產(chǎn)后牛子宮內(nèi)菌群變化規(guī)律及致病性研究

胡文舉+宋艷畫(huà)+秦佳辰+石奎林+于文浩+劉遠(yuǎn)哲+王新莊

摘要：為探索河南省郟縣紅牛產(chǎn)后子宮內(nèi)菌群變化規(guī)律及各菌種的致病性與耐藥性，采集21頭產(chǎn)后健康的郟縣紅牛子宮內(nèi)容物，進(jìn)行了細(xì)菌計(jì)數(shù)、生化鑒定、致病性及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明，正常分娩后1 d牛子宮內(nèi)即呈現(xiàn)污染狀態(tài)，共分離出70株（9種）細(xì)菌，產(chǎn)后第8天子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量和種類均達(dá)到最大值，分別為（1.88±0.65）×107個(gè)/g和79株（9種），隨后細(xì)菌數(shù)量和種類開(kāi)始減少；產(chǎn)后第36天產(chǎn)吲哚金黃桿菌（Chryseobacterium indologenes）未分離到，第43天產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌（Streptococcus uberis）、屎腸球菌（Enterococcus Faecium）、棒狀桿菌屬（Corynebacterium）4種細(xì)菌未分離到。小鼠致病性試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸埃希菌（Escherichia coli）、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）、藤黃微球菌（Micrococcus luteus）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus）對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)，大腸埃希菌組小鼠腹腔攻毒后24 h內(nèi)全部死亡，其余組小鼠在腹腔攻毒后2 d內(nèi)全部死亡。大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林耐藥，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶均敏感。

關(guān)鍵詞：郟縣紅牛；子宮內(nèi)菌群；致病性；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S857.2+2；S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）17-4115-05

Intrauterine Flora Changes of Postpartum Cows and Its Pathogenicity

HU Wen-ju1，2； SONG Yan-hua3； QIN Jia-chen1； SHI Kui-lin4； YU Wen-hao1；

LIU Yuan-zhe1； WANG Xin-zhuang1

（1. Henan Agriculture University， Zhengzhou 450002， China；

2. Henan Radio & Television University， Zhengzhou， 450008， China；

3. Henan Vocational College of Agriculture， Zhongmou 451450， Henan， China；

4.Jiaxian Redcow Breeding Center of Pingdingshan City， Pingdingshan 467124， Henan， China）

Abstract： To study the flora changes of postpartum cows and the pathogenicity of bacteria and drug resistance， the uterine contents were collected from 21 health postpartum Jiaxian redcows for bacteria counting， biochemical identification， test of pathogenicity and drug resistance. The results showed that the uterus of cows were polluted one day after delivery and 70 strains （9 species） bacteria were isolated. The quantity and species of the bacteria reached the peak value （1.88±0.65×107/g and 79 strains（9 species）， then started falling. Chryseobacterium indologenes were not isolated 36 days after delivery and 43 days after delivery. There were four bacteria including Chryseobacterium indologenes， Streptococcus parauberis， Enterococcus faecium and Corpmbacterium were not isolated. Pathogenicity test showed that E.coli， Bacillus cereus， Micrococcus luteus and Staphylococcus epidermidis had high pathogenicity for mice. The mice in E.coli group died in 24 h after attack test， and in other groups died in 2 d. E.coli， Bacillus cereus， Micrococcus luteus， Staphylococcus epidermidis and Chryseobacterium indologenes were sensitive to ciprofloxacin， enrofloxacin， doxycycline， chloromycetin and ceftazidime but resistant to amoxicillin and ampicillin.

Key words： Jiaxian redcow； intrauterine flora； pathogenicity； drug sensitive test

隨著人工授精技術(shù)的普及和規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，子宮內(nèi)膜炎在母牛產(chǎn)科疾病中所占比例越來(lái)越大，致使良種母牛的繁殖潛力和生產(chǎn)性能無(wú)法充分發(fā)揮，給養(yǎng)牛業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。研究表明子宮內(nèi)膜炎是因?yàn)榇罅糠侵虏⌒晕⑸锴秩胱訉m后，在子宮內(nèi)過(guò)度繁殖引起的炎癥[2]，而產(chǎn)后牛子宮內(nèi)細(xì)菌的動(dòng)態(tài)變化存在一個(gè)可預(yù)測(cè)的短暫規(guī)律[3]，因此研究產(chǎn)后牛子宮內(nèi)菌群的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律對(duì)預(yù)防和治療牛子宮內(nèi)膜炎有重要的意義。

本試驗(yàn)對(duì)21頭產(chǎn)后健康的河南省郟縣紅牛不同時(shí)期子宮內(nèi)細(xì)菌進(jìn)行了分離，并對(duì)分離出的9種細(xì)菌的致病性及耐藥性進(jìn)行了研究，旨在探索郟縣紅牛產(chǎn)后子宮內(nèi)菌群變化規(guī)律，為臨床防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 動(dòng)物 在河南平頂山地區(qū)某牛場(chǎng)選取產(chǎn)期相近的郟縣紅牛21頭，所選牛產(chǎn)程均正常、無(wú)胎衣不下，無(wú)繁殖障礙性病史，體況良好。昆白系小鼠40只（22～25 g/只），其中雌小鼠18只，雄小鼠22只，均購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 培養(yǎng)基 肉湯A培養(yǎng)基、液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、血液瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、雙抗巧克力瓊脂培養(yǎng)基、改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基、厭氧菌瓊脂、MH肉湯均為青島高科園海博生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 采集 分別于分娩后第1天（分娩當(dāng)天記為0 d）、第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天進(jìn)行子宮內(nèi)容物采集。用0.1%高錳酸鉀溶液對(duì)奶牛外陰部清洗消毒后，將連接有5 mL注射器的滅菌輸精管插入其子宮腔中，回抽子宮內(nèi)容物。將約2 mL子宮內(nèi)容物置于事先稱重并滅菌的50 mL三角瓶?jī)?nèi)，再次稱重后加入少量滅菌生理鹽水，密封后置于含有冰塊的采樣箱內(nèi)，3 h內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)及相關(guān)檢測(cè)。

1.2.2 細(xì)菌計(jì)數(shù) 通過(guò)采樣前后三角瓶的質(zhì)量差，計(jì)算出所采集到的子宮內(nèi)容物質(zhì)量，然后在三角瓶中加入20 mL滅菌生理鹽水，充分搖勻后，繼續(xù)用滅菌生理鹽水定容至50 mL。取出1 mL定容后的液體，以10倍稀釋法依次稀釋樣品6次，每次稀釋完后從稀釋液中取出0.1 mL放入滅菌的平皿內(nèi)，立即倒入15 mL 45 ℃左右的1.5%營(yíng)養(yǎng)瓊脂，晃動(dòng)平皿使其混合均勻，待凝固后置于37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，選擇菌落數(shù)在30～300之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)樣品重復(fù)3次，取其平均值。細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)排除有明顯子宮內(nèi)膜炎癥狀的樣品。

1.2.3 細(xì)菌的分離純化與鑒定 取1 mL定容后的菌液接入肉湯A培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)18～24 h后，分別劃線接種于血液瓊脂培養(yǎng)基、雙抗巧克力瓊脂培養(yǎng)基、改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基和厭氧瓊脂中繼續(xù)培養(yǎng)。挑取生長(zhǎng)狀態(tài)不同的單個(gè)菌落，革蘭氏染色、鏡檢，根據(jù)細(xì)菌的染色特性并結(jié)合菌落形態(tài)和生長(zhǎng)特性進(jìn)行初步判斷和分類，然后分別接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基上進(jìn)行純化。挑取純化后的單個(gè)菌落采用全自動(dòng)微生物鑒定及分析系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌的生化鑒定。

1.2.4 致病性試驗(yàn) 將40只昆白系小鼠隨機(jī)均分成10組。第10組為對(duì)照組，其余各組腹腔內(nèi)分別注射1 mL各種純化后的細(xì)菌懸液（菌液濃度均調(diào)整為1.2×108 CFU/mL）。攻毒后注意觀察小鼠的精神狀態(tài)、飲食和死亡情況，及時(shí)剖解死亡小鼠，選取心、肝、脾等臟器進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，檢驗(yàn)是否與攻毒菌株相一致。

1.2.5 藥敏試驗(yàn) 將待試菌株制成懸液，用滅菌生理鹽水調(diào)整比濁度，使其達(dá)到0.5麥?zhǔn)蠁挝唬缓笥肕H肉湯按體積比1∶1 000稀釋備用。用菌液將藥物按兩倍稀釋法進(jìn)行稀釋，使每行各孔的藥物濃度依次為128、64、32…0 μg/mL，然后將96孔塑料板置于各菌株最佳培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)18～24 h。以無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)孔內(nèi)所含抗菌藥物的濃度為最低抑菌濃度（MIC）。每株細(xì)菌重復(fù)測(cè)定2次，結(jié)果取其平均值。

1.2.6 藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定 各菌種對(duì)不同藥物的耐藥、中敏、敏感臨界值按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）推薦的數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定[4]。藥敏試驗(yàn)中未列入CLSI推薦范圍的部分抗菌藥物，其結(jié)果判斷參考同類藥物標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)后牛子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量的變化

牛子宮內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可以看出，正常分娩后1 d牛子宮內(nèi)即呈現(xiàn)污染狀態(tài)，到產(chǎn)后第8天其子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量迅速增加，達(dá)到最大值（1.88±0.65）×107個(gè)/g，隨后細(xì)菌數(shù)量開(kāi)始減少，產(chǎn)后第22天平均為（5.66±1.09）×104個(gè)/g，產(chǎn)后第29天平均為（2.58±0.47）×103個(gè)/g，從產(chǎn)后第29天到產(chǎn)后第43天牛子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量處于緩慢減少的狀態(tài)。產(chǎn)后第36天有6頭牛未檢測(cè)到細(xì)菌存在，產(chǎn)后第43天有5頭牛檢測(cè)到細(xì)菌。產(chǎn)后第29天和第36天分別有2頭和1頭牛出現(xiàn)明顯子宮內(nèi)膜炎癥狀。

2.2 產(chǎn)后牛子宮內(nèi)細(xì)菌種類的變化

本試驗(yàn)中，共分離出蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）、大腸埃希菌（Escherichia coli）、產(chǎn)吲哚金黃桿菌（Chryseobacterium indologenes）等9種（311株）細(xì)菌。產(chǎn)后第1天共分離出70株細(xì)菌，產(chǎn)后第8天分離出的細(xì)菌株數(shù)最多，為79株，隨后分離出的細(xì)菌株數(shù)逐漸減少，第15天分離出63株，第22天分離出42株，第29天分離出30株，第36天分離出16株，第43天分離出11株。從分離出的細(xì)菌種類來(lái)看，產(chǎn)后第1天到第29天均為9種，第36天產(chǎn)吲哚金黃桿菌未分離到，第43天產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌（Streptococcus uberis）、屎腸球菌（Enterococcus faecium）、棒狀桿菌屬（Corynebacterium）4種細(xì)菌未分離到。分離出的藤黃微球菌（Micrococcus luteus）在各階段均有較高比例，最高達(dá)到了36.36%，其次是大腸埃希菌（Escherichia coli）、淺黃金色單胞菌（Chrysemonas luteola）、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus），表皮葡萄球菌（Staphylococcus）在產(chǎn)后第1天僅分離出5株，在其后的幾個(gè)階段該菌所占比例不斷增加，在產(chǎn)后第43天達(dá)到了27.27%。

2.3 攻毒小鼠臨床癥狀及致病性試驗(yàn)結(jié)果

小鼠攻毒后4～12 h，均出現(xiàn)精神萎靡，食欲廢絕，渾身發(fā)抖等臨床癥狀，攻毒8 h后，開(kāi)始出現(xiàn)小鼠死亡。大腸埃希菌組最先出現(xiàn)死亡病例，隨后小鼠死亡集中出現(xiàn)在攻毒后24～48 h，具體結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，大腸埃希菌組小鼠在腹腔攻毒后24 h內(nèi)全部死亡，蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌組小鼠在腹腔攻毒后2 d內(nèi)全部死亡，其余攻毒組在攻毒后3 d內(nèi)出現(xiàn)部分小鼠死亡。對(duì)死亡小鼠解剖后進(jìn)行細(xì)菌重分離，除淺黃金色單胞菌組外，其余各組均從病變臟器中回收到所接種的細(xì)菌。未死亡小鼠大部分在攻毒48 h后癥狀開(kāi)始逐漸減輕，攻毒72 h后未死亡小鼠大部分恢復(fù)正常。對(duì)恢復(fù)正常的小鼠進(jìn)行病原重分離，除棒狀桿菌屬外均未分離到接種菌；對(duì)未完全康復(fù)的小鼠進(jìn)行病原重分離，除攻毒屎腸球菌組外其余均分離到接種菌。對(duì)死亡小鼠進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)攻毒大腸埃希菌組小鼠病變最嚴(yán)重，均出現(xiàn)急性敗血癥，腹部脹氣，剖檢后可見(jiàn)小腸出現(xiàn)壞死，腸管脹氣并有大量黃色液體，脾臟和肝臟淤血并出現(xiàn)壞死，母鼠子宮也出現(xiàn)水腫、淤血等；攻毒其他菌種死亡小鼠腹腔內(nèi)有液體滲出，脾臟和肝臟出現(xiàn)部分壞死和出血點(diǎn)。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

選擇對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)的大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可以看出，5種細(xì)菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林耐藥，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶敏感。此外，蠟樣芽孢桿菌還對(duì)慶大霉素、安普霉素、粘菌素和鏈霉素表現(xiàn)為耐藥；表皮葡萄球菌對(duì)粘菌素、青霉素、磺胺氯吡嗪鈉和林可霉素耐藥；大腸埃希菌對(duì)青霉素、林可霉素耐藥；藤黃微球菌對(duì)安普霉素、粘菌素、鏈霉素、磺胺氯吡嗪鈉和林可霉素耐藥；產(chǎn)吲哚金黃桿菌對(duì)青霉素耐藥。因此，在防治牛子宮內(nèi)膜炎時(shí)應(yīng)盡量避免使用阿莫西林、氨芐西林、青霉素等藥物，可選擇環(huán)丙沙星、恩諾沙星等敏感藥物。

3 小結(jié)與討論

牛產(chǎn)后由于其子宮頸和陰道的開(kāi)張，外界和陰道內(nèi)的微生物容易進(jìn)入子宮腔內(nèi)，產(chǎn)后初期子宮腔及陰道內(nèi)的組織碎片和分泌物為微生物的繁殖提供營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)產(chǎn)后初期牛免疫力及子宮自凈能力低下，容易導(dǎo)致微生物的大量繁殖。張維軍等[5]的研究表明，奶牛產(chǎn)后第2天子宮內(nèi)呈現(xiàn)污染狀態(tài)，產(chǎn)后第8天子宮內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)達(dá)到最高，隨后開(kāi)始緩慢下降；王國(guó)卿[6]研究認(rèn)為產(chǎn)后第7天牛子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量最多，此后由于惡露減少，子宮防御能力加強(qiáng)，子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量逐漸減少，產(chǎn)后第39天子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量不可計(jì)。該結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)果相似。在機(jī)體健康時(shí)，大多數(shù)牛能憑借自身的防御系統(tǒng)，通過(guò)子宮的自凈功能排除病原微生物，在一定時(shí)期內(nèi)使子宮達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)。劉春杰[7]認(rèn)為健康牛在產(chǎn)后21 d內(nèi)通過(guò)子宮的自凈功能將子宮內(nèi)微生物排出體外，子宮開(kāi)始呈現(xiàn)無(wú)菌狀態(tài)，產(chǎn)后46～60 d子宮的感染率會(huì)下降到9%以下。本試驗(yàn)結(jié)果表明，產(chǎn)后第36天牛子宮內(nèi)逐漸呈現(xiàn)無(wú)菌狀態(tài)，產(chǎn)后第43天牛子宮感染率下降為26.31%。造成結(jié)果差異的原因可能與本試驗(yàn)采樣牛場(chǎng)的飼養(yǎng)管理與飼料營(yíng)養(yǎng)水平有關(guān)，本試驗(yàn)采樣牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理相對(duì)粗放，飼料營(yíng)養(yǎng)水平低，因而造成環(huán)境微生物菌群復(fù)雜，機(jī)體免疫力低下。

目前普遍認(rèn)為牛產(chǎn)后一段時(shí)間子宮處于一定的細(xì)菌污染狀態(tài)，但對(duì)于細(xì)菌的種類還沒(méi)有統(tǒng)一的結(jié)論。王國(guó)卿[6]的研究認(rèn)為污染子宮的細(xì)菌主要有葡萄球菌、大腸桿菌、芽孢桿菌、微球菌和鏈球菌；張維軍等[5]從產(chǎn)后健康奶牛子宮內(nèi)分離出的細(xì)菌主要有葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌、不動(dòng)桿菌、梭狀芽孢桿菌等。本試驗(yàn)分離到的細(xì)菌有蠟樣芽孢桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、表皮葡萄球菌、屎腸球菌、藤黃微球菌等9種細(xì)菌。各種報(bào)道的結(jié)果并不完全一致，這可能與地域、牛場(chǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理及營(yíng)養(yǎng)水平等因素有關(guān)。從細(xì)菌被清除出子宮的時(shí)間來(lái)看，產(chǎn)吲哚金黃桿菌在產(chǎn)后第36天即無(wú)法檢測(cè)到，產(chǎn)后第43天產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌、屎腸球菌、棒狀桿菌屬4種細(xì)菌無(wú)法檢測(cè)到；藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌3種細(xì)菌則隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，檢出率不斷提高。這說(shuō)明牛子宮對(duì)產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌、屎腸球菌、棒狀桿菌屬4種細(xì)菌的清除能力較強(qiáng)，而對(duì)藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌3種細(xì)菌清除能力較弱，在牛子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防過(guò)程中應(yīng)給予重視。

將分離到的9種細(xì)菌進(jìn)行小鼠致病性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)多數(shù)小鼠在攻毒后均表現(xiàn)出不同程度的精神萎靡，食欲廢絕，被毛粗亂，神經(jīng)癥狀包括后肢無(wú)力、四肢癱瘓和顫抖、抽搐等。生理鹽水對(duì)照組小鼠精神狀態(tài)良好，無(wú)異常癥狀。攻毒大腸埃希菌組8 h后，小鼠開(kāi)始出現(xiàn)死亡病例，剖檢后發(fā)現(xiàn)小鼠腸管呈黃色稀軟狀并出現(xiàn)脹氣，子宮發(fā)生水腫，肝臟、脾臟呈現(xiàn)黑褐色，肺臟有出血點(diǎn)；攻毒蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌組剖檢后發(fā)現(xiàn)肝臟、脾臟出現(xiàn)淤血、水腫，但其他臟器無(wú)明顯病理變化。從對(duì)小鼠致死性來(lái)看，蠟樣芽孢桿菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、藤黃微球菌對(duì)小鼠的致病性較強(qiáng)，其中大腸埃希菌攻毒后1 d內(nèi)可使小鼠死亡。李正國(guó)等[1]、陳星等[8]均從患有子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮內(nèi)分離出大腸埃希菌；本試驗(yàn)也從3例子宮內(nèi)膜炎患牛子宮中分離到了大腸埃希菌；這說(shuō)明在牛子宮內(nèi)大腸埃希菌屬于條件性致病菌，當(dāng)機(jī)體衰弱時(shí)可引起嚴(yán)重感染，并與其他疾病混合感染后引發(fā)子宮內(nèi)膜炎，嚴(yán)重者可引起全身疾病。

對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)的蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、大腸埃希菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌5種細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)5種細(xì)菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林產(chǎn)生耐藥性，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶敏感。這可能與養(yǎng)殖場(chǎng)長(zhǎng)期頻繁使用阿莫西林和氨芐西林進(jìn)行疾病治療有關(guān)。在治療子宮內(nèi)膜炎時(shí)建議不使用這兩種藥物。凌丁等[9]研究認(rèn)為治療子宮內(nèi)膜炎時(shí)，交叉用藥、輪換用藥能夠防止細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，定期進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，確定子宮內(nèi)膜炎感染菌種，選擇最有效的藥物，才能達(dá)到最佳治療效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李正國(guó)，宋華榮，易瑞卿，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎主要病原菌的分離鑒定及中藥藥敏試驗(yàn)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（2）：463-466.

[2] 葛利江，田文儒，宜長(zhǎng)和.母牛子宮內(nèi)膜免疫的調(diào)控[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2001（9）：31-32.

[3] 宜長(zhǎng)和，任鳳杰，吳之杰，等.奶?；撔宰訉m內(nèi)膜炎子宮黏膜組織的抗原定位[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，1997（3）：1-2.

[4] CLSI/（NCCLS）.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing；Fourteenth Informational Supplement[S].2005.

[5] 張維軍，楊少華，高運(yùn)東，等.產(chǎn)后健康奶牛子宮內(nèi)細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2007，28（1）：86-91.

[6] 王國(guó)卿.產(chǎn)后健康奶牛和子宮內(nèi)膜炎患牛子宮內(nèi)細(xì)菌的研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2000.23-25.

[7] 劉春杰.阿魏酸鈉抗炎分子機(jī)制及對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎療效初步觀察[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2013.6-7.

[8] 陳 星，胡松華，張克春，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（1）：43-44.

[9] 凌 丁，張業(yè)懷，莫文湛，等.南寧市郊奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定與耐藥性分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（5）：111-115.

2.3 攻毒小鼠臨床癥狀及致病性試驗(yàn)結(jié)果

小鼠攻毒后4～12 h，均出現(xiàn)精神萎靡，食欲廢絕，渾身發(fā)抖等臨床癥狀，攻毒8 h后，開(kāi)始出現(xiàn)小鼠死亡。大腸埃希菌組最先出現(xiàn)死亡病例，隨后小鼠死亡集中出現(xiàn)在攻毒后24～48 h，具體結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，大腸埃希菌組小鼠在腹腔攻毒后24 h內(nèi)全部死亡，蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌組小鼠在腹腔攻毒后2 d內(nèi)全部死亡，其余攻毒組在攻毒后3 d內(nèi)出現(xiàn)部分小鼠死亡。對(duì)死亡小鼠解剖后進(jìn)行細(xì)菌重分離，除淺黃金色單胞菌組外，其余各組均從病變臟器中回收到所接種的細(xì)菌。未死亡小鼠大部分在攻毒48 h后癥狀開(kāi)始逐漸減輕，攻毒72 h后未死亡小鼠大部分恢復(fù)正常。對(duì)恢復(fù)正常的小鼠進(jìn)行病原重分離，除棒狀桿菌屬外均未分離到接種菌；對(duì)未完全康復(fù)的小鼠進(jìn)行病原重分離，除攻毒屎腸球菌組外其余均分離到接種菌。對(duì)死亡小鼠進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)攻毒大腸埃希菌組小鼠病變最嚴(yán)重，均出現(xiàn)急性敗血癥，腹部脹氣，剖檢后可見(jiàn)小腸出現(xiàn)壞死，腸管脹氣并有大量黃色液體，脾臟和肝臟淤血并出現(xiàn)壞死，母鼠子宮也出現(xiàn)水腫、淤血等；攻毒其他菌種死亡小鼠腹腔內(nèi)有液體滲出，脾臟和肝臟出現(xiàn)部分壞死和出血點(diǎn)。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

選擇對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)的大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可以看出，5種細(xì)菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林耐藥，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶敏感。此外，蠟樣芽孢桿菌還對(duì)慶大霉素、安普霉素、粘菌素和鏈霉素表現(xiàn)為耐藥；表皮葡萄球菌對(duì)粘菌素、青霉素、磺胺氯吡嗪鈉和林可霉素耐藥；大腸埃希菌對(duì)青霉素、林可霉素耐藥；藤黃微球菌對(duì)安普霉素、粘菌素、鏈霉素、磺胺氯吡嗪鈉和林可霉素耐藥；產(chǎn)吲哚金黃桿菌對(duì)青霉素耐藥。因此，在防治牛子宮內(nèi)膜炎時(shí)應(yīng)盡量避免使用阿莫西林、氨芐西林、青霉素等藥物，可選擇環(huán)丙沙星、恩諾沙星等敏感藥物。

3 小結(jié)與討論

牛產(chǎn)后由于其子宮頸和陰道的開(kāi)張，外界和陰道內(nèi)的微生物容易進(jìn)入子宮腔內(nèi)，產(chǎn)后初期子宮腔及陰道內(nèi)的組織碎片和分泌物為微生物的繁殖提供營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)產(chǎn)后初期牛免疫力及子宮自凈能力低下，容易導(dǎo)致微生物的大量繁殖。張維軍等[5]的研究表明，奶牛產(chǎn)后第2天子宮內(nèi)呈現(xiàn)污染狀態(tài)，產(chǎn)后第8天子宮內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)達(dá)到最高，隨后開(kāi)始緩慢下降；王國(guó)卿[6]研究認(rèn)為產(chǎn)后第7天牛子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量最多，此后由于惡露減少，子宮防御能力加強(qiáng)，子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量逐漸減少，產(chǎn)后第39天子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量不可計(jì)。該結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)果相似。在機(jī)體健康時(shí)，大多數(shù)牛能憑借自身的防御系統(tǒng)，通過(guò)子宮的自凈功能排除病原微生物，在一定時(shí)期內(nèi)使子宮達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)。劉春杰[7]認(rèn)為健康牛在產(chǎn)后21 d內(nèi)通過(guò)子宮的自凈功能將子宮內(nèi)微生物排出體外，子宮開(kāi)始呈現(xiàn)無(wú)菌狀態(tài)，產(chǎn)后46～60 d子宮的感染率會(huì)下降到9%以下。本試驗(yàn)結(jié)果表明，產(chǎn)后第36天牛子宮內(nèi)逐漸呈現(xiàn)無(wú)菌狀態(tài)，產(chǎn)后第43天牛子宮感染率下降為26.31%。造成結(jié)果差異的原因可能與本試驗(yàn)采樣牛場(chǎng)的飼養(yǎng)管理與飼料營(yíng)養(yǎng)水平有關(guān)，本試驗(yàn)采樣牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理相對(duì)粗放，飼料營(yíng)養(yǎng)水平低，因而造成環(huán)境微生物菌群復(fù)雜，機(jī)體免疫力低下。

目前普遍認(rèn)為牛產(chǎn)后一段時(shí)間子宮處于一定的細(xì)菌污染狀態(tài)，但對(duì)于細(xì)菌的種類還沒(méi)有統(tǒng)一的結(jié)論。王國(guó)卿[6]的研究認(rèn)為污染子宮的細(xì)菌主要有葡萄球菌、大腸桿菌、芽孢桿菌、微球菌和鏈球菌；張維軍等[5]從產(chǎn)后健康奶牛子宮內(nèi)分離出的細(xì)菌主要有葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌、不動(dòng)桿菌、梭狀芽孢桿菌等。本試驗(yàn)分離到的細(xì)菌有蠟樣芽孢桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、表皮葡萄球菌、屎腸球菌、藤黃微球菌等9種細(xì)菌。各種報(bào)道的結(jié)果并不完全一致，這可能與地域、牛場(chǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理及營(yíng)養(yǎng)水平等因素有關(guān)。從細(xì)菌被清除出子宮的時(shí)間來(lái)看，產(chǎn)吲哚金黃桿菌在產(chǎn)后第36天即無(wú)法檢測(cè)到，產(chǎn)后第43天產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌、屎腸球菌、棒狀桿菌屬4種細(xì)菌無(wú)法檢測(cè)到；藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌3種細(xì)菌則隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，檢出率不斷提高。這說(shuō)明牛子宮對(duì)產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌、屎腸球菌、棒狀桿菌屬4種細(xì)菌的清除能力較強(qiáng)，而對(duì)藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌3種細(xì)菌清除能力較弱，在牛子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防過(guò)程中應(yīng)給予重視。

將分離到的9種細(xì)菌進(jìn)行小鼠致病性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)多數(shù)小鼠在攻毒后均表現(xiàn)出不同程度的精神萎靡，食欲廢絕，被毛粗亂，神經(jīng)癥狀包括后肢無(wú)力、四肢癱瘓和顫抖、抽搐等。生理鹽水對(duì)照組小鼠精神狀態(tài)良好，無(wú)異常癥狀。攻毒大腸埃希菌組8 h后，小鼠開(kāi)始出現(xiàn)死亡病例，剖檢后發(fā)現(xiàn)小鼠腸管呈黃色稀軟狀并出現(xiàn)脹氣，子宮發(fā)生水腫，肝臟、脾臟呈現(xiàn)黑褐色，肺臟有出血點(diǎn)；攻毒蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌組剖檢后發(fā)現(xiàn)肝臟、脾臟出現(xiàn)淤血、水腫，但其他臟器無(wú)明顯病理變化。從對(duì)小鼠致死性來(lái)看，蠟樣芽孢桿菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、藤黃微球菌對(duì)小鼠的致病性較強(qiáng)，其中大腸埃希菌攻毒后1 d內(nèi)可使小鼠死亡。李正國(guó)等[1]、陳星等[8]均從患有子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮內(nèi)分離出大腸埃希菌；本試驗(yàn)也從3例子宮內(nèi)膜炎患牛子宮中分離到了大腸埃希菌；這說(shuō)明在牛子宮內(nèi)大腸埃希菌屬于條件性致病菌，當(dāng)機(jī)體衰弱時(shí)可引起嚴(yán)重感染，并與其他疾病混合感染后引發(fā)子宮內(nèi)膜炎，嚴(yán)重者可引起全身疾病。

對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)的蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、大腸埃希菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌5種細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)5種細(xì)菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林產(chǎn)生耐藥性，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶敏感。這可能與養(yǎng)殖場(chǎng)長(zhǎng)期頻繁使用阿莫西林和氨芐西林進(jìn)行疾病治療有關(guān)。在治療子宮內(nèi)膜炎時(shí)建議不使用這兩種藥物。凌丁等[9]研究認(rèn)為治療子宮內(nèi)膜炎時(shí)，交叉用藥、輪換用藥能夠防止細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，定期進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，確定子宮內(nèi)膜炎感染菌種，選擇最有效的藥物，才能達(dá)到最佳治療效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李正國(guó)，宋華榮，易瑞卿，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎主要病原菌的分離鑒定及中藥藥敏試驗(yàn)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（2）：463-466.

[2] 葛利江，田文儒，宜長(zhǎng)和.母牛子宮內(nèi)膜免疫的調(diào)控[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2001（9）：31-32.

[3] 宜長(zhǎng)和，任鳳杰，吳之杰，等.奶?；撔宰訉m內(nèi)膜炎子宮黏膜組織的抗原定位[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，1997（3）：1-2.

[4] CLSI/（NCCLS）.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing；Fourteenth Informational Supplement[S].2005.

[5] 張維軍，楊少華，高運(yùn)東，等.產(chǎn)后健康奶牛子宮內(nèi)細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2007，28（1）：86-91.

[6] 王國(guó)卿.產(chǎn)后健康奶牛和子宮內(nèi)膜炎患牛子宮內(nèi)細(xì)菌的研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2000.23-25.

[7] 劉春杰.阿魏酸鈉抗炎分子機(jī)制及對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎療效初步觀察[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2013.6-7.

[8] 陳 星，胡松華，張克春，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（1）：43-44.

[9] 凌 丁，張業(yè)懷，莫文湛，等.南寧市郊奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定與耐藥性分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（5）：111-115.

2.3 攻毒小鼠臨床癥狀及致病性試驗(yàn)結(jié)果

小鼠攻毒后4～12 h，均出現(xiàn)精神萎靡，食欲廢絕，渾身發(fā)抖等臨床癥狀，攻毒8 h后，開(kāi)始出現(xiàn)小鼠死亡。大腸埃希菌組最先出現(xiàn)死亡病例，隨后小鼠死亡集中出現(xiàn)在攻毒后24～48 h，具體結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，大腸埃希菌組小鼠在腹腔攻毒后24 h內(nèi)全部死亡，蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌組小鼠在腹腔攻毒后2 d內(nèi)全部死亡，其余攻毒組在攻毒后3 d內(nèi)出現(xiàn)部分小鼠死亡。對(duì)死亡小鼠解剖后進(jìn)行細(xì)菌重分離，除淺黃金色單胞菌組外，其余各組均從病變臟器中回收到所接種的細(xì)菌。未死亡小鼠大部分在攻毒48 h后癥狀開(kāi)始逐漸減輕，攻毒72 h后未死亡小鼠大部分恢復(fù)正常。對(duì)恢復(fù)正常的小鼠進(jìn)行病原重分離，除棒狀桿菌屬外均未分離到接種菌；對(duì)未完全康復(fù)的小鼠進(jìn)行病原重分離，除攻毒屎腸球菌組外其余均分離到接種菌。對(duì)死亡小鼠進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)攻毒大腸埃希菌組小鼠病變最嚴(yán)重，均出現(xiàn)急性敗血癥，腹部脹氣，剖檢后可見(jiàn)小腸出現(xiàn)壞死，腸管脹氣并有大量黃色液體，脾臟和肝臟淤血并出現(xiàn)壞死，母鼠子宮也出現(xiàn)水腫、淤血等；攻毒其他菌種死亡小鼠腹腔內(nèi)有液體滲出，脾臟和肝臟出現(xiàn)部分壞死和出血點(diǎn)。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

選擇對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)的大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可以看出，5種細(xì)菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林耐藥，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶敏感。此外，蠟樣芽孢桿菌還對(duì)慶大霉素、安普霉素、粘菌素和鏈霉素表現(xiàn)為耐藥；表皮葡萄球菌對(duì)粘菌素、青霉素、磺胺氯吡嗪鈉和林可霉素耐藥；大腸埃希菌對(duì)青霉素、林可霉素耐藥；藤黃微球菌對(duì)安普霉素、粘菌素、鏈霉素、磺胺氯吡嗪鈉和林可霉素耐藥；產(chǎn)吲哚金黃桿菌對(duì)青霉素耐藥。因此，在防治牛子宮內(nèi)膜炎時(shí)應(yīng)盡量避免使用阿莫西林、氨芐西林、青霉素等藥物，可選擇環(huán)丙沙星、恩諾沙星等敏感藥物。

3 小結(jié)與討論

牛產(chǎn)后由于其子宮頸和陰道的開(kāi)張，外界和陰道內(nèi)的微生物容易進(jìn)入子宮腔內(nèi)，產(chǎn)后初期子宮腔及陰道內(nèi)的組織碎片和分泌物為微生物的繁殖提供營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)產(chǎn)后初期牛免疫力及子宮自凈能力低下，容易導(dǎo)致微生物的大量繁殖。張維軍等[5]的研究表明，奶牛產(chǎn)后第2天子宮內(nèi)呈現(xiàn)污染狀態(tài)，產(chǎn)后第8天子宮內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)達(dá)到最高，隨后開(kāi)始緩慢下降；王國(guó)卿[6]研究認(rèn)為產(chǎn)后第7天牛子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量最多，此后由于惡露減少，子宮防御能力加強(qiáng)，子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量逐漸減少，產(chǎn)后第39天子宮內(nèi)細(xì)菌數(shù)量不可計(jì)。該結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)果相似。在機(jī)體健康時(shí)，大多數(shù)牛能憑借自身的防御系統(tǒng)，通過(guò)子宮的自凈功能排除病原微生物，在一定時(shí)期內(nèi)使子宮達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)。劉春杰[7]認(rèn)為健康牛在產(chǎn)后21 d內(nèi)通過(guò)子宮的自凈功能將子宮內(nèi)微生物排出體外，子宮開(kāi)始呈現(xiàn)無(wú)菌狀態(tài)，產(chǎn)后46～60 d子宮的感染率會(huì)下降到9%以下。本試驗(yàn)結(jié)果表明，產(chǎn)后第36天牛子宮內(nèi)逐漸呈現(xiàn)無(wú)菌狀態(tài)，產(chǎn)后第43天牛子宮感染率下降為26.31%。造成結(jié)果差異的原因可能與本試驗(yàn)采樣牛場(chǎng)的飼養(yǎng)管理與飼料營(yíng)養(yǎng)水平有關(guān)，本試驗(yàn)采樣牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理相對(duì)粗放，飼料營(yíng)養(yǎng)水平低，因而造成環(huán)境微生物菌群復(fù)雜，機(jī)體免疫力低下。

目前普遍認(rèn)為牛產(chǎn)后一段時(shí)間子宮處于一定的細(xì)菌污染狀態(tài)，但對(duì)于細(xì)菌的種類還沒(méi)有統(tǒng)一的結(jié)論。王國(guó)卿[6]的研究認(rèn)為污染子宮的細(xì)菌主要有葡萄球菌、大腸桿菌、芽孢桿菌、微球菌和鏈球菌；張維軍等[5]從產(chǎn)后健康奶牛子宮內(nèi)分離出的細(xì)菌主要有葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌、不動(dòng)桿菌、梭狀芽孢桿菌等。本試驗(yàn)分離到的細(xì)菌有蠟樣芽孢桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、表皮葡萄球菌、屎腸球菌、藤黃微球菌等9種細(xì)菌。各種報(bào)道的結(jié)果并不完全一致，這可能與地域、牛場(chǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理及營(yíng)養(yǎng)水平等因素有關(guān)。從細(xì)菌被清除出子宮的時(shí)間來(lái)看，產(chǎn)吲哚金黃桿菌在產(chǎn)后第36天即無(wú)法檢測(cè)到，產(chǎn)后第43天產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌、屎腸球菌、棒狀桿菌屬4種細(xì)菌無(wú)法檢測(cè)到；藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌3種細(xì)菌則隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，檢出率不斷提高。這說(shuō)明牛子宮對(duì)產(chǎn)吲哚金黃桿菌、乳房鏈球菌、屎腸球菌、棒狀桿菌屬4種細(xì)菌的清除能力較強(qiáng)，而對(duì)藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌3種細(xì)菌清除能力較弱，在牛子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防過(guò)程中應(yīng)給予重視。

將分離到的9種細(xì)菌進(jìn)行小鼠致病性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)多數(shù)小鼠在攻毒后均表現(xiàn)出不同程度的精神萎靡，食欲廢絕，被毛粗亂，神經(jīng)癥狀包括后肢無(wú)力、四肢癱瘓和顫抖、抽搐等。生理鹽水對(duì)照組小鼠精神狀態(tài)良好，無(wú)異常癥狀。攻毒大腸埃希菌組8 h后，小鼠開(kāi)始出現(xiàn)死亡病例，剖檢后發(fā)現(xiàn)小鼠腸管呈黃色稀軟狀并出現(xiàn)脹氣，子宮發(fā)生水腫，肝臟、脾臟呈現(xiàn)黑褐色，肺臟有出血點(diǎn)；攻毒蠟樣芽孢桿菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌組剖檢后發(fā)現(xiàn)肝臟、脾臟出現(xiàn)淤血、水腫，但其他臟器無(wú)明顯病理變化。從對(duì)小鼠致死性來(lái)看，蠟樣芽孢桿菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、藤黃微球菌對(duì)小鼠的致病性較強(qiáng)，其中大腸埃希菌攻毒后1 d內(nèi)可使小鼠死亡。李正國(guó)等[1]、陳星等[8]均從患有子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮內(nèi)分離出大腸埃希菌；本試驗(yàn)也從3例子宮內(nèi)膜炎患牛子宮中分離到了大腸埃希菌；這說(shuō)明在牛子宮內(nèi)大腸埃希菌屬于條件性致病菌，當(dāng)機(jī)體衰弱時(shí)可引起嚴(yán)重感染，并與其他疾病混合感染后引發(fā)子宮內(nèi)膜炎，嚴(yán)重者可引起全身疾病。

對(duì)小鼠致病性較強(qiáng)的蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、大腸埃希菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌5種細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)5種細(xì)菌均對(duì)阿莫西林和氨芐西林產(chǎn)生耐藥性，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氯霉素、頭孢他啶敏感。這可能與養(yǎng)殖場(chǎng)長(zhǎng)期頻繁使用阿莫西林和氨芐西林進(jìn)行疾病治療有關(guān)。在治療子宮內(nèi)膜炎時(shí)建議不使用這兩種藥物。凌丁等[9]研究認(rèn)為治療子宮內(nèi)膜炎時(shí)，交叉用藥、輪換用藥能夠防止細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，定期進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，確定子宮內(nèi)膜炎感染菌種，選擇最有效的藥物，才能達(dá)到最佳治療效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李正國(guó)，宋華榮，易瑞卿，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎主要病原菌的分離鑒定及中藥藥敏試驗(yàn)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（2）：463-466.

[2] 葛利江，田文儒，宜長(zhǎng)和.母牛子宮內(nèi)膜免疫的調(diào)控[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2001（9）：31-32.

[3] 宜長(zhǎng)和，任鳳杰，吳之杰，等.奶?；撔宰訉m內(nèi)膜炎子宮黏膜組織的抗原定位[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，1997（3）：1-2.

[4] CLSI/（NCCLS）.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing；Fourteenth Informational Supplement[S].2005.

[5] 張維軍，楊少華，高運(yùn)東，等.產(chǎn)后健康奶牛子宮內(nèi)細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2007，28（1）：86-91.

[6] 王國(guó)卿.產(chǎn)后健康奶牛和子宮內(nèi)膜炎患牛子宮內(nèi)細(xì)菌的研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2000.23-25.

[7] 劉春杰.阿魏酸鈉抗炎分子機(jī)制及對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎療效初步觀察[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2013.6-7.

[8] 陳 星，胡松華，張克春，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（1）：43-44.

[9] 凌 丁，張業(yè)懷，莫文湛，等.南寧市郊奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定與耐藥性分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（5）：111-115.