸癌、慢性胰腺炎、糖尿病等疾?。?］。CA19－9的檢測方法有放射免疫分析、酶免疫分析和化學(xué)發(fā)光免疫分析等多種方法。同一實(shí)驗(yàn)室有時會用不同檢測系統(tǒng)進(jìn)行相同檢驗(yàn)項(xiàng)目的檢測，但結(jié)果是否具有可比性需要進(jìn)行研究。本文按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）EP9－A2文件要求，對2種全自動免疫分析儀檢測結(jié)果進(jìn)行比對。2種系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，精密度均處于理想水平，可保證結(jié)果的可靠性。40例新鮮血清比對結(jié)果顯示，不同檢測系統(tǒng)血清CA19－9檢測值的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05，r2＞0．95），說明這2種系統(tǒng)檢測的CA19－9結(jié)果相關(guān)性好，以CA19－9生物學(xué)變異確定的TEa22．1%為標(biāo)準(zhǔn)，符合臨床可接受性能評價。

雖然以生物學(xué)變異為標(biāo)準(zhǔn)通過了臨床可接受性能評價，但是CA19－9方法間SE%較大，本次實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)一組間離群值。因CA19－9屬于既無參考測量程序又無參考物的項(xiàng)目，方法學(xué)狀況復(fù)雜多樣，系統(tǒng)間CV較大。Reinaur等［5］報道的室間質(zhì)評結(jié)果中顯示，CA系列項(xiàng)目的中位數(shù)組間CV相對于其他腫瘤標(biāo)志項(xiàng)目大。導(dǎo)致CA19－9測定方法和儀器系統(tǒng)檢測結(jié)果差異的原因主要有兩方面：其一，每家公司通常使用自己開發(fā)的特異性抗體和方法［6－7］，抗體的特異性和親和性不同，原理也不相同。Cobas e 411采用三聯(lián)吡啶釕為底物的電化學(xué)發(fā)光，Beckman Dxi800采用堿性磷酸酶為底物的化學(xué)發(fā)光。其二，不同公司使用不同的校準(zhǔn)物，校準(zhǔn)物賦值方法和過程不同，由于生產(chǎn)廠商各自選擇了自己的“候選參考方法”和“參考物”。如Roche公司的CA系列根據(jù)其“Enzymun－Tes”進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，后者又溯源至Fujirebio公司的RIA方法［7］。此外，對本次試驗(yàn)中一組間離群值進(jìn)行追蹤分析，排除偶然誤差和系統(tǒng)誤差引起，應(yīng)是免疫反應(yīng)的特異性有局限所引起。腫瘤患者體內(nèi)其他高濃度CA可能會產(chǎn)生交叉反應(yīng)，不同試抗體中其抗原結(jié)合位點(diǎn)特異性識別能力的高低，以及患者體內(nèi)存在嗜異性抗體可競爭性結(jié)合CA19－9，而不同檢測系統(tǒng)排除上述干擾的能力差異也較大，這些原因都可能導(dǎo)致測定值的差異和離群值出現(xiàn)［8］。張江濤等［9］認(rèn)為，腫瘤標(biāo)志物評價項(xiàng)目大于80%的方法和儀器系統(tǒng)中位數(shù)之間無可比性，并且CV較大，參考各項(xiàng)目質(zhì)量指標(biāo)，不能實(shí)現(xiàn)結(jié)果可比，但貝克曼系統(tǒng)與羅氏系統(tǒng)間中位數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）。本文檢測結(jié)果與其報道基本相符。建立標(biāo)準(zhǔn)化的免疫檢測系統(tǒng)，需要科研工作者的努力。由于科技的進(jìn)步，方法內(nèi)的精密度已經(jīng)很高［10］，如果能溯源至同一方法，方法間的可比性就會達(dá)到新的水平。

總之，本次研究結(jié)果顯示，以CA19－9生物學(xué)變異確定的TEa22．1%為標(biāo)準(zhǔn)，Cobas e 411檢測系統(tǒng)和Beckman Dxi800檢測系統(tǒng)CA19－9測定結(jié)果臨床可接受性能評價具有可比性。

［1］ 陳壽云，王樹勝，陳炳輝．兩種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合測定對胰腺癌的診斷價值［J］．國外醫(yī)學(xué)：臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊，2005，26（1）：6－7．

［2］ 馮仁豐．臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］．2版．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2003：37－38．

［3］ 王治國．臨床經(jīng)驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：404．

［4］ 周新，府偉靈．臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)［M］．4版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：423．

［5］ Reinauer H，Wood WG．External quality assessment of tumour marker analysis：state of the art and consequences for estimating diagnostic sensitivity and specificity［J］．Ger Med Sci，2005，30（3）：12－15．

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［9］ 張江濤，張傳寶，馬嶸，等．全國腫瘤標(biāo)志檢測室間質(zhì)量評價和方法可比性分析［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2010，90（14）：993－997．

［10］徐克，池勝英，張東矗，等．三種化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)測定AFP和CA125結(jié)果可比性研究［J］．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，24（2）：120－123．